Gitelman综合征SLC12A3基因突变研究

目的分析和确定Gitelman综合征相关基因SLC12A3突变位点,以提高对该病的认识和理解。方法通过直接测序的方法寻找和确定12例Gitelman综合征患者相关基因SLC12A3的突变位点。选取50例健康正常人作为对照,评估发现的突变位点。结果共确定SLC12A3基因8个突变位点,其中5个为新突变位点,包括2个错义突变：Cys430Gly和Leu571Pro;2个缺失突变：1384delG和346～353delACTGATGG;1个非移码插入突变： 997insCys。3个已报道过的突变,其中包括2个错义突变：Thr60Met和Asp486Asn;1个缺失突变：2883-2884delAG。12例患者中8例携带Thr60Met纯合或杂合突变,大部分患者为复合杂合突变。结论基因突变分析对诊断Gitelman综合征有重要价值。Thr60Met可能是中国Gitelman综合征患者较常见的突变。Gitelman综合征特异的表型和基因型之间的联系目前较难确定。     

垂体瘤发病相关基因的大规模筛选及鉴定

目的：探讨垂体瘤与垂体组织差异表达基因的大规模筛选及鉴定。方法：垂体无功能腺瘤及正常重体组织cDNA文库构建，大规模表达序列标签（expressed sequence thain reation,RT-PCR)鉴定。结果：从无功能腺瘤和正常垂体组织分别获得1253和7222个质量满意的ESTs；垂体瘤中已知基因的品种数200个，经组织表达谱差异比较的统计学软件处理，在这些已知基因中，差异的可靠性≥0.99者38个，≥0.95者130个；其中与细胞生长、分化相关的G2类基因共17个；6个经半定量RT-PCR证实4个基因的表达在垂体瘤中明显高于正常垂体。结论：与细胞生长、分化相关的G2类基因MEIS2、SMT3C、C1D、BUB3在垂体瘤中表达高于正常垂体，推测可能与垂体瘤的发生有关。     

汉族先天性房室间隔畸形患者GATA-4基因的突变分析

目的 探讨先天性房室间隔畸形患者GATA-4基因突变情况以及其基因型和表现型之间的关系.方法 选择50例汉族先天性房室间隔畸形患者和100名汉族健康者,用聚合酶链反应方法扩增GATA-4基因6个外显子编码区和邻近序列,聚合酶链反应产物纯化后以自动测序仪测序,然后与NCBI数据库中GATA-4基因的序列进行比较.结果 在汉族先天性房窜间隔畸形患者中发现GATA-4基因2个新的杂合子突变,分别位于第2号外显子的His28Tyr和位于第7号外显子的His436Tyr.结论 转录因子GATA-4基因突变可能与汉族先天性房室间隔畸形的发生有关.     

正常人肾上腺组织基因表达谱的研究

建立正常人肾上腺组织基因表达目录。方法肾上腺文库构建、大规模表达序列标签（ＥＳＴｓ）测序及生物信息学分析。结果基因／蛋白表达类的基因在肾上腺组织表达最高,代谢类基因次之。前３位高表达基因均为类固醇激素合成酶类及相关蛋白。肾上腺表达ＣＲＨ、尿皮素（ＣＲＨ相关蛋白）黑色素浓集素（ＭＣＨ）、可卡因和安菲他明调节转录物（ＣＡＲＴ）及垂体腺苷酸环化酶活化多态（ＰＡＣＡＰ）等激素及各类受体,包括细胞因子,神经     

甲状腺眼病球后组织不同肌群受累差异的原因初探

目的甲状腺眼病患者球后组织不同部位的眼外肌受累严重程度不同, 但机制不明。本研究旨在探究不同部位眼外肌中促甲状腺激素受体(thyroid stimulating hormone receptor, TSHR)表达的差异与眼外肌受累程度不同之间的关系。方法分离大鼠的球后组织中的内直肌、外直肌、上直肌和下直肌, 通过免疫荧光和荧光定量PCR检测TSHR在4条眼外肌的表达水平。收集斜视手术患者的眼外肌组织, 通过荧光检测TSHR的表达及其表达的细胞类型。结果荧光定量PCR结果显示, TSHR在大鼠球后组织内直肌中的表达明显高于外直肌、上直肌和下直肌(内直肌对外直肌, P=0.012;内直肌对上直肌, P=0.015;内直肌对下直肌, P=0.013), 但胰岛素样生长因子1受体(insulin-like growth factor 1, IGF-1R)无差异。双色免疫荧光结果显示, TSHR与肌卫星细胞的分子标志PAX7共表达, 且大鼠和人的内直肌中的表达明显高于另外三条眼外肌。结论 TSHR在内直肌肌卫星细胞中特异性高表达, 可能是甲状腺眼病内直肌最容易受累的原因。     

