中药对血管生成影响的实验研究进展

血管生成是指从已存在的血管床中以出芽方式生长，形成新血管的过程。人的生长发育过程中伴随着无数血管生成现象，此外，在一些病理变化过程中也存在血管生成现象，如伤口愈合、心肌梗死后、肿瘤生长转移和动脉粥样硬化等^[1]。对于上述病理变化过程中的血管生成而言，有一部分有利于机体的损伤修复，而另一部分则可能加重病情恶化。     

山核桃叶总黄酮苷元及其主要单体成分球松素查尔酮的抗氧化活性

目的: 测定山核桃叶总黄酮苷元(TFA)及其主要单体成分——球松素查尔酮(PSC)的抗氧化活性。 方法: 采用柱层析法分离、富集山核桃叶中的总黄酮苷元及单体化合物球松素查尔酮;测定总黄酮苷元中总酚含量,通过1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基实验、铁离子还原/抗氧化能力(FRAP)测定法、抗脂质过氧化(LPO)实验、抗蛋白氧化羰基(PCO)生成实验,对TFA和PSC进行体外抗氧化活性研究。 结果: 富集的山核桃叶总黄酮苷元中总酚含量用没食子酸当量(GAE)表示为(283.75±10.82)mg·g^-1;TFA和PSC 对DPPH自由基清除的抑制浓度(IC₅₀)分别为(20.05±1.74),(11.66±0.61) mg·L^-1,抑制脂质过氧化的IC₅₀分别为(74.62±5.39),(24.38±1.24) mg·L^-1,抑制蛋白过氧化的IC₅₀分别为(174.29±11.26),(86.74±7.89) mg·L^-1;TFA和PSC均具有较强的抗氧化能力;除了对铁离子还原力外,其他各项指标化合物PSC均显著强于TFA。 结论: 山核桃叶中含有较高含量的黄酮苷元,其富集的总黄酮苷元具有较强的抗氧化活性,已知成分大于50%,而球松素查尔酮是其主要药效物质,值得进一步开发应用。     

芪冬活血饮对脂多糖诱导急性肺损伤大鼠血气分析的影响

[目的]探讨及分析芪冬活血饮对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)大鼠血气分析的影响。[方法]SD大鼠60只,随机分为6组,即生理盐水组(Normal Saline Group,NS组)、模型组(Model group,M组)、地塞米松组(DXM组)、芪冬活血饮组、大黄组、芪冬活血饮加大黄组,除生理盐水组采用气道内滴入生理盐水外,其余各组大鼠均气道内滴入脂多糖制备ALI模型,并分别应用相应药物进行干预。所有大鼠均在造模后24h处死采集动脉血,检测pH值、二氧化碳分压(PaCO2)及血氧分压(PaO2),并且HE染色观察肺组织损伤程度。[结果]芪冬活血饮可以减轻肺水肿及中性粒细胞浸润,改善酸中毒、降低PaCO2,差异有统计学意义(P<0.05);提高PaO2,但无明显差异,芪冬活血饮同大黄合用,脏腑同治,虽可以进一步提高PaO2、降低PaCO2及改善酸中毒,但同芪冬活血饮组比较,两者之间差异没有统计学意义(P>0.05)。[结论]芪冬活血饮可以减轻ALI大鼠酸中毒,降低PaCO2及提高PaO2,改善肺组织病理学改变,但同大黄合用,在改善大鼠氧合功能方面协同作用不明显。     

白及组培快繁的实验研究

目的:探索白及组培快繁的最适培养基和培养条件,为进一步完整建立白及快繁体系奠定基础。方法:以白及成熟蒴果为材料,在不同培养基上进行无菌播种,种子萌发后利用组织培养方法进行无性系繁殖。结果:白及种子萌发的最佳培养基为1/2 MS+6-BA 1.0 mg/L;白及丛生芽增殖最佳培养基MS+1.0mg/L BA+0.1mg/L NAA,1/2MS+1.0 mg/L NAA+7.5%香蕉汁有利于白及生根,MS+0.1mg/L NAA+1.0mg/L 6-BA+7.5%香蕉汁既可以促进白及球茎的生长,在一定程度上又可以促进白及的生根。结论:激素于白及组培快繁有显著影响,通过激素适当配比得到白及快繁的最佳培养体系,对白及资源的利用和保护有重要意义。     

山核桃叶中总黄酮含量测定

目的:建立山核桃叶中总黄酮的含量测定方法。方法:以槲皮苷为对照品,采用AlCl3显色紫外分光光度法,结合单因素试验和正交试验对该体系进行系统优化研究,测定山核桃叶中总黄酮的含量。结果:AlCl3显色最佳条件为:2.0mL体系中加入pH4.7的HAc-NaAc缓冲液0.5mL,10%AlCl3醇溶液0.4mL,蒸馏水0.1mL,常温反应20min,416 nm处测定吸光度值。槲皮苷标准品含量在2.6～14.3μg.mL-1范围内与吸光度呈良好的线性关系(r=0.998),测得充分提取的总黄酮平均含量为5.89%,RSD为1.14%(n=3),平均回收率为99.1%,RSD为1.27%(n=6)。结论:AlCl3显色紫外分光光度法操作简便、准确、灵敏、重现性好,可用于山核桃叶总黄酮含量的测定。     

铁皮石斛SCoT-PCR反应体系的优化

目的 对铁皮石斛的目标起始密码子(start condon targeted polymorphism,SCoT)多态性反应体系进行优化,为进一步对铁皮石斛遗传多样性的SCoT分析奠定基础.方法 以铁皮石斛的新鲜叶片为试验材料,采用控制单一变量的方法分别研究模板DNA用量、引物浓度、TaqDNA聚合酶用量、dNTPs浓度、及退火温度共5个因素对SCoT-PCR扩增结果的影响.结果 铁皮石斛SCoT标记的20 μL优化反应体系为:DNA模板20 ng、引物浓度为30 μmol/L、Taq DNA聚合酶用量为1.0 U、dNTP浓度为100 μmol/L.适宜的PCR扩增程序为95℃预变性4 min; 95℃变性50 s,56.1℃复性退火40 s,72℃延伸2 min,循环36次;72℃延伸5 min,4℃保存.1.5％琼脂糖凝胶电泳显示扩增产物在600～2 000 bp.结论 该体系的建立为铁皮石斛种质遗传多样性分析、分子标记辅助育种等研究奠定了基础.     

