抗恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶单克隆抗体的研制与胶体金免疫层析方法的建立

目的 制备抗恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶(GDH)的单克隆抗体(McAb),将其标记胶体金,建立一种诊断恶性疟的胶体金免疫层析方法。方法 用基因重组的GDH蛋白免疫Balb/C小鼠,采用杂交瘤细胞技术制备McAb,测定其免疫球蛋白亚类及其亲和力。用protein-G亲和层析纯化抗体并用胶体金标记,建立胶体金免疫层析方法,选择最佳反应模式对疟疾血样进行检测。结果 筛选出6株能稳定分泌抗GDH单克隆抗体的杂交瘤细胞株,单抗亚类均为IgG₁,亲和常数(κ)介于1×10^-8~2.82×10^-10。以镜检法为参照,建立的胶体金免疫层析方法检测恶性疟的敏感性为86.66%,特异性为96.43%。结论 建立的胶体金免疫层析方法检测恶性疟快速、简便、可靠,有望开发成为恶性疟快速诊断试剂盒。     

抗幽门螺杆菌单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)全菌的单克隆抗体并对其特异性进行初步鉴定。方法用培养的幽门螺杆菌超声破菌后的上清和沉淀为抗原分别免疫BALB／c小鼠,通过杂交瘤技术制备单克隆抗体并测定抗体免疫球蛋白亚类、效价及亲和力,用重组表达的Hp Lpp20、HspA、urease A、CagA、urease B、catalase蛋白鉴定抗体。结果共获得34株抗Hp的单克隆抗体,其中抗上清31株和抗沉淀3株,34株抗体中针对Lpp20、HspA、urease A、CagA、urease B、catalase蛋白的抗体分别为3、2、4、1、5、2株,目前已鉴定的部分单克隆抗体的亚类均为IgGl,细胞培养上清的效价为1:16-1:32,腹水效价为1:32000～1:64000,抗体亲和常数介于1×10-10mol／L-5．2×10-12mol／L。结论获得特异性针对幽门螺杆菌的单克隆抗体,为幽门螺杆菌的诊断和疫苗研究奠定基础。     

基于Mimox工具分析幽门螺杆菌Catalase模拟表位

目的 利用Mimox软件分析幽门螺杆菌Catalase蛋白模拟表位的性质,并与手工比对结果进行比较.方法 将源于噬菌体随机肽库筛选技术获得的5个Catalase模拟表位输入Mimox网站,参数设定为默认值,进行模拟表位的比对,寻找共同序列并分析其性质.结果 从ClustalW界面比对结果看,氨基酸P、T、S、L、A出现频率较高,通过统计学的方法推导出的共同序列为-[ HST] X[ DST] FRPXA [ TNQ][ LV][FW]T-,其中氨基酸P(80％)和A(60％)的出现频率较高.通过JalView界面推导出的共同序列为-H-DFRP-AT-T-,保守性上氨基酸T(分值8)、P(分值6)、D(分值5)比较高；特性上氨基酸T(分值2.4595077)、P(分值2.235784)、R(分值2.1615076)比较高；共同性(consensus)上氨基酸P(80％)、A(60％)、T(60％)比较高,与先前手工比对得出的结论基本相符.结论 结合噬菌体筛选技术和生物信息学Mimox工具对模拟表位进行分析,可以获得较全面的表位信息.     

融合表达Fas死亡信号激发域的重组载体FasAD-pTYB2的构建

目的构建融合表达Fas死亡信号激发域(Fasactivationdomain,FasAD)的重组载体FasAD-pTYB2。方法应用半巢式逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)技术克隆Fas死亡信号激发域cDNA片段FasAD,插入通用载体pGEM-T中鉴定,然后装入Intein表达型原核载体pTYB2中,经IPTG(isopropylthio-β-D-galactoside)诱导表达融合蛋白。结果DNA序列测定显示克隆的cDNA片段序列正确。初步获得融合蛋白的表达,经Western-blotting鉴定,融合蛋白具有良好的Fas抗原性。结论上述结果提示可利用该表达型重组质粒制备人Fas死亡信号激发域多肽/intein的融合蛋白。     

