Rictor对小鼠胚胎干细胞来源心肌细胞线粒体钙信号的调控

目的: 探索Rictor在小鼠胚胎干细胞来源心肌细胞（ESC-CM）中的表达、定位及其对线粒体钙信号的调控作用。方法: 通过经典"悬滴-悬浮-贴壁"三步法建立ESC-CM模型。利用免疫荧光法及蛋白质印迹法观察Rictor在ESC-CM中的定位。慢病毒技术干扰小鼠胚胎干细胞Rictor表达后,采用免疫荧光法考察ESC-CM内质网与线粒体的叠加情况;通过透射电镜观察ESC-CM的超微结构;活细胞工作站测定分化后心肌细胞线粒体钙瞬变;免疫共沉淀法检测ESC-CM中1,4,5-三磷酸肌醇受体（IP3R）、葡萄糖调节蛋白75（Grp75）、线粒体外膜的电压依赖性阴离子通道1（VDAC1）间的相互作用;蛋白质印迹法检测线粒体融合蛋白2（Mfn2）的表达情况。结果: Rictor在ESC-CM中主要定位于内质网及线粒体-内质网结构偶联（MAM）域,且其表达定位与线粒体及内质网有很好的叠加。干扰Rictor后,心肌细胞线粒体部分呈散点状,线粒体与内质网的叠加率降低（P < 0.01）;ESC-CM超微MAM形成减少;ATP刺激引起的ESC-CM线粒体钙瞬变幅度下降,其中钙瞬变斜率和上升峰值均降低（均P < 0.01）;MAM中IP3R、Grp75、VDAC1相互作用明显减弱,且Mfn2蛋白表达降低（P < 0.01）。结论: 干扰小鼠胚胎干细胞中Rictor表达可降低ESC-CM中钙从内质网到线粒体的释放,这可能是通过影响IP3R、Grp75、VDAC1间相互作用,减少Mfn2表达,进而破坏MAM来实现的。     

自发性2型糖尿病恒河猴双心室形变的心脏磁共振分析

  目的  利用心脏磁共振组织追踪技术(CMR-tissue tracking)探讨自发性2型糖尿病(T2DM)恒河猴双心室的心肌形变特征。  方法  选取12只雄性自发性T2DM恒河猴以及9只年龄、性别及体质量匹配的健康恒河猴,排除高血压、心肌梗死;测定空腹血糖、糖化血红蛋白水平以及血脂水平;行CMR扫描覆盖左、右心室的电影序列,使用常规心功能分析及CMR-tissue tracking后处理评价双心室的心功能以及心肌形变。  结果  T2DM组空腹血糖及糖化血红蛋白水平明显增高,两组间体质量、年龄差异无统计学意义。心功能分析显示T2DM组双心室射血分数均无显著降低;组织追踪结果显示右室自由壁的收缩形变参数〔包括径向及环向应变峰值(Err、Ecc)、收缩期应变率峰值(SSRR、SSRC)的大小〕均明显降低,舒张形变参数〔包括径向、环向和纵向舒张期应变率峰值(DSRR、DSRC、DSRL)的大小〕均显著降低;而左室的收缩形变参数〔径向及环向应变峰值(Err、Ecc)〕以及舒张形变参数〔径向舒张期应变率峰值(DSRR)〕显著降低。  结论  CMR-tissue tracking技术能发现自发性T2DM恒河猴的右心室与左心室同时存在收缩及舒张形变功能的异常。     

艾儒棣教授从肝论治男性型脱发经验介绍

[目的]总结艾儒棣教授从肝论治男性型脱发辨证诊疗思维和临证选方用药经验。[方法]通过跟随艾儒棣教授临证抄方及对艾儒棣教授治疗男性型脱发医案的收集、整理、归纳,从病因病机、选方用药等方面论述艾儒棣教授从肝论治男性型脱发的学术观点及临证诊疗思维,并举验案一则以佐证。[结果]艾儒棣教授另辟蹊径以肝为着眼点辨证论治男性型脱发,认为肝肾藏泄失调是发病主因是其基本病机,治疗上不离"乙癸同源"原则,以补肾益精为本,平肝潜阳为标,兼顾它脏,扶正祛邪。所举案例以此法为要,以六味地黄汤为基础方,益肾生发,疏肝止脱,疗效显著。[结论]艾儒棣教授从肝论治男性型脱发,临床疗效突出,其宝贵经验值得我辈认真研习、借鉴和推广。     

