HCV NS3丝氨酸蛋白酶及以其为靶位的抗感染研究进展

丙型肝炎病毒感染最显著的特征是慢性化，已经成为严重的社会公共卫生问题。目前治疗方法仅限于干扰素-利巴韦林联合使用，持续疗效有限而且副作用大，因此迫切需要寻找特异有效的抗病毒药物。HCV NS3基因编码的NS3蛋白具有丝氨酸蛋白水解酶、解旋酶和磷酸核苷酶活性，在病毒RNA复制和多聚蛋白前体的加工成熟中有着重要作用。因此，NS3丝氨酸蛋白酶的抑制剂是抗病毒的理想药物。本文就HCV NS3丝氨酸蛋白酶及以其为靶位的抗感染研究综述如下。     

膜联蛋白A2在登革病毒Ⅱ型入胞过程中作用的初步研究

目的　探讨膜联蛋白A2（annexin A2, ANXA2）在登革病毒Ⅱ型（dengue virus type Ⅱ, DENV-2）入胞过程中的作用。方法　通过敲低ANXA2和S100钙结合蛋白A10（S100A10）表达以及抗体阻断实验验证ANXA2在DENV-2复制周期中的作用,并进一步通过激光共聚焦显微镜观察、免疫共沉淀分析明确ANXA2与DENV-2 E蛋白的相互作用。结果　DENV-2感染ANXA2和S100A10敲低的细胞中,DENV-2 RNA水平显著降低;ANXA2抗体和DENV-2 E蛋白抗体可有效抑制DENV-2的入胞效率,细胞内病毒RNA水平显著低于对照组;此外,ANXA2在DENV-2感染细胞中由细胞质募集到细胞膜上,与DENV-2 E蛋白有相互作用。结论　ANXA2是DENV-2入胞过程中重要的宿主分子,有望为抗DENV-2研究提供新的靶点。     

单纯疱疹病毒1型药物敏感性测定及其阿昔洛韦耐药株的建立

目的 建立单纯疱疹病毒1型(HSV-1)药物敏感性的测定方法,并建立体外耐药病毒株. 方法 将HSV-1接种于乳兔肾细胞中,加入不同浓度的阿昔洛韦(ACV),培养72 h后固定、染色、清点空斑数并计算药物的半数抑制浓度(IC50),通过IC50来判断HSV-1的药物敏感性.将HSV-1在含ACV环境中连续培养9代,分别在第3、6和9代测定其IC50. 结果 ACV对HSV-1标准株SM44毒株的IC50为0.7μg/ml.HSV-1在含ACV的环境中连续培养3代后即产生了耐药性,第3、6和9代的IG50分别为7.2、34.2 μg/ml和85.3 μg/ml. 结论空斑抑制试验是测定病毒药物敏感性的有效、实用的方法,建立的体外耐药病毒株可用于HSV-1的耐药性研究.     

启发式教学法在医学微生物学教学中的应用

医学微生物学教学中，运用启发式教学法可激发学生学习兴趣，强化学生对所学知识的记忆和培养学生的创新精神，在运用启发式教学法时，应注意有效地组织学生，有效地引导学生，选择适宜的题材和营造创新思维的气氛。     

HIV-1 env基因序列分析及其与长期感染不进展现象相关性研究

目的研究HIV-1长期感染不进展现象与HIV-1 env基因变异的关系。方法用巢式聚合酶链反应(nested-PCR)对21例感染HIV-1毒株7年以上者外周血单一核细胞(PBMCs)的核酸样本进行扩增,获得HIV-1膜蛋白(env)基因的核酸片段,对其C2-V3及邻区350-450个核苷酸序列进行测定和分析,所得结果与HIV-1该亚型国际标准株进行比较,分析共享序列及突变序列,制作系统树,计算离散率。结果离散率和系统树分析21个毒株均为HIV-1 B亚型,毒株间基因离散率在2%左右,高于前期研究结果;未见V3环顶端四肽特征性GPGR和GRGQ,也未见前期研究曾经发现的脯氨酸向异亮氨酸的变异现象。结论HIV-1长期感染者体内毒株env基因无规律性突变。     

