GM-CSF对抗原化抗体基因免疫TH细胞应答的调节作用

目的研究GM-CSF(粒-单核巨噬细胞集落刺激因子)与抗原化抗体联合基因免疫时,GM-CSF对TH细胞应答的调节作用。方法在编码免疫球蛋白重链的质粒中分别克隆黏蛋白1(MUC1)中特异性PDTRP抗原表位和GM-CSF编码基因,构建含PDTRP和GM-CSF编码基因的抗原化抗体表达重组体。经脾免疫和肌肉加强的方式免疫BALB／c小鼠。采用ELISA方法检测小鼠血清中特异性抗体的水平及其亚类并动态观察;RT-PCR方法检测TH细胞分化中细胞因子和转录因子的表达水平。结果抗原化抗体基因免疫能诱导机体产生免疫应答。GM-CSF增强抗原化抗体基因免疫诱生的抗PDTRP特异性IgG抗体水平并且伴随IgG1／IgG2a显著性升高,同时可增强淋巴细胞TH2型细胞因子及转录因子(IL-4、GATA-3)mRNA的表达水平。结论GM-CSF在增强抗原化抗体基因免疫诱导的免疫应答的同时使得免疫应答向TH2方向偏移。     

人黑色素肿瘤相关抗原gp100质粒诱导特异性抗小鼠黑色素瘤的免疫保护效应

目的以人黑色素肿瘤相关抗原hgp100基因免疫小鼠,诱导针对小鼠黑色素瘤的特异性免疫应答及保护效应.方法分别构建含全长人gp100（hgp100）和小鼠gp100（mgp100）编码基因的质粒pcDNA3-hgp100和pcDNA3-mgp100,以100 μgDNA肌肉免疫C57BL/6小鼠3次,每次间隔2周.通过体外免疫功能及体内攻击实验评价hgp100诱导对小鼠黑色素瘤的特异性免疫应答及保护效应.结果与mgp100比较,hgp100能诱导特异性针对mgp100的抗体生成和T细胞增殖及杀伤,产生以IFN-γ分泌为主的特异性免疫应答;hgp100免疫小鼠在小鼠黑色素肿瘤细胞攻击后生存时间显著延长.结论人黑色素瘤相关抗原gp100可诱导特异性抗小鼠黑色素瘤的免疫应答及保护效应.     

IP10对机体抗肿瘤免疫应答的增强作用及其机制

目的：研究IP10对机体整体及肿瘤局部细胞免疫应答的影响，从而探讨其抗肿瘤的作用及机制。方法：基因转染的方法建立稳定表达IP10的4T1细胞株（IP10-4T1）。观察IP10-4T1细胞生长情况，观察荷瘤小鼠的生存情况。^3H-TdR掺入法检测细胞免疫应答水平。Ficoll密度梯度离心法分离肿瘤浸润淋巴细胞，流式细胞技术检测CXCR3的表达。结果：pcDNA3-IP10转染不影响4T1细胞体外生长。IP10-4T1形成的肿瘤生长明显减慢，瘤重显著减轻，该荷瘤小鼠生存率显著增加（P〈0.05）。与对照组比较，IP10-4T1细胞免疫的小鼠脾细胞特异性增殖反应明显（P〈0．05）。IP10-4T1细胞形成的肿瘤内CXCR3^＋细胞浸润增加，肿瘤内分离的淋巴细胞抗原刺激后显著增殖（P〈0．05）。结论：IP10可能通过诱导机体细胞免疫应答、促进肿瘤内淋巴细胞浸润并增强肿瘤内淋巴细胞增殖活性介导抗肿瘤作用。     

从植入载有抗原的海绵中收集肿瘤特异性T细胞方法的应用

将含灭活ＦＢＬ－３瘤细胞的聚氨酯海绵块植入免疫的Ｃ５７ＢＬ／６小鼠皮下，１０天后收集海绵中的浸润淋巴细胞（ＳＩＬｓ），经体外含ｒＩＬ－２的培养系统中扩增后作特异性杀伤试验。结果表明：所获得的ＳＩＬｓ对ＦＢＬ－３瘤细胞显示出明显的特异杀伤活性，而且高于同一宿主脾脏中的致敏Ｔ细胞和未免疫鼠中ＳＩＬｓ。经流式细胞仪分析表明，从免疫鼠中以的ＳＩＬｓ是以Ｌｙｔ２＾＋占绝对优势的Ｔ细胞系列，联合应用化疗与ＳＩ     

OX40和OX40L在免疫应答中的特点及其应用

OX4 0 /OX4 0L是T APC应答过程中的一对重要的协同刺激分子。当T细胞上的OX4 0与APC上的OX4 0L结合 ,OX4 0就将一个协同刺激信号传递给T细胞 ,促进了细胞克隆的扩增和增强其效应功能。OX4 0主要作用于T细胞效应的晚期阶段 ,能促进更多的记忆T细胞生成。在疾病过程中 ,OX4 0仅表达在炎症浸润部位的抗原特异性CD4 + T细胞上 ,因此可为临床诊断和疾病治疗提供依据 ,而且可能成为免疫干预疾病的理想模式     

