人源受体hGPCRc工程细胞株的建立及其应用

目的建立孤儿G蛋白偶联受体(OrphanGproteincoupledreceptors,oGPCRs)配基筛选体系并应用于化合物的筛选。方法利用RTPCR从人结肠组织获得oGPCR成员hGPCRc的氨基酸编码序列,在利用相关软件对hGPCRc的结构特点进行分析的基础上,构建hGPCRc之表达载体pcDNA3.1(+)hGPCRc,转染CHOK1细胞获得CHOhGPCR工程细胞株,将不同化合物作用于细胞株,用Fluo3为分子探针检测细胞内钙离子浓度变化,以分析化合物中是否为该受体的特异性配基。结果生物信息学分析得到:hGPCR定位于人染色体13q32.2,对应的氨基酸序列组成了7个跨膜区段的结构域,在进化树上与人源P2Y1受体最亲近,应属于人类GPCR成员;成功得到CHOhGPCRc工程细胞株;所检测化合物作用于细胞株并没有引起胞内钙离子的波动,很可能没有活化hGPCRc。结论hGPCRc是一个与已知人P2Y1最近的成员,但基于CHOhGPCRc工程细胞株的第二信使筛选结果表明,hGPCRc并不被P2Y1的已知配基活化因此很可能属于不同于P2Y1的嘌呤类受体新亚型。     

肠炎宁糖浆过滤工艺的改进研究

目的：改进肠炎宁糖浆的过滤制备工艺。方法：以涤纶滤布替代原滤纸置于板框过滤机上,并添加滑石粉做助滤剂,用于过滤肠炎宁糖浆,即得澄清制剂,并与原滤纸进行对比。结果：改进工艺同样可获得澄清制剂,并符合质量要求。结论：改进过滤工艺良好,具有减轻劳动强度,且生产成本低的优势。     

全氟辛酸对HK-2 细胞的毒性及对α-酮戊二酸盐受体1 表达的影响

目的： 研究全氟辛酸(perfluorooctanoic acid, PFOA)对HK-2细胞的毒性,及其对α-酮戊二酸盐受体1(oxoglutarate receptor 1,OXGR1)表达的影响。方法：采用MTT法检测不同浓度(0、0.1、1、10、100、1 000 μmol/L)PFOA对HK-2细胞增殖的影响。RT-PCR法检测0、100、300 μmol/L PFOA对HK-2细胞中OXGR1、琥珀酸盐受体1(succinate receptor 1,SUCNR1)、缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)mRNA表达的影响。当PFOA为300或0 μmol/L时,采用MTT法检测不同浓度(0、1、10、100、1 000、10 000 μmol/L) OXGR1配基α-酮戊二酸钠(α-ketoglutarate sodium, AKG)对HK-2细胞增殖的影响。流式细胞术检测300 μmol/L PFOA和100 μmol/L AKG共同作用HK-2细胞48 h后细胞的凋亡情况。结果：在培养24 h条件下,PFOA达1 000 μmol/L时可表现出毒性作用(P<0.01)。在培养48或72 h条件下,PFOA≥100 μmol/L时表现出毒性作用(P<0.01)。RT-PCR结果显示,PFOA可上调HK-2细胞中OXGR1 mRNA表达(P<0.01),但对SUCNR1及HIF-1α mRNA表达无明显影响(P>0.05)。MTT及流式细胞术检测结果显示,AKG与PFOA可协同作用抑制HK-2细胞增殖(P<0.01)并诱导细胞凋亡(P<0.05)。 结论：PFOA对HK-2细胞具有增殖抑制作用,并可上调细胞OXGR1 mRNA表达;PFOA可诱发HK-2细胞凋亡;AKG可与PFOA产生协同作用,该协同作用可能与OXGR1有关。     

曲酸对辐射损伤小鼠免疫系统的影响

目的：探讨曲酸对辐照后小鼠免疫系统的影响。方法将20只雄性C57小鼠随机分为正常组、模型照射组、曲酸低、高剂量组。正常组动物不做任何处理,其他3组动物在照前27 h分别单次皮下注射无菌蒸馏水、75及300 mg/kg的曲酸溶液,注射体积为0．2 ml/20 g体质量。3组动物经4 Gy 60 Coγ射线单次照射。照后第2天及第8天分两批处死小鼠,分别测定小鼠的脾淋巴细胞转化能力及脾脏和胸腺指数,并制作组织病理学切片观察其形态学变化。结果与模型照射组比较,300 mg/kg曲酸给药组小鼠的脾淋巴细胞转化能力、脾脏和胸腺指数均显著提高（P＜0．01）,而且脾脏和胸腺的组织形态学变化改善明显;与正常组比较,模型照射组小鼠的上述指标均显著受损。结论急性辐射可明显损伤小鼠的免疫系统;曲酸能够增强淋巴细胞的增殖能力,对辐照后小鼠的免疫系统有显著的保护作用。     

复方鲜竹沥液的工艺改进

目的改进复方鲜竹沥液制剂处方中薄荷油的添加工艺,得到澄清、质量合格的制剂。方法利用吐温-80的增溶作用,提高薄荷油的溶解性。将薄荷油加入吐温-80中,充分混匀后加至鲜竹沥药中充分搅拌、过滤,即得澄清制剂。结果制剂澄清,质量合格。结论该方法可行,工艺简单而稳定,更适合生产企业。     

造血细胞凋亡在射线诱发小鼠血虚症中的作用

血虚症是祖国医学体系重要的征候群之一，其发病机制尤其是分子机制的阐明对于入认识血虚证及相关疾病具有重要意义，细胞凋亡介入了多种生理、病理过程，与造血器官的发育、成熟及血液系统病密切相关，本研究旨在探讨造血细胞亡与血虚症的关系，选择成年Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠作为实验对象，经不同剂量（２．５、５．５、７．５Ｇｙ）γ射线照射后，小鼠在７ｄ左右表现出不同程度的血虚症；各剂量组外周血白细胞均明显下降，小鼠皮毛