多巴胺β羟化酶基因多态性与帕金森病遗传易感性

目的 探讨多巴胺β羟化酶(dopamine beta hydroxylase,DBH)基因内含子5Taq I多态性与帕金森病遗传易感性的关系。方法 用聚合酶链反应—限制性长度片段多态性技术检测了144例原发性帕金森病患者和年龄及性别相匹配的188名健康人多巴胺β羟化酶基因内含子5Taq I多态性。结果 与健康人比较，帕金森病患者DBH基因内含子5Taq I基因型(A1／A2，A2／A2)或等位基因(A1，A2)的分布不同，两组之间的差异有显著性(基因型：A1／A2 OR＝0．45，Z＝10．11，P＜0．015 A2／A2 OR＝2．11，Z＝10．66，P＜0．01；等位基因：A1 OR＝0．54，Z＝10．20，P＜0．01；A2 OR＝1．82，Z＝10．89，P＜0．01)。结论 DBH基因Taq I多态性可能在帕金森病的遗传易感性中起作用。     

新生隐球菌28S rDNA的基因型特征与序列分析

目的 探讨新生隐球菌各变种、血清型与基因型的关系。方法 新生隐球菌标准株10株、新生隐球菌荚膜缺陷株CAP10以及临床分离株19株,采用变性梯度胶电泳(DGGE)结合DNA序列分析,对以上菌株的28S rDNA片段进行研究。结果 经过DGGE和DNA序列分析,所有新生隐球菌新生变种(A、D型)具有一致的基因带型和序列,格特变种(B、C型)具有不同于新生变种的独特一致的带型和序列;AD型的基因型和序列与格特变种完全相同,新生隐球菌荚膜缺陷株CAP10(D型)的基因型类同于新生变种;19株临床分离菌在DGGE上可分为2型,17株与A、D型完全相同,2株与B、C型相同。结论 DGGE结合DNA序列分析,对于探讨新生隐球菌各变种、血清型的基因型特征、关系具有重要价值;我国非艾滋病隐球菌病感染以新生变种为主,AD型在系统发育上更类同于格特变种,而不是新生变种;本研究不支持A血清型为新生变种以外的新变种即grubii变种的观点。     

Ly49A 基因转染的淋巴细胞对H—2^d小鼠正常和肿瘤细胞杀伤活性的实验研究

目的观察Ly49A基因转染的C57BL/6小鼠的淋巴细胞对BALB/c小鼠正常成纤维细胞和4T1乳腺癌细胞杀伤能力的变化与差异。方法构建逆转录病毒表达载体pLXSN-Ly49A,经由PA317包装细胞包装后转染C57BL/6小鼠淋巴细胞。流式细胞仪检测Ly49A受体在转染后淋巴细胞上的表达率。MTT法检测转染后淋巴细胞对BALB/c小鼠正常成纤维细胞和4T1乳腺癌细胞的杀伤活性,以空载体转染和未转染的淋巴细胞作对照。结果Ly49A基因转染的C57BL/6小鼠的淋巴细胞24?h后Ly49A受体表达率为(46.67±0.35)%,空载体转染组为(18.73±0.85)%,未转染对照组为(19.60±0.27)％,其对BALB/c小鼠正常成纤维细胞的杀伤活性明显降低(抑制率22％～25%),对4T1乳腺癌细胞的杀伤活性无明显改变（P＞0.05）。结论转染Ly49A的C57BL/6小鼠淋巴细胞对BALB/c小鼠正常细胞的杀伤作用明显降低,但仍保留了对肿瘤细胞的杀伤活性,为解决异基因骨髓移植后移植物抗宿主病提供了实验依据。     