Clinical and molecular genetic analysis for 7 patients from 5 pedigrees with 17α-hydroxylase/17, 20 lyase deficiency

Objective To investigate the clinical and genetic characteristics of 7 patients from 5 families with 17α-hydroxylase/17, 20 lyase deficiency (17OHD) and the CYP17A1 mutation in Chinese. Methods Clinical features and laboratory data were collected from 5 families with 17OHD. PCR direct sequencing was performed to screen the mutation of CYP17A1 gene of the patients. Polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism(PCR-RFLP) and sequencing were performed to screen the mutations of CYP17A1 gene in 288 healthy individuals from Shandong province. Results Seven patients (5 of them were 46, XX; 2 were 46, XY) had typical clinical presentation of sexual infantilism, hypertension and hypokalemia. Hormone profile indicated decreased plasma cotisol and sex hormones, and elevated blood adrenocorticotrophic hormone (ACTH). TAC329AA and H373L in exon 6 and D487_ F489del in exon 8 were identified from the patients. One heterozygote for D487_F489del was identified in 288 healthy controls. Conclusion The TAC329AA and D487_F489del of the CYP17A1 gene were the most frequent mutations in Chinese with 17OHD. There might be certain frequency of heterozygotes for D487_ F489del in Chinese population.     

围生期甲减对大鼠脑甲状腺激素受体基因表达的影响

目的探讨甲状腺激素缺乏对甲状腺激素受体基因表达的影响及其与甲减性脑损害的可能关系.方法以丙基硫氧嘧啶溶液灌胃造成大鼠围生期甲减模型,部分甲减仔鼠每日腹腔注射T4 2μg/100g体重.收集出生后5、15、25d的正常、甲减及T4-替代仔鼠脑组织,用竞争性RT-PCR法测定脑甲状腺激素受体α1(TRα1)和甲状腺激素受体β1(TRβ1)mRNA水平.结果与同日龄正常对照仔鼠相比,围生期甲减大鼠脑TRα1和TRβ1mRNA水平明显增加.T4-替代可使脑TRα1和TRβ1mRNA水平降低,但仍未降至正常对照水平.结论甲状腺激素对TRα1和TRβ1mRNA表达有降调节作用,甲状腺激素缺乏可引起发育期大鼠脑TRα1和TRβ1基因表达的增加.TRα1和TRβ1mRNA表达的增加可能增强特定的辅阻遏因子的作用,从而参与甲减性脑损害的形成.     

多重巢式和定量PCR联合应用提高SARS病毒检测率

目的寻求一种可靠、可行的对急性严重呼吸道综合征病毒的早期诊断方法.方法应用多重巢式PCR联合荧光实时定量方法,对广州地区91份确诊和疑似病例标本、25份健康志愿者标本同时进行检测.结果25份健康志愿者标本经两种方法检测均为阴性.91份确诊和疑似病例标本经多重巢式PCR方法检测,阳性标本数53例,总阳性检测率58.24%;荧光实时定量PCR检测阳性标本数68例,阳性检出率74.73%;两种方法联合,阳性标本数76例,阳性检出率83.52%.结论多重巢式PCR联合荧光实时定量方法可进一步提高SARS病毒的阳性检出率,也为今后应对可能发生的其它突发性传染病病毒的检测提供分子诊断基础.     

2型糖尿病药物治疗的分子机制

随着世界范围内2型糖尿病的流行与人口老龄化，以胰岛素分泌不足和伴胰岛素抵抗为主要致病机制的2型糖尿病已成为国内外研究热点。但是许多现有的2型糖尿病的药物治疗的分子机制尚不明确。随着分子生物学研究的开展及对2型糖尿病发病关键机制的认识加深：葡萄糖依赖的胰岛素分泌功能受损、脂毒性、肌肉组织的胰岛素抵抗逐渐成为药物治疗的靶点。     

正常人垂体组织基因表达谱的研究

目的 建立正常人垂体组织基因表达谱。方法 垂体ｃＤＮＡ文库构建、大规模表达序列标记（ＥＳＴ）测序及生物信息学处理。结果 在所测的７２２２条可分析的ＥＳＴ中,２９４９条（４１％）为已知基因,其中参与基因／蛋白表达者最高（２３．２％）,１３．７％的基因与内分泌相关,１８．１％的基因参与信号转导。前２位高表达的基因是促生长素和催乳素。垂体表达甘丙肽、可卡因和安非他明调节的转录肽（ＣＡＲＴ）及黑色素浓集（