SLE患者外周血单一核细胞介导T淋巴细胞对血管内皮细胞黏附的实验研究

目的 探讨活动期SLE患者外周血单一核细胞(PBMC)是否介导了T淋巴细胞对血管内皮细胞的黏附.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),活动期SLE PBMC培养上清液预刺激48 h,通过RT-PCR检测PBMC培养上清液诱导HUVEC黏附分子的表达;划痕实验检测PBMC培养上清液诱导内皮细胞运动迁移能力的改变;HUVEC与T细胞共培养,研究PBMC培养上清液预刺激是否影响T细胞对HUVEC的黏附.结果 HUVEC经过活动期SLE PBMC培养上清刺激后,内皮细胞黏附分子ICAM-1mRNA,VCAM-1 mRNA和E-钙黏蛋白mRNA表达明显增加,而IL-17抗体能明显抑制黏附分子的表达.黏附分子表达增加介导了内皮细胞运动能力增加,介导T细胞对内皮细胞的黏附,而IL-17中和抗体能抑制T细胞对内皮细胞的黏附和抑制内皮细胞的运动迁移.结论 活动期SLE PBMC培养上清液可以通过诱导血管内皮细胞黏附分子表达,黏附T细胞,介导狼疮血管炎的发生.     

Th17与自身免疫病

Th17是最近发现的CD4 效应T细胞的新亚群.初始T细胞在TGF-β和IL-6的共同作用下分化发育成为Th17细胞.在其分化发育过程中,RORγt是Th17细胞的特异性转录因子.分化成熟的Th17可以分泌IL-17,IL-21,IL-22等多种细胞因子,其中IL-17在多种自身免疫疾病和炎性疾病中起关键作用.使用抗IL-17的抗体或抑制Th17细胞的分化,可以有效减轻疾病的症状.Th17细胞的发现为自身免疫性疾病和与其相关的炎性疾病的发病机制及防治对策开辟了新的研究思路和方向.     

小鼠胸腺细胞发育过程中CD4+CD25+T细胞变化的体内外比较

目的比较研究小鼠体内外胸腺细胞CD4^＋CD25^＋双阳性T细胞发育的动态变化,为天然调节性T细胞的研究提供基础数据。方法采用14．5天龄胚鼠胸腺进行体外培养,以FACS检测不同时间点胸腺细胞的表型变化,同时计数每个胸腺小叶的细胞数变化。结果胸腺在体内发育的第14．5、15、16、17、18、19天CD4^＋CD25^＋双阳性T细胞的比例、细胞的数量与在体外胸腺培养的第1～6天在胸腺细胞中的比例、细胞数发育趋势相似;CD4^＋CD25^＋双阳性T细胞占CD4^＋T细胞的比例分别为8．19％、16．41％、24．06％、13．62％、8．10％、2．35％,占CD25^＋细胞的比例分别为0．34％、1．08％、2．40％、10．59％、32．51％、34．04％。与体内结果相似,胸腺细胞体外培养的结果显示：在培养的第1～6天,CD4^＋CD25^＋T细胞占CD4^＋T细胞的比例分别为58．29％、12．14％、6．08％、17．78％、9．06％、4．04％,占CD25^＋T细胞的比例分别为3．75％、10．81％、17．20％、51．93％、61．64％、80．06％。结论体外培养的CD4^＋CD25^＋双阳性胸腺细胞数量和比例变化与体内发育变化趋势一致,在体外培养第4天（约等于18．5天胚鼠）和体内发育的第17天该群细胞比例最大．这将为天然调节性T细胞的发生、发育学研究提供有效的参考。     

Chitosan-DNA疫苗诱导Th1型特异性免疫应答

目的　在我们前期研究发现脱乙酰壳多糖 (chitosan)包裹质粒DNA形成的chitosan pcDNA3 VP1疫苗基因免疫诱生较高水平特异性免疫应答的基础上 ,探讨该疫苗诱导T辅助细胞 (Th)应答的类型 ,为chitosan DNA新型疫苗的分子设计奠定基础。方法　以chitosan pcDNA3 VP1、pcDNA3 VP1和 pcDNA3分别滴鼻免疫BALB/c小鼠 ,以ELISA法检测VP1体外表达和IgG亚型 ;以3 H TdR掺入法检测淋巴细胞增殖反应 ;并通过RT PCR检测了小鼠心肌内细胞因子表达情况。结果　chitosan pcDNA3 VP1体外转染后VP1的表达水平与 pcDNA3 VP1转染组无显著差异 (P >0 .0 5 ) ,表明chitosan的加入不改变 pcDNA3 VP1质粒在体外细胞内的表达 ;chitosan pcDNA3 VP1组脾淋巴细胞和肠系膜淋巴细胞增殖指数分别达 3.0和 2 .74 ,均显著高于 pcDNA3 VP1组和 pcDNA3组 (P <0 .0 1) ;chitosan pcDNA3 VP1免疫可显著增强IgG2a的生成 ,第 6周和第 12周IgG2a/IgG1比值分别为 2 .2 6和4 4 .2 ,而 pcDNA3 VP1组IgG2a表达稍高于IgG1、IgG2b和IgG3表达 ,IgG2a/IgG1比值为 1.6 3(P <0 .0 5 ) ;细胞因子检测表明chitosan pcDNA3 VP1组IFN γ表达显著高于IL 4 ,相对定量后IFN γ/IL 4比值为 2 .1;而 pcDNA3 VP1、pcDNA3组分别为 1.2 5和 0 .78。结论　chitosan pcDNA     

