幽门螺杆菌标准株NCTC11639 CagA基因的克隆表达及其抗原性的鉴定

幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）是慢性消化道疾病的主要致病菌。本研究利用基因工程技术构建CagA基因并进行了表达，为CagA疫苗和诊断抗原的研究奠定基础。 一、材料和方法 1．菌株来源和质粒：Hp标准株NCTC11639由本校微生物教研室保存；E．coli DH5α和TOP10及表达载体pGEX-4T-1由本室保存。     

幽门螺杆菌Lpp20抗原的原核表达及其临床应用

目的 获得原核重组表达的人幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)脂蛋白(lipoprotein20,Lpp20),并将其用于Hp感染的血清学检测.方法 应用PCR技术从Hp标准株NCTC11639染色体DNA中扩增出Lpp20的编码基因片段,先进行T-A克隆和测序,并与Genbank公布的其它Hp菌株基因序列比较,再将目的 基因克隆至表达载体pGEX-4T-1上,在E.coli TOP10中进行表达并进行GST-亲和层析纯化,用Western blot方法检测纯化产物Lpp20与Hp感染患者血清的反应,以Lpp20为包被抗原建立ELISA法对143份血样进行检测,并以试剂盒为参照.结果 扩增的Lpp20基因全长528 bp(GenBank登录号为DQ106902),与GebBank上公布的其它Hp菌株的序列相比较,核苷酸序列的同源性为96%～97%,推定氨基酸序列的同源性为98%～100%,表达的Lpp20融合蛋白分子量约为48 kDa,纯化产物可被Hp感染患者血清识别,以重组的Lpp20抗原建立的ELISA法检测Hp感染与试剂盒没有显著性差异.结论 重组Lpp20蛋白具有较好的抗原性,可用Hp感染的临床血清学检测及流行病学研究.     

重组恶性疟原虫乳酸脱氢酶的纯化及免疫活性测定

目的:研究恶性疟原虫乳酸脱氢酶(LDH)重组蛋白纯化和复性的最佳条件。方法:重组质粒PGEX-4T-1-LDH在E.coli BL21中表达，表达产物用酶裂解法洗涤、变性、复性、Q-Sepharose High Performance离子交换层析方法纯化。结果:获得具有生物活性的蛋白，其纯度达到95％。结论:此方法操作简便，纯化效果好。     

番荔枝内酯体外抑制人胃癌细胞活性研究

目的探究番荔枝内酯对人胃癌细胞体外活性的影响。方法分别采用MTT实验、黏附实验和划痕实验考察番荔枝内酯对4种人胃癌细胞AGS、MKN45、BGC823和SGC7901生长活性、黏附能力和迁移能力的影响。结果番荔枝内酯抑制人胃癌细胞AGS、MKN45、BGC823和SGC7901的生长并呈剂量依赖性,其IC50值分别为5.32、6.25、5.46、4.43μg/mL;抑制人胃癌细胞黏附能力并呈剂量依赖性;抑制人胃癌细胞的迁移能力并呈剂量依赖性。结论番荔枝内酯体外可以有效抑制人胃癌细胞的活性,有望被开发成治疗胃癌的候选药物。     

不同反应性抗体分子产生机制的研究

抗体拥有丰富的多样性，提供大量不同的结合部位以识别环境中数以百万计的各种抗原分子。据估计，一个个体所产生的抗体的不同类型（据估计约为10^8）比体内所有其他蛋白质加在一起还多，而且这些抗体类型的数量也多于基因组中的基因数。抗体分子的多样性是如何产生的？近百年来各种学说试图解释这一现象，其中最著名的是20世纪40年代Pauling提出的“诱导假说”（‘Instructive’hypotheses）和20世纪50年代Burnet提出的克隆选择学说。诱导假说认为抗原分子可以作为模板诱导已形成构象的抗体分子进行折叠。假说提出后，由于缺乏有力的实验证据而逐渐被经杂交瘤技术和免疫球蛋白V、D、J重排实验所证实的克隆选择学说所取代，从此克隆选择学说成为解释抗体多样性的经典学说。     

