供肝切取与保存技术中几个关键环节的探讨

目的探讨提高和完善供肝切取与保存技术,提高器官利用率,减少肝移植术后近、远期并发症的发生。方法1995年5月至2005年6月我院实施了122例原位肝移植,采用腹腔器官联合快速切取技术进行了165例供肝和供肾联合切取,先行经肠系膜上静脉至门静脉插管,随即行腹主动脉插管,UW液原位灌洗。灌洗开始后优先处理胆道,用UW液经胆总管冲洗胆道。整块切取肝脏、双侧肾脏。回手术室进一步修剪,对变异的肝动脉(25例,20.5%)整形使之变为单支。结果165例供肝热缺血时间120~310 s,冷缺血时间260~840 min。移植肝通血20~30 min后均有金黄色胆汁分泌。术后均未发生原发性无功能和器官功能延迟。结论对于脑死亡的供者器官切取采取原位灌洗,整块切取及体外修整,可最大限度地缩短热缺血时间,有效避免变异血管损伤,进而提高供者器官的利用率。确切的胆道冲洗对避免肝内外胆管自溶和术后胆道狭窄非常重要。良好的供肝切取与保存是移植成功的保证,可有效地减少手术并发症,进而取得良好的疗效。     

原位肝移植肝动脉重建临床分析

目的 总结分析原位肝移植肝动脉重建经验,提高肝移植疗效和受体存活率.方法 总结1995年5月至2006年12月实施的183例肝移植临床资料,常规动脉重建163例,供者腹腔动脉干Carrell's袖片或肝总动脉-脾动脉汇合部与受者肝左-右动脉汇合部吻合25例,胃十二指肠-肝固有动脉汇合部吻合134例,腹腔动脉干吻合4例.采用髂动脉.腹主动脉搭桥20例.术后根据凝血酶原时间(PT),应用普通肝素或低分子肝素抗凝.术中、术后应用多普勒超声监测肝动脉血供.结果 183例肝移植患者中有6例发生肝动脉并发症,发生率为3.28%(6/183),其中肝动脉血栓形成(hepatic artery thrombosis,HAT)5例,肝动脉狭窄(hepatic artery stenosis,HAS)1例.常规通路动脉重建组动脉并发症发生率1.84%(3/163),髂动脉-腹主动脉搭桥组为15.0%(3/20),两者比较差异有统计学意义(X2=9.73,P＜0.01).6例并发症患者中有1例HAT于术后19 d死于多器官功能衰竭,另5例通过介入治疗治愈,死亡率16.7%.结论 正确地选择肝动脉重建吻合的部位和术后有效的抗凝治疗减少HAT和HAS的发生,多普勒超声的早期发现和放射介入的及时治疗可以挽救移植物,避免再移植.     

术中超声在肝脏肿瘤手术中的应用价值

目的 探讨术中超声在肝脏肿瘤手术中的应用价值.方法 对45例肝脏肿瘤患者行术中超声检查(Logiq 500型超声仪,5～7.5 MHz线阵式术中专用探头),并与术前超声(PHILIPSHDI 5000型超声仪,3.5～5 MHz凸阵式探头)和增强CT检查对比分析,比较三者在病灶检出率方面的差异.结果 术中超声对直径≥1 cm病灶的检出率为100%,高于术前超声(89.80%)和CT(97.96%)的检出率,但差异无统计学意义(术前超声xc2=3.372,P>0.05,CT Fisher确切概率为P=1.00);术中超声对直径<1 cm病灶的检出率为90.70%,明显高于术前超声的检出率(62.79%)和CT检出率(74.42%)(术前超声x2=9.382,CT x2=3.957,均P<0.05);术中超声对病灶的总体检出率为95.65%,明显高于术前超声的检出率(77.17%)和CT检出率(86.96%)(术前超声x2=13.378,CT x2=4.381,均P<0.05),所有新发现的病灶都在术中超声的引导下行手术切除或无水乙醇瘤内注射.结论 与术前影像学检查相比,术中超声可以提高隐匿部位和微小病灶的检出率,有助于指导外科操作和手术治疗.     

利用供者髂血管重建门静脉和肝动脉肝移植1例

2008年1月我科收治1例肝硬化门静脉血栓形成伴钙化、肝功能失代偿期、贲门周围血管离断术后的病人,利用间置供者髂血管重建门静脉和肝动脉成功地为该例病人施行了改良背驮式肝移植术,术后效果满意.     