PA-MSHA抗肿瘤效应的免疫机制研究

 目的  研究铜绿假单胞菌甘露糖敏感血凝菌毛株(pseudomonas aeruginosa mannose sensitive hemagglutinin,PA-MSHA)处理树突状细胞(dendritic cells,DCs)后对其功能及激活T细胞杀伤肿瘤细胞效应的影响。方法  取小鼠骨髓来源的DC,观察PA-MSHA体外处理后对DC表面分子、吞噬功能及T 细胞杀伤功能的影响。结果   PA-MSHA处理的DC其表面分子CD40、I-E表达显著上升,吞噬功能显著下降,由DC诱导的活化T细胞对肿瘤细胞的杀伤效应显著高于对照组。结论  PA-MSHA能有效促进DC成熟并增强抗肿瘤免疫效应。     

集聚蛋白在淋巴细胞活化中的作用（摘要）

目的研究在神经突触形成中发挥重要作用的集聚蛋白（agrin）是否在淋巴细胞中表达并影响淋巴细胞的活化和免疫突触的形成。方法 应用RT—PCR检测集聚蛋白在静止和活化淋巴细胞中的表达。并应用实时定量PCR检测分析集聚蛋白的表达量与淋巴细胞活化之间的关系；用抗集聚蛋白抗体观察其对淋巴细胞增殖和免疫突触形成的影响；应用共聚焦显微镜观察集聚蛋白是否参与免疫突触的形成。结果 RT—PCR结果显示集聚蛋白在静止和活化的淋巴细胞中均有表达，且经过实时定量PCR分析发现．集聚蛋白的表达和淋巴细胞的活化密切相关；当集聚蛋白被阻断后淋巴细胞的增殖被显著抑制；经共聚焦显微镜观察发现，集聚蛋白在活化的淋巴细胞中以帽化结构形式存在。且和CD3分子共定位，抗集聚蛋白抗体可以明显减少这种帽化结构的形成。结论 在神经突触中发挥重要作用的集聚蛋白同样存在于淋巴细胞．可能通过影响淋巴细胞的免疫突触的形成参与淋巴细胞的活化。     

不同T细胞亚群对超抗原SEA反应性的差异

目的　在体内和体外研究SEA再次刺激后Vβ3 CD4 和Vβ3 CD8 T细胞亚群的免疫反应 ,探讨CD4 和CD8 T细胞亚群对超抗原SEA反应性的差异。方法　分离小鼠超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)应答性Vβ3 CD4 和Vβ3 CD8 两个T细胞亚群 ,检测其对SEA再次刺激的增殖反应及产生IL 2活性。结果　Vβ3 CD4 和Vβ3 CD8 T细胞亚群对SEA再次刺激所诱导的增殖反应以及产生IL 2活性的能力有显著差异 (P <0 .0 1)。结论　SEA单次刺激时Vβ3 CD4 和Vβ3 CD8 T细胞亚群反应性相似 ,再次刺激时Vβ3 CD8 呈显著低反应性。     

MicroRNA-7对非小细胞肺癌表柔比星化疗的增敏作用

目的:研究microRNA-7(miR-7)对非小细胞肺癌A549和H1299细胞表柔比星(epirubicin,EPI)化疗的增敏作用及其机制。方法:EPI、miR-7 mimics单独或联合处理A549和H1299细胞后,CCK-8法检测A549和H1299细胞的增殖,Annexin-V/PI染色流式细胞术检测A549和H1299细胞的凋亡,实时定量PCR检测A549和H1299细胞中EGFR及Raf-1mRNA的表达。结果:单独使用EPI或转染miR-7 mimics均可抑制A549和H1299细胞的增殖(P<0.05),而转染miR-7 mim-ics后再以50～400 ng/ml EPI处理,较单独EPI处理显著增强对A549和H1299细胞增殖的抑制作用(P<0.05)。当miR-7mimics与EPI联用时,A549和H1299细胞的凋亡率则分别较EPI单独处理组增加(54.9±0.4)%和(67.2±0.5)%(均P<0.01),且伴随EGFR及Raf-1 mRNA表达量的显著下降(P<0.01),A549细胞中分别降低(68.0±6.0)%和(78.2±3.9)%,H1299细胞中分别降低(94.8±6.2)%和(87.8±4.3)%。结论:miR-7可通过下调EGFR及Raf-1 mRNA的表达,协同EPI抑制非小细胞肺癌A549和H1299细胞的增殖,并促进细胞凋亡。