结核分枝杆菌分泌蛋白MPT64的克隆、表达与鉴定

目的 :构建表达结核分枝杆菌分泌蛋白MPT6 4重组质粒 ,并在大肠杆菌中表达获得基因重组蛋白 .方法 :用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组扩增出MPT6 4基因片段 ,插入 pGEM T easy载体中 ,序列测定正确后 ,将其亚克隆到表达载体pProEXHTb中 ,在大肠杆菌DH5α中表达 .结果 :获得结核分枝杆菌MPT6 4成熟蛋白基因 ,经序列测定与GenBank公布的序列完全一致 ;表达蛋白经SDS PAGE分析 ,相对分子质量与文献报道一致 ;重组蛋白经蛋白印迹实验 ,在Mr2 .6× 10 4位置有特异条带 .MPT6 4蛋白在宿主菌中表达量约占菌体总蛋白的 13.5 % .结论 :基因重组表达的融合蛋白有可能作为有效抗原用于结核病的预防疫苗的研制和皮肤免疫诊断试剂的制备 .     

运用现代化教学手段，开展医学微生物学实验

医学微生物学实验课是以学生为主体进行的实践性活动，教师理论教授过程中的方式方法对学生的实验热情与操作有着很大关联．将现代化教学技术与手段贯穿干整个实验课进程之中，通过课前充分的准备，多媒体技术的辅助应用．可以使学生形象直观的了解实验原理、内容、仪器与操作方法，规范实验操作，提高实验兴趣。     

抗HSV－糖蛋白（gp30）单克隆抗体重链可变区基因的克隆及序列分析

目的：获得鼠抗ＨＳＶ－２型特异性糖蛋白（ｇｐ３０）单抗重链可变区基因，为基因工程改建及表达奠定基础。方法：从分泌高中和活性的鼠抗ＨＳＶ－２型特异性单抗杂交瘤细胞系中提取ＲＮＡ，逆转录成ｃＤＮＡ，用ＰＣＲ法扩增出抗体重链可变区基因，并克隆入质粒，随机挑选阳性克隆进行核酸序列分析．结果：基因全长３５７ｂｐ，编码１１９个氨基酸，含有维持抗体结构的半胱氨酸，序列内无终止码．结论：所克隆基因具备小鼠抗体重链可变区基因结构特征，与已确认的小鼠抗体ＶＨ基因有较高的同源性，隶属于Ｋａｂａｔ分类体系中的小鼠抗体重链（Ａ）亚组．     

结核杆菌cfp10真核载体的构建、表达与基因免疫

目的: 构建以结核分枝杆菌H37Rv cfp10基因为基础的基因疫苗. 方法: 采用BamH I和Xba I双酶切质粒pGEM-Teasy-CFP10中,10 g*L-1琼脂糖凝胶电泳回收约300 bp大小片段,以亚克隆法构建于真核表达载体pcDNA3.1的相应酶切位点. 阳性克隆提取质粒,体外电穿孔转化CHO细胞,RT-PCR法检测cfp10特异的mRNA的表达. 质粒肌注免疫BALB/c小鼠,ELISA检测小鼠血清中相应抗体的滴度. 结果: 用BamH I和XbaⅠ酶切鉴定证实目的基因正确插入载体pcDNA3.1,命名为pcCFP10; pcCFP10转化的CHO细胞RNA提取物中,RT-PCR扩增出300 bp大小的条带. 肌注免疫BALB/c小鼠,ELISA检测小鼠血清中相应抗体平均滴度为1∶ 4,000. 结论: 以CFP10的编码基因为基础的真核表达质粒的构建成功.     

结核分枝杆菌RPF蛋白的生物学特性及其在结核病疫苗研究中的应用

复活促进因子(resuscitation-promoting factor,RPF)最初是在藤黄微球菌(M.luteus)中发现,该因子可以在g×10-12水平以自分泌和旁分泌形式促进休眠菌的复活和生长,其机制可能是参与了细胞间的信号转导[1]。RPF除能促使休眠菌复活和生长以外,对正常生长的细菌也有效。由于RPF的功能类似于真核生物的生长因子,所以被称为细菌的生长因子[2]。目前已查明RPF氨基酸的顺序并确定了编码这种蛋白的基因,相似的RPF基因广泛分布在碱基G和C高比率含量的革兰阳性菌中。一、结核分枝杆菌(MTB)中存在编码RPF蛋白的基因经杂交试验证实在多种分枝…     

新的固相血球吸附试验检测EHF患者血清IgM抗体的研究

我们参照有关文献,建立了一种新的固相血球吸附试验(Solid-phase attachment of red cells,简称SPARC),用于流行性出血热(EHF)患者血清特异性IgM抗体的检测。     

检测HFRS患者血清IgM抗体的ELISA捕捉法的建立

肾综合征出血热(HFRS)在我国流行广泛,病死率较高。本病绝大多数患者在发病初期就有特异性IgM抗体产生,及时检出此类抗体对于HFRS的早期诊断和治疗有重要意义。我们曾建立一种检测IgM抗体的ELISA间接夹心法,其特异性和敏     

汉坦病毒嵌合基因G2S0.7与CTL多表位重组腺病毒的构建及免疫学分析

目的:构建含有汉坦病毒M基因(编码糖蛋白G2)和部分S基因(编码核蛋白主要抗原区段)以及S基因的多个CTL表位的多种重组腺病毒表达载体,并对这些重组腺病毒的免疫学特性进行研究。方法:构建含目的基因的重组腺病毒载体,并在VeroE6细胞中进行表达,利用纯化后的重组腺病毒免疫BALB/c小鼠,通过ELISA、微量细胞中和试验、T淋巴细胞增殖实验及CTL杀伤实验等方法检测免疫反应。结果:成功表达出可被抗汉滩病毒核蛋白及糖蛋白G2的特异性单克隆抗体(mAb)所识别的融合蛋白;重组的腺病毒可以有效诱导针对汉坦病毒NP及GP的体液免疫应答和细胞免疫应答;同时我们发现含有CTL表位的重组腺病毒比不含CTL表位的重组腺病毒可以诱导小鼠产生更为有效的细胞免疫反应。结论:构建的含CTL多表位的重组腺病毒可以有效的提高嵌合基因刺激细胞免疫应答的能力。