疟疾研究的最新进展

迄今疟疾仍然是严重威胁人类健康的寄生虫病，每年约有300万人死于疟疾，其中90％发生在贫穷的非洲撒哈拉以南地区；进入21世纪，人类在疟疾的研究领域中取得了一系列重要的研究成果。2002年塞莱拉公司绘制的恶性疟原虫及其冈比亚按蚊的基因组序列图谱，被称之为疟疾研究领域的“里程碑”。人类基因组草图的绘制，恶性疟原虫及其主要传播媒介——冈比亚按蚊的基因密码的破译，     

指导医学生物技术专业本科生毕业实习的体会

本科毕业实习是本科教学最后一个重要的实践性教学环节,是学生创新思维、综合素质与实践能力培养效果的全面检验。本文针对在高等医学院校实习的生物技术专业学生的实际情况,从课题选题、开题报告、实验研究等几个基本环节总结实习带教模式和经验,为提高本科生毕业实习质量进行了积极的探索。     

卡介菌多糖核酸对小鼠DC2.4细胞的影响

目的：研究卡介菌多糖核酸（BCG-PSN）对小鼠DC2.4细胞的影响.方法：用5 μg/mL（BCG-PSN5组）、20 μg/mL（BCG-PSN20组）、50 μg/mL（BCG-PSN50组）BCG-PSN刺激小鼠DC2.4细胞,用倒置显微镜观察细胞生长状态,流式细胞仪检测主要组织相容性复合物（MHC-Ⅱ）类分子及协同刺激分子CD83、CD86的表达水平,用ELISA方法检测上清液中IL-12的含量.结果：BCG-PSN20组、BCG-PSN50组的CD83、CD86、MHC-Ⅱ分子表达水平高于空白对照组（P〈0.05）,IL-12的浓度亦高于空白对照组;BCG-PSN5组与空白对照组差异无统计学意义（P〉0.05）.结论：BCG-PSN可能通过促进DC2.4细胞成熟和分泌IL-12调节Th1/Th2平衡,发挥治疗AD的作用.     

幽门螺杆菌尿素酶A基因的克隆、表达及其抗原性的鉴定

目的构建幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)标准株NCTC11639尿素酶A(UreaseA,UreA)编码基因的重组质粒,测定、分析其核酸序列,并在E.coli中表达,研究其抗原性。方法应用PCR技术从HpDNA染色体中扩增UreA编码基因片段,将其克隆至pMD18-T载体上进行序列测定,并与GenBank上公布的其它Hp菌株基因序列进行比较,再将目的基因克隆至表达载体pGEX-4T-1上进行表达和纯化,用Western-blot检测产物的抗原性并用于对24株抗Hp全菌小鼠单克隆抗体的鉴定。结果扩增的UreA基因全长675bp(登录号为DQ141577),与GenBank上公布的其它Hp菌株的UreA核酸序列的同源性为95%～98%,表达的UreA融合蛋白分子量为52000,表达产物可被病人血清和全菌免疫的小鼠血清识别,29株抗Hp小鼠单克隆抗体中有4株是针对UreA抗原的。结论重组UreA具有较好的抗原性,为Hp检测试剂和疫苗的研究奠定基础。     

幽门螺杆菌尿素酶B基因的克隆、表达及其抗原性的鉴定

目的构建含人幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)尿素酶B(UreaseB,UreB)编码基因的重组质粒,测定、分析其核苷酸序列,并在E.coliTop10中表达,研究其抗原性。方法应用PCR技术从HpDNA染色体中扩增UreB编码基因片段,将其T-A克隆和测序,并与GenBank公布的其它Hp菌株基因序列比较,再将目的基因克隆至表达载体pGEX-4T-1中进行表达,用GST亲和层析对其进行纯化,纯化产物用于对29株小鼠抗Hp-全菌单克隆抗体(mAb)的鉴定及与Hp感染患者血清进行Westernblot。结果扩增的UreB基因全长1704bp,并在GenBank上登录(No.DQ141576),与GenBank公布的其它Hp菌株的核酸同源性为97%～99%,表达的UreB融合蛋白的相对分子量为91000。29株小鼠抗Hp-全菌mAb中有6株是针对UreB抗原的,纯化产物可被病人血清和抗UreB的鼠单克隆抗体识别。结论重组UreB具有较好的抗原性,为Hp检测诊断和疫苗的研究奠定了基础。