不同免疫抑制剂对肝移植受者外周血中调节性T淋巴细胞比例的影响

目的 探讨西罗莫司(SRL)和钙调磷酸酶抑制剂(CNI)对肝移植受者外周血中CD4+CD25high T淋巴细胞水平的影响.方法 排除肝移植远期移植肝功能异常的受者,将移植肝功能长期(超过2年)稳定的受者47例纳入研究,其中免疫抑制方案使用SRL者15例(SRL组),使用CNI(均为他克莫司)者32例(CNI组).以同期38名健康成人志愿者作为正常对照.使用流式细胞仪检测各组受试者外周血中单个核细胞CD4、CD25及Foxp3的表达水平,比较各组间外周血中CD4+CD25high调节性T淋巴细胞(Treg细胞)的差异.结果 与正常对照组相比,CNI组外周血淋巴细胞中CD4+ CD25high T淋巴细胞的比例显著减少(P<0.05),SRL组CD4+ CD25high T淋巴细胞的比例显著升高(P<0.05).SRL组、正常对照组和CNI组受试者外周血中CD4+ CD25high Foxp3+ Treg 细胞占CD4+ T淋巴细胞的比例依次降低,分别为1.88%(1.56%～2.60%)、1.15%(0.57%～1.48%)和0.84%(0.46%～1.45%),3组间两两比较,差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05).CD4+ CD25 high T淋巴细胞表达Foxp3的阳性率超过95%,CD4+ CD25 low T淋巴细胞表达Foxp3的阳性率低于20%,CD4+ CD25-T淋巴细胞不表达Foxp3.结论 SRL可促进肝移植受者外周血中Treg细胞水平的升高,而CNI可降低Treg细胞的水平.     

受体血诱导大鼠肝移植免疫耐受的机制探讨

目的将受体血预先经门静脉输入供体，探讨肝移植后免疫排斥反应的变化。方法将LEW大鼠和ACI大鼠作为受体和供体。移植前7d将受体血经门静脉输入供体，移植后检测移植肝内供体源性树突状细胞，检测移植肝组织内IFN-γmRNA的表达，检测移植肝内浸润细胞的凋亡。结果移植前7d受体血经门静脉输入供体组的生存时间显著延长，为（33．7±2．6）d，无处置组为（10．1±0．7）d。移植肝组织内IFN-γmRNA有明显表达，移植肝内检测到大量供体源性树突状细胞。移植肝的浸润淋巴细胞凋亡显著多于无处置组。结论移植肝内浸润淋巴细胞凋亡抑制了肝移植排斥反应。     

1种新型功能性杂交胰岛β细胞系的建立

 目的通过应用基因转染及细胞融合技术构建永生化细胞,建立1种功能良好、无致瘤性、增殖可控的杂交胰岛β细胞系。方法通过脂质体介导逆转录病毒载体SSR69转染至原代成纤维细胞中,筛选稳定表达SV40 LTag的永生化细胞。提取大鼠胰岛,通过胰蛋白酶及DNA酶裂解成单胰岛单细胞。对永生化成纤维细胞及单个胰岛β细胞进行电融合,通过有限稀释法获得杂交胰岛β细胞克隆。比较杂交及正常β细胞内胰岛素的含量及对葡萄糖刺激胰岛素释放反应。通过RT-PCR 及Western blot分析杂交胰岛β细胞中SV40 LTag ,insulin ,glucokinase （GK ）及glucose transporter-2 (Glut-2 )基因的表达。结果建立的永生化成纤维细胞系的增殖能力明显优于原代成纤维细胞 (P <0.05)。成功获得杂交胰岛β细胞克隆,其细胞呈短梭形或扁圆形,且具有贴壁生长等特性。透射电子显微镜下可见细胞内胰岛素分泌颗粒,杂交与正常胰岛β细胞之间细胞内胰岛素含量、胰岛素释放指数及insulin,GK,Glut- 2蛋白及mRNA表达水平无统计学差异(P >0.05),但2种细胞内insulin,GK,Glut- 2的表达水平显著高于RIN-m5F细胞(P <0.05)。结论可通过永生化成纤维细胞及单个胰岛β细胞电融合诱导生成杂交胰岛β细胞,且杂交细胞能够对葡萄糖的变化产生应答反应。     