补肾中药对溴隐亭致流产鼠模型中蜕膜CD56~+NK细胞表面CD69和CD94表达的影响

为了观察补肾中药是否能影响蜕膜CD5 6 + NK细胞比例及其表面CD6 9、CD94的表达 ,从而进一步阐明补肾中药对母胎界面免疫的影响机制。SD大鼠于孕 6～ 8d皮下注射溴隐亭 0 3mg/kg·d ,建立改良的溴隐亭致SD大鼠流产模型 ,随机分为三组。A组为模型组 ;B、C组在孕 1～ 1 1d分别给予大剂量中药 (4 5g/kg·d)、P(8mg/kg·d) ,另设正常孕鼠对照 (D组 )。孕 1 2d处死 ,取蜕膜组织 ,分离成单个细胞悬液 ,用流式细胞分析技术观察 4组蜕膜CD5 6 + NK细胞的量及蜕膜NK细胞表面CD6 9、CD94的表达差异。结果发现 :B组 (P <0 0 5 )、C、D组 (P <0 0 1 )妊娠率与A组相比增加 ,并且有差异 ;B、C组蜕膜CD5 6 + NK细胞比例与A组相比明显增加 ,与D组无差异 ;各组蜕膜CD5 6 + NK细胞表面CD6 9表达无差异 ;B、C、D组CD94的表达与A组相比显著增加 ;A组蜕膜CD5 6 + NK细胞表达CD6 9与CD94相比明显增加 ,B、C组相反。因此 ,补肾中药能影响蜕膜CD5 6 + NK细胞表面CD6 9、CD94的表达 ,可能通过增加CD94的表达 ,抑制CD6 9从而进一步抑制NK细胞的活性 ,起到保胎作用     

OX40／OX40L在免疫应答中的作用及与疾病关系的研究

随着对OX40／OX40L的深入研究，发现这对重要的协同刺激分子除了能增强CD^4 T细胞、B细胞、DC细胞的扩增、成熟和产生效应功能外，还能影响CD8^ T细胞的杀伤效应，能使T细胞免于凋亡，并促进更多记忆T细胞的生成。OX40／OX40L在许多疾病的发生发展中也起着关键的作用，通过干预其相互作用所进行的免疫治疗已在许多动物模型上取得非常好的疗效，这为今后的临床治疗提供了理论和实验基础。     

未成熟树突状细胞诱导异基因嵌合体的形成

目的：证实供体来源的未成熟树突状细胞（imDCs）主支免疫受体小鼠后可诱导形成基因嵌合体。方法：应用供体（C57BL／6）来源的骨细胞在体外培养出imDCs，灭活后静脉输注受体小鼠（BALB／c），并于输注后不同时间输注供体来源的骨髓细胞，检测异基因嵌合体的形成。同时比较imDCs一次免疫与多次免疫对诱导嵌合体形成的影响。结果：在imDCs免疫后3d输注骨髓细胞可诱导基因嵌体合体的形成，并持续100d以上；在免疫后5d注射骨髓细胞只能形成短暂的（＜21d）、低水平（＜1％）的嵌合状态；7d后则完全不能形成嵌合。应用一次和多次imDCs免疫均能诱导形成异基因嵌合体，且维持时间均大于100d，但其嵌合程度有显著性统计学差异（P＜0．05）。结论：应用供体来源的imDCs主动脉免疫受体可诱导形成异基因嵌合体。     

SARS-CoV N蛋白的原核表达及其免疫原性研究

为了研究SARS-CoV病毒N蛋白基因的原核表达及其免疫原性,为进一步的研究奠定基础,我们以PCR方法在全病毒基因组文库中获得全长N基因,分别克隆到pcDNA3和pET32a载体中获得重组质粒pcDNA3-N和pET32a-N。以亲和层析方法分离纯化pET32a-N转化的BL21细菌裂解液中的重组N融合蛋白,并以ELISA方法检测pcDNA3-N质粒基因免疫小鼠诱导后血清中的特异性抗体。结果pET32a-N转化BL21细菌后可检测到重组SARS-CoVN融合蛋白表达并分离纯化,pcDNA3-N基因免疫能够诱导产生N特异的体液免疫应答。研究的结果表明,SARS-CoVN蛋白可以在原核细胞中有效表达并有良好免疫原性,可以为进一步的功能研究和血清学诊断提供条件。     

转录因子Foxp3在免疫调节中的作用

Foxp3是新近发现的一个转录因子,属于foxhead家族成员,组成性表达于机体的CD4+CD25+T调节细胞(CD4+CD25+Treg),介导CD4+CD25+Treg细胞在胸腺的发育、外周表达及功能维持。Foxp3基因突变或敲除的小鼠,其体内CD4+CD25+Treg细胞数量下降,调节功能缺陷,可诱发严重的自身免疫反应。Foxp3对机体免疫自稳起着决定性作用。