Ly49A基因转染的淋巴细胞对H-2~d小鼠正常和肿瘤细胞杀伤活性的实验研究

目的　观察Ly49A基因转染的C5 7BL/ 6小鼠的淋巴细胞对BALB/c小鼠正常成纤维细胞和 4T1乳腺癌细胞杀伤能力的变化与差异。方法　构建逆转录病毒表达载体pLXSN Ly49A ,经由PA317包装细胞包装后转染C5 7BL/ 6小鼠淋巴细胞。流式细胞仪检测Ly49A受体在转染后淋巴细胞上的表达率。MTT法检测转染后淋巴细胞对BALB/c小鼠正常成纤维细胞和 4T1乳腺癌细胞的杀伤活性 ,以空载体转染和未转染的淋巴细胞作对照。结果　Ly49A基因转染的C5 7BL/ 6小鼠的淋巴细胞 2 4h后Ly49A受体表达率为 (4 6 .6 7± 0 .35 ) % ,空载体转染组为 (18.73± 0 .85 ) % ,未转染对照组为 (19.6 0± 0 .2 7) % ,其对BALB/c小鼠正常成纤维细胞的杀伤活性明显降低 (抑制率 2 2 %～ 2 5 % ) ,对 4T1乳腺癌细胞的杀伤活性无明显改变 (P >0 .0 5 )。结论　转染Ly49A的C5 7BL/ 6小鼠淋巴细胞对BALB/c小鼠正常细胞的杀伤作用明显降低 ,但仍保留了对肿瘤细胞的杀伤活性 ,为解决异基因骨髓移植后移植物抗宿主病提供了实验依据     

载脂蛋白E基因内含子1增强子多态与阿尔茨海默病的相关分析

载脂蛋白Ｅ(ａｐｏＥ)基因ε4 等位基因是中国上海汉族人群中阿尔茨海默病 (ＡＤ)的主要易感因子 ,但仅与约 5 0 %的ＡＤ患者有关[1] 。而ＡＤ作为一种复杂性状遗传的多基因疾病 ,则可能存在其他诸多遗传因素或环境因子的参与。我们选择位于ａｐｏＥ基因内含子 1中的增强子 (ＩＥ1)元件的Ｇ/Ｃ多态 ,采用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性方法 ,探讨中国人群中载脂蛋白Ｅ基因ＩＥ1多态在ＡＤ发病风险中的意义及其对ε4 等位基因作用的影响。对象　 (1)ＡＤ组 :共 10 5例ＡＤ患者 ,均由上海精神卫生中心提供 ,均符合美国精神疾病诊断统计手…     

人肺表面活性物质相关蛋白A1基因在大肠杆菌中的表达及产物的分离纯化

目的 研究人肺表面活性物质相关蛋白A1（SP－A1）在大肠杆菌中的表达、产物纯化及免疫原性。方法 将人SP－A1基因克隆至表达载体pGEX-2T上,分别转化至大肠杆菌JM101、JM105、JM109、 XL1－blue和BL21（DE3）等不同宿主,并在不同温度中的表达,采用包涵体纯化方法及亲和层析法纯化目的蛋白,用ELISA及Westert blot初步分析SP－A1蛋白的免疫原性,融合蛋白质经凝血酶酶切分析。结果 SP－A1基因在前4种宿中表达有完整蛋白质和不完整蛋白质,目的蛋白质分别占总蛋白的6.7%、9.3%、14.8%;于28℃时,该基因在BL21（DE3）缩主中表达产物均为完整蛋白质,占总蛋白质的10%。经包涵体纯化和Glutathione Sep harose 4B亲和层析纯化,可获得纯度达95％以上的纯化蛋白。目的蛋白可被抗SP－A多克隆抗体特异识别,凝血酶作用后可切出相对分子质量为26000的目的蛋白片段。结论 人组织特异性蛋白质SP－A1可在大肠杆菌中表达,表达产物具有良好的免疫原性。     