基质细胞衍生因子-1对间质干细胞迁移的影响

目的:观察基质细胞衍生因子-1(SDF-1)在体内外对大鼠骨髓间质干细胞(rMSCs)的趋化诱导作用,探讨SDF-1对rMSCs迁移影响的可能机制。方法:应用体外细胞迁移实验及大鼠脑梗死模型体内移植,观察SDF-1对rMSCs的迁移影响。流式细胞术与RT-PCR检测rMSCs的CXC趋化因子受体4(CXCchemokinereceptor4,CXCR4)表达。结果:在SDF-1存在时,rMSCs迁移活跃,应用抗体封闭CXCR4后,这种迁移显著减弱。体内移植的rMSCs主要聚集在脑梗死灶周围,但在封闭CXCR4后,这种聚集现象大大减弱。流式细胞术示仅小部分rMSCs表面表达CXCR4,但经TritonX-100处理后,表达CXCR4的rMSCs增加。结论:SDF-1可通过CXCR4对rMSCs起趋化作用,针对这种作用可望调控干细胞向靶组织的趋化聚集量,达到治疗目的。     

阻断ICOS分子对小鼠移植胰岛功能的影响

目的:拟观察小鼠同种异体胰岛移植排斥反应中,可诱导共刺激分子(Inducible costimulator,ICOS)的表达情况及阻断其对排斥反应的影响。方法:供体为BALB/C小鼠,受体为C57BL/6。随机分成4组,每组10只。对照组:单纯胰岛移植,不给ICOSmAb处组;实验1、2、3组:分别于移植后1、3、5d腹腔内注射ICOSmAb50、100、200?g/kg。术后观察小鼠的血糖变化和移植胰岛组织病理学改变;采用微量全血3H-胸腺嘧啶掺入法检测单个核细胞在刀豆蛋白A刺激下的增值程度;流式细胞仪检测外周血T细胞亚群及ICOS在CD4+细胞/CD8+细胞表面的表达情况。结果:实验2组小鼠血糖维持正常时间和实验3组相同,差异无统计学意义,而与对照组和实验1组相比,差异有统计学意义;术后7d,对照组和实验1组单个核细胞在刀豆蛋白刺激下的增值程度明显强于实验2组和实验3组,差异有统计学意义;术后7d,对照组和实验1组ICOS分子表达上调明显,并且以CD4+细胞表面表达为主,与实验2组和实验3组相比,差异有统计学意义;术后7d,实验2组和实验3组小鼠肾被膜下胰岛素免疫组化染色强度均高于实验1组和对照组。结论:ICOS分子在小鼠同种异体胰岛移植排斥反应中表达上调,以CD4+细胞为主;ICOS单克隆抗体(ICOSmAb)通过阻断ICOS共刺激信号途径,可明显减轻小鼠胰岛移植后排斥反应的发生,显著延长移植胰岛有功能存活时间;ICOSmAb的最佳给药剂量为100μg/kg。     

肝门胆管癌三维成像解剖学研究

目的探讨肝门胆管癌三维成像解剖学特点,为肝门胆管癌患者术前评估和手术方案制定提供参考。方法回顾性分析2014年7月至2018年3月中国医科大学附属第一医院收治的103例肝门胆管癌患者的MSCT影像资料,用Myrian软件对肝、门静脉、肝动脉、胆管等进行三维重建,研究其解剖学特点。结果 103例患者中,肝门部门静脉变异率为14. 6%,典型分支型、三叉型、工字型的比例分别为85. 4%、2. 9%、11. 7%。肝门部胆管变异率为10. 7%,可分为右后胆管汇入左肝管、右后胆管汇入肝总管、三支同时汇入肝总管,其比例分别为3. 9%、3. 9%、2. 9%。肝动脉变异率为21. 4%,肝动脉受侵比例为40. 0%,门静脉受侵比例为13. 6%。结论肝门部肝动脉、门静脉及围肝门部胆管变异较多,三维重建能够清晰地显示肝内外血管、扩张胆管的立体解剖情况并真实反映肿瘤的毗邻关系及侵袭程度,具有重要的临床应用价值。