液相色谱串联质谱法检测肝癌细胞N6- 甲基腺嘌呤核苷甲基化水平

目的 建立同时测定N⁶-甲基腺嘌呤核苷(m⁶A)和腺嘌呤核苷(A)的液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS),检测肝癌细胞m⁶A甲基化水平。方法 HepG₂和L₀₂细胞mRNA经分离、消化为核苷,再经含对乙酰氨基酚为内标的甲醇沉淀处理。色谱柱为Agilent Proshell 120 EC-C₁₈柱,流动相为0.1 g/dl甲酸水-甲醇(82:18),流速0.4 ml/min,柱温为30 ℃。质谱检测模式为多反应监测(DMRM)模式,测定m⁶A和A的浓度,计算细胞m⁶A甲基化水平。 结果 建立的LC-MS/MS法检测m⁶A和A的浓度分别在0.15～50.00 ng/ml和1.50～500.00 ng/ml浓度范围内线性关系良好(r > 0.999),日内、日间精密度均小于15.00 %,准确度为93.67 %～101.10 %,回收率为91.46 %～97.60 %,基质效应为90.26 %～99.27 %,样品稳定性良好。HepG₂和L₀₂细胞m⁶A甲基化水平分别为(0.73 ± 0.11)%和(1.26 ± 0.22)%。结论 该方法准确、快速、稳定和灵敏,可用于检测肝癌细胞m⁶A甲基化水平。     

Visumax飞秒激光辅助制瓣LASIK术中不透明气泡层及相关因素

目的：研究Visumax飞秒激光辅助的准分子激光原位角膜磨镶术（LASIK）术中不透明气泡层（OBL）产生的类型、相关影响因素及其临床意义。方法：回顾性分析。收集2016 年7 月1 日至8 月20 日在南京医科大学附属眼科医院行飞秒LASIK的患者154 例（300 眼）的临床资料，等效球镜度为（-5.88±1.51）D。飞秒激光采用Zeiss公司 Visumax飞秒激光仪，将术中产生的OBL分为瓣外OBL、瓣内快速OBL和瓣内慢速OBL。300 眼按角膜曲率平均K值分为A组（<42 D）、B组（42～46 D）和C组（>46 D）；按角膜瓣的厚度分为D组（100 μm）、E组（110 μm）和F组（120 μm）；按角膜厚度分为G组（<500 μm）、H组（500～540 μm）和I组（>540 μm）。统计不同角膜曲率、角膜瓣厚度、角膜厚度情况下3 种OBL产生的比例，并采用多元Logistic回归模型进行统计分析。结果：300 眼均发生OBL。以瓣外OBL作为参照，角膜瓣越薄，越容易出现瓣内快速OBL（r=-0.719，P=0.034）和瓣内慢速OBL（r=-0.875，P=0.044）。以瓣内慢速OBL作为参照，角膜曲率越高，越容易出现瓣内快速OBL（r=0.923，P=0.046）；角膜瓣越厚，越容易出现瓣外OBL（r=0.897，P=0.044）。结论：OBL的产生与角膜曲率、角膜瓣厚度、角膜厚度均存在一定的相关性，但瓣外OBL、瓣内快速OBL和瓣内慢速OBL对Visumax飞秒激光辅助的LASIK术后视觉质量的影响及远期疗效仍有待进一步观察研究。     

胸腔镜肺小结节切除术前微弹簧圈定位的临床应用研究

目的:研究孤立性肺结节(SPN)胸腔镜术前CT引导下双弹簧圈精准标记定位的应用价值。方法:回顾分析43例SPN胸腔镜术前定位病例资料，包括双弹簧圈组22例，Hook-wire定位组21例。统计双弹簧圈定位的术中、术后并发症，衔接期时间以及作楔形切除所用时间，并将两组结果进行对比分析。结果:两组病例定位均取得成功；双弹簧圈组的气胸发生率(9.0%)，肺出血发生率(9.0%)，胸痛发生率(9.0%)均低于Hook-wire组，其中肺出血发生率与Hook-wire组比较，差异有统计学意义(P＜0.01)；衔接时间双弹簧圈组（15.38±8.32）h长于Hook-wire组（4.21±3.29）h，差异有统计学意义（P＜0.05）；作楔形切除所用时间双弹簧圈组(21.01±7.14)min与Hook-wire组(18.22±5.18)min差异无统计学意义(P＞0.05)。结论:采用双微弹簧圈进行SPN胸腔镜手术前精准标记定位安全可靠、效果良好，与Hook-wire定位比较并发症发生率更低，并可获得更长的衔接期，具有较高的应用价值。