丙型肝炎病毒及恶性疟原虫复合多表位抗原基因与谷胱甘肽转硫酶基因的融合表达及其在小鼠中免疫应答的研究

目的：探讨复合多表位丙型肝炎病毒（ＨｅｐａｔｉｔｉｓＣｖｉｒｕｓ,ＨＣＶ）及恶性疟原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ,Ｐｆ）双价疫苗的可行性。方法：将人工合成的复合多表位ＨＣＶ基因ＰＣＸ及Ｐｆ抗原基因ＡＢ（ＳＰｆ６６＋ＳＰｆ１０５）克隆到谷胱甘肽转硫酶（ＧｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ,ＧＳＴ）表达载体ｐＧＥＸ２Ｔ中,并在大肠杆菌中高效表达ＧＳＴＨＣＶＰｆ复合抗原（ＧＳＴＣＡＢ）,分析表达产物的免疫特异性、免疫原性及安全性。结果：ＧＳＴＣＡＢ可被ＨＣＶ患者血清、鼠抗ＧＺＰＣＸ及鼠抗Ｐｆ抗体特异识别,可诱发小鼠产生针对ＧＳＴＣＡＢ、ＧＺＰＣＸ及ＰｆＡｇ的特异性体液免疫应答及针对ＧＳＴＣＡＢ、ＧＺＰＣＸ的迟发性超敏反应,免疫后ＣＤ８＋Ｔ细胞比例略为升高,免疫小鼠未见明显的毒副作用。结论：ＧＳＴＣＡＢ融合蛋白具有良好的ＨＣＶ及Ｐｆ免疫特异性,可诱发理想的体液及细胞免疫应答,可望成为ＨＣＶＰｆ双价疫苗的候选抗原。     

多巴胺转运体基因与注意缺损多动障碍

目的　探讨注意缺损多动障碍（ＡＤＨＤ） 与多巴胺转运体（ＤＡＴ１） 基因间的关系。方法　分别采用基于单体型和基于基因型的单体型相对风险分析方法,在上海地区汉族人群中对ＡＤＨＤ 与ＤＡＴ１ 基因微卫星多态性进行遗传关联分析。结果　①上海地区汉族人中,ＤＡＴ１ 基因多态以４８０ ｂｐ 重复片段为主,其基因频率为９２％ 。②以父母双亲为对照,经ＧＨＲＲ 和ＨＨＲＲ 分析,ＤＡＴ１ 基因与ＡＤＨＤ 均无关联。结论　上海地区汉族人群中ＤＡＴ１ 基因多态与ＡＤＨＤ 无关。     

伊曲康唑与两性霉素B抗新生隐球菌临床分离株的实验研究

目的 评价新生隐球菌临床分离株对伊曲康唑与两性霉素B联合用药的敏感性及两药物之间相互作用的方式.方法 采用美国国家临床实验室标准化委员会M27-A推荐的棋盘微量稀释法,检测了20株新生隐球菌临床分离株对伊曲康唑、两性霉素B及两药联合的体外药物敏感性,同时对两药的作用方式进行了判定.结果 联合用药时,伊曲康唑MIC值的几何均数从0.2730μg/mL显著降低到0.1195μg/mL,两性霉素BMIC值的几何均数从0.6830μg/mL显著降低到0.2102μg/mL,35%受试菌表现为协同作用方式,55%的受试菌株表现为相加作用方式,10%受试菌株表现为无关作用方式,未观察到拮抗作用的出现.测定不同浓度下药物单独和联合作用的1株菌的菌落形成单位(cfu/mL),联合用药组都较单独用药有明显减少.结论 伊曲康唑与两性霉素B联合较任一药物单独用药体外抗新生隐球菌的活性高.     

念珠菌性外阴阴道炎患者身体不同部位白念珠菌基因型研究

目的 研究念珠菌性外阴阴道炎患者身体不同部位的白念珠菌基因型分布情况。方法 采用PCR方法扩增白念珠菌包含Ⅰ类内含子的编码rRNA的25SrDNA区,根据扩增条带大小进行基因分型:A型(~450bp),B型(~840bp),C型(~450bp和~840bp)。结果 60例念珠菌性外阴阴道炎患者中,54例由白念珠菌感染所致,其中表现为非复发性感染者39例,复发性感染者15例;同时从2个或2个以上部位分离到白念珠菌的病例共32例(32/54),其中非复发性念珠菌性外阴阴道炎19例(19/39),复发性念珠菌性外阴阴道炎13例(13/15)。从54例白念珠菌性外阴阴道炎患者的阴道、肛门、口腔部位共分离到92株白念珠菌,其中A型80株,B型8株,C型4株。同一患者不同部位基因型相同者24例(24/32),不同者8例(8/32)。结论 在白念珠菌性外阴阴道炎中,主要以A型白念珠菌为主,B型、C型所占比例较少,且多分离自非阴道部位。在复发性念珠菌性外阴阴道炎患者中,身体其他部位念珠菌的定植率高于非复发性念珠菌性外阴阴道炎,肠道菌库理论在念珠菌性外阴阴道炎的反复发作中,具有一定的作用。