表皮葡萄球菌对大环内酯-林可酰胺-链阳菌素B的耐药基因型及同源性分析

目的深入了解引发医院感染的表皮葡萄球菌（简称“表葡菌”）对大环内酯-林可酰胺糖阳菌素B（MLS。）类抗生素的耐药机制。方法收集2003--2004年北京3家综合医院126株引发医院感染的表葡菌，检测其在红霉素（ERY）、克林霉素（CU）、喹努普丁／达福普丁中的MIC；用D试验区分诱导型（iMLSB）和泵出型（MS）耐药菌株。采用PCR检测ermA、ermB、ermC、msrA和mecA耐药基因，并用脉冲场凝胶电泳（PFGE）进行同源性分析。结果126株菌株对ERY和CLI耐药率高（分别为92．8％和84．1％）；在结构型（cMLS。）中，耐甲氧西林表葡菌（MRSE）占78．5％，而iMLS。中甲氧西林敏感株（MSSE）较多，占69．2％；enmC不仅在MRSE和MSSE中是最常见的耐药基因（70．8％和56．8％），而且在iMLSB型和cMLSB型中也占多数（76．9％和90．3％）；所有MS型菌株均检测出msrA；在ERY敏感菌株中未检测出相关耐药基因。PFGE分析显示，无特异的流行株；99．2％MLSB耐药表型相同的菌株分布于A—F型中，且无显著集中趋势。结论导致医院感染的126株菌株对MLS。类抗生素耐药率高，ermC是其常见耐药基因，对MLSB抗生素使用需谨慎、合理。     

分泌表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的重组卡介苗菌株的筛选

目的筛选获得分泌表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的重组卡介苗(BCG)菌株。方法采用多聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌毒株H37Rv中扩增出热休克蛋白60(Hsp60)基因及其信号肽序列α-ss，将测序正确的hsp60和α-ss基因分别克隆人大肠杆菌(E.coli．)-BCG穿梭载体pOLYG中，构建分枝杆菌分泌表达载体pDE22，按相应的酶切位点将ag85b和esat6按照不同的连接方式联合克隆入pDE22载体，分别命名为pDE22-Ag85B-ESAT6和pDE22-ESAT6-Ag85B，将纯化的重组质粒电穿入BCG，经潮霉素抗性筛选和PCR的方法鉴定出含目的基因的重组BCG阳性克隆。收集重组BCG的培养上清液，经浓缩和透析后，进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和固相化蛋白质免疫学测定(Western-blot法)分析。结果两株重组：BCG菌株的培养上清液分泌表达相对分子质量约37000的蛋白，且分别可与抗Ag85B和抗ESAT6蛋白免疫小鼠的血清有相应的结合条带。结论分泌表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的重组BCG菌株构建成功，有望为结核病的预防提供有效的疫苗。     

中药抗HIV的有效活性成分的研究进展

0 引言 艾滋病又称为获得性免疫缺陷综合征（Acquired Immuno-Deficiency Syndroma,AIDS）,是继癌症之后严重威胁人类健康和生存的一种传染性疾病．据联合国艾滋病规划署2008-07-29发布的报告,目前全球约有3300多万人感染艾滋病病毒（HIV）．在我国,艾滋病流行形势也十分严峻．引起艾滋病的病原体是人类免疫缺陷病毒（Human Immuno—deficiency Virus,HIV）,或称为艾滋病病毒．HIV侵入人体后主要破坏人体的免疫系统,使人体发生多种难以治愈的感染和肿瘤,     

食品微生物学理论教学的体会

根据食品微生物学的课程特点，从教学内容优化，多媒体课件的合理使用及多元化教学方式的尝试方面，阐述对食品微生物学理论教学的体会。     

半套式PCR扩增人抗HFRS病毒抗体基因及Fb段基因的克隆和序列分析

从肾综合征出血热恢复期患者外周血淋巴细胞(PBL)中提取细胞总RNA，反转录成cDNA。以之为模板，用半套式聚合酶链反应(PCR)扩增人IgG抗体Fd段及轻链基因，并将Fd段基因克隆入噬菌体载体pcomb3；经酶切鉴定后，再亚克隆入pGEM7zf，筛选阳性克隆测序。经计算机分析，Fd段基因的全长为639bp，编码213个氨基酸，属于人IgG2亚类。