疟疾研究的最新进展

迄今疟疾仍然是严重威胁人类健康的寄生虫病,每年约有300万人死于疟疾,其中90％发生在贫穷的非洲撒哈拉以南地区;进入21世纪,人类在疟疾的研究领域中取得了一系列重要的研究成果。2002年塞莱拉公司绘制的恶性疟原虫及其冈比亚按蚊的基因组序列图谱,被称之为疟疾研究领域的"里程碑"。人类基因组草图的绘制,恶性疟原虫及其主要传播媒介 一冈比亚按蚊的基冈密码的破译,意味着人类获得了完整研     

紫珠属植物化学、药理及临床应用进展

紫珠属Callicarpa L.植物来源于马鞭草科,世界上该属植物有190余种,我国现有46种,主要分布在长江流域以南各省[1].     

卵巢癌肿瘤标记物HE4基因的分子克隆与蛋白表达

目的构建HE4基因及蛋白表达系统,用于卵巢癌的早期诊断。方法提取卵巢癌细胞H08910的总RNA,利用RT-PCR技术扩增HE4基因,然后将该片段进行T-A克隆并测序鉴定,纯化回收后亚克隆于原核表达载体PGEX-4T-1中,然后提取质粒,酶切鉴定,最后经IPTG诱导,原核表达重组子在TOP10宿主菌进行表达,并进行SDS-PAGE、WesternBlot分析与鉴定。结果应用RT-PCR技术,从卵巢癌HO8910的总RNA中扩增到一条大小约为400bp的片段,经T-A克隆与测序鉴定,证实此片段为HE4基因,将PGEX-4T-1重组子转化入宿主菌,用IPTG诱导菌体表达HE4重组蛋白,经SDS-PAGE电泳和WesternBlot鉴定证实,在相对分子量约39000处可见明显的特异性的高表达条带。结论已成功克隆HE4基因,并经IPTG诱导在TOP10宿主菌中表达了相应的蛋白,为进一步制备卵巢癌的早期诊断试剂奠定基础。     

幽门螺杆菌Catalase基因的克隆、表达及其抗原性鉴定

目的：构建含人幽门螺杆菌（Hpylori，Hp）过氧化氢酶（catalase，KatA）编码基因的重组质粒，测定、分析其核酸序列，并在E.coli中表达，研究其抗原性。方法：应用PCR技术从HpDNA染色体中扩增KatA编码基因片段，将其T-A克隆和测序，并与GenBank公布的其他Hp菌株的基因序列比较，再将目的基因插入至融合表达载体pGEX-4T-1中进行表达，用GST亲和层析对其进行纯化。纯化产物用于对29株小鼠抗Hp-全菌单克隆抗体（mAb）的鉴定及与Hp啊感染患者血清进行Western blot。结果：KatA基因全长为1 515 bp，并在GenBank上登录（No．DQ333889），与GenBank公布的其他Hp菌株的核酸的同源性为96％～97％，表达的KatA融合蛋白的相对分子质量（Mr）为85 000，29株小鼠抗Hp全菌mAb中有4株mAb是针对KatA的，表达产物可被Hp感染患者的血清特异性识别。结论：重组KatA具有较好的抗原性，为坳检测试剂和疫苗的研究奠定了基础。     

幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白抗体水平与胃癌的相关性

目的 探讨幽门螺杆菌(HP)中性粒细胞激活蛋白(NAP)抗体水平与胃癌的相关性.方法 应用ELISA方法,对正常人和HP感染患者外周血中的NAP抗体水平进行检测,并用PCR方法检测HP临床菌株中nap基因存在状况.结果 所有检测的HP临床菌株中都存在napA基因;正常人血清中NAP抗体阳性率为42.6%;胃癌患者血清HP-NAP抗体阳性率为97.5%,明显高于胃溃疡患者92.9%和慢性胃炎患者85.7%的抗体阳性率;胃癌患者NAP抗体水平明显高于胃炎患者,但与胃溃疡患者无明显差异;NAP抗体水平与患者年龄无明显相关性.结论 NAP抗体水平与胃癌有一定相关性,提示NAP蛋白可能有致胃癌的作用.本研究为HP相关性胃癌的致病机制、诊断和疫苗研究提供基础.