山核桃叶总黄酮干预去势SD大鼠脂肪组织异位沉积作用研究

[目的]研究山核桃叶总黄酮对去势SD大鼠脂肪组织异位沉积的干预作用。[方法] 60只SD大鼠分为模型组、假手术组、雌二醇组、山核桃叶总黄酮低、中、高剂量组,每组10只。除假手术组外,其余各组均摘除卵巢建立去势模型,模型组和假手术组予0.9%氯化钠注射液灌胃,雌二醇组给予雌二醇1mg/kg灌胃,山核桃叶总黄酮低、中、高剂量组分别予山核桃叶总黄酮50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg灌胃。各组大鼠灌胃1次/d,容积0.3~0.4mL/只,共2个月。给药结束后处死大鼠,计算腹部脂肪系数、主动脉弓脂肪系数;制作肝脏组织、主动脉弓血管、腹部脂肪组织切片,HE染色后镜下观察;酶标比色法检测血清总胆固醇(total cholestero,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、肝脏TG、肝脏游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)的水平;Q-PCR法检测过氧化物酶体增殖体激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptorγ, PPARγ)m RNA表达量,Western blot检测其蛋白表达量。[结果]与模型组比较,山核桃叶总黄酮高剂量组能显著降低去势大鼠血清TG水平(P0.01),下调肝脏TG水平(P0.05),但肝脏FFA水平无明显变化(P0.05);与模型组比较,雌二醇组和山核桃叶总黄酮各剂量组肝脏细胞内脂滴数量减少,主动脉弓处、腹部脂肪细胞直径减小;与模型组比较,山核桃叶总黄酮中、高剂量组PPARγ蛋白表达下调(P0.01),中剂量组PPARγmRNA表达下调(P0.05)。[结论]山核桃叶总黄酮可改善去势SD大鼠脂肪在肝脏、主动脉弓血管周围组织的异位沉积,其作用机制可能与调节PPARγ表达,减少脂肪组织分化,减少FFA释放,降低血脂水平相关。     

温郁金对鼠血浆和胃组织生长抑素水平的影响

目的:研究温郁金对鼠胃组织和血浆生长抑素(SS)水平的影响.方法:ICR小鼠分组,分别以温郁金水提物、石油醚提取液(醚提物)和乙醇提取液(醇提物)中等剂量灌胃,每天1次,3 d后于末次灌药后1、1.5、2、3 h处死小鼠,获取血浆和胃组织,观察温郁金对鼠SS水平影响的时效关系.用SD大鼠以温郁金大、中、小剂量灌胃,每天2次,3 d后于末次灌药后2 h处死大鼠,观察温郁金对鼠SS水平影响的量效关系.结果:温郁金水提物、醚提物和醇提物能提高鼠胃组织和血浆的SS水平,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);胃组织和血浆SS水平和温郁金给药之间存在时效关系但无量效关系,各提取物不同剂量之间比较差异无统计学意义(P>0.05.结论:温郁金能促使鼠胃组织和血浆SS水平提高.     

姜黄素水解衍生物对血管平滑肌细胞增殖及低密度脂蛋白受体表达的影响

目的研究姜黄素水解衍生物对氧化型低密度脂蛋白促牛主动脉平滑肌细胞增殖和对牛血管平滑肌细胞膜低密度脂蛋白受体表达的影响。方法用盐酸加三氯化铝水解姜黄素,获得姜黄素水解衍生物;用氧化型低密度脂蛋白培养牛血管平滑肌细胞建立促增殖模型,MTT比色法观察姜黄素水解衍生物对牛血管平滑肌细胞增的抑制作用;流式细胞仪检测血管平滑肌细胞膜上低密度脂蛋白受体表达的影响;采用逆转录聚合酶链反应检测c-myc的表达。结果姜黄素水解衍生物对10mg/L氧化型低密度脂蛋白培养的血管平滑肌细胞增殖有明显的抑制作用,高中低剂量组的抑制率分别为46%、37%和22%(P<0.01或0.05);对血管平滑肌细胞膜上的低密度脂蛋白受体的表达均有明显的上调作用,高中低剂量组低密度脂蛋白受体表达率分别比对照组高33.85%、17.95%和5.75%(P<0.01或0.05);能够下调c-myc的表达。结论姜黄素水解衍生物能明显抑制牛主动脉平滑肌细胞增殖,上调低密度脂蛋白受体的表达,从而延缓动脉粥样硬化的发生发展。     

细胞调亡与动脉粥样硬化

平滑肌细胞、内皮细胞和巨噬细胞与动脉粥样硬化的发生发展密切相关。在动脉粥样硬化斑块中，巨噬细胞、平滑肌细胞与内皮细胞都经历着凋亡与坏死，调亡占主导地位，参与了粥样硬化的形成过程。氧自由基、某些生长因子、一氧化氮、内毒素以及氧化型低密度脂蛋白等可诱导细胞调亡。细胞调亡具有复杂的分子调控机制，多种基因参与了凋亡的发生。