脂肪间充质干细胞移植对环磷酰胺诱导的大鼠卵巢功能损伤的影响

目的：探讨脂肪间充质干细胞对化学药物治疗(以下简称化疗)药物环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)诱导的卵巢功能损伤的影响及其作用机制。方法：从雌性SD大鼠脂肪组织中分离脂肪间充质干细胞并进行体外培养,将其分为空白对照组和CTX组,每组15只;再选取45只正常动情周期的SD大鼠,用CTX 75 mg/kg腹腔注射给药1次的方式建立模型,再随机分为对照组(不再予其他处理,A组)、尾静脉注射组[尾静脉注射脂肪间充质干细胞0.6 mL(6×105个细胞),B组]和卵巢原位注射组[经卵巢原位注射脂肪间充质干细胞40 µL(每侧20 µL,2×104个细胞),C组],每组15只。比较A,B,C 3组大鼠用药前后生存质量、体重变化;ELISA法测定血清卵泡刺激素、雌二醇水平;HE染色观察卵巢组织及卵泡计数;免疫组织化学法、real-time PCR法及蛋白质印迹法测定骨形态发生蛋白-15(bone morphogenetic protein 15,BMP-15),Bcl-2和Bax的表达;TdT介导的脱氧尿嘧啶缺口末端标记法(TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)检测A,B,C 3组大鼠卵泡细胞凋亡率。结果：尾静脉注射或卵巢原位注射脂肪间充质干细胞后,与A组比较,B组和C组大鼠生存质量提高,移植前后的体重增长值明显增加,差异均有统计学意义(均P<0.01);与A组比较,B组大鼠血清雌二醇水平明显升高,卵泡刺激素水平明显下降(均P<0.01),C组大鼠血清雌二醇水平升高,卵泡刺激素水平明显下降(分别P<0.05,P<0.01);B组和C组大鼠卵巢组织切片HE染色见颗粒细胞层明显增多,黄体数量增多,各级卵泡计数均增加,可见多个新生卵泡及成熟的卵母细胞;与A组比较,B组大鼠的原始卵泡数、窦状和排卵前卵泡数以及总卵泡数均明显增加,窦前卵泡数也增加(分别P<0.01,P<0.05),C组大鼠的原始卵泡数、窦前卵泡数、窦状和排卵前卵泡数以及总卵泡数均明显增加(均P<0.01);与A组比较,B组和C组大鼠卵巢组织BMP-15和Bcl-2的表达明显增多,Bax的表达明显减少(均P<0.01),大鼠卵巢颗粒细胞的凋亡率明显降低(P<0.01);B组与C组之间比较,大鼠体重增长值,血清雌二醇及卵泡刺激素水平,各级卵泡计数,BMP-15,Bcl-2及Bax的表达水平,卵巢颗粒细胞凋亡率差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论：脂肪间充质干细胞移植能够有效地修复CTX化疗所致的卵巢功能损伤,该作用可能是通过抑制颗粒细胞的线粒体凋亡途径实现的。     

医养结合社区居家养老中心供给服务质量评价指标体系的构建研究

背景 　为应对老龄化,我国对医养事业给予大力扶持,致使医养结合社区居家养老服务机构数量剧增。但因我国“未富先老”的国情及养老事业起步较晚,医养结合养老模式存在医疗服务不规范和服务质量评价体系不健全等诸多问题。目的　构建医养结合社区居家养老中心供给服务质量评价指标体系。方法　于2017年6—8月,采用目的抽样法抽取北京市、天津市、河北省20个社区养老服务驿站（中心）和15个社区日间照料中心进行实地调研和访谈,形成医养结合社区居家养老中心供给服务质量评价指标体系（初版）;于2017年11月—2018年1月选取23名专家,通过亲自发放或电子邮件发放3轮函询问卷,由专家对指标的合适性、重要性、熟悉程度及判断依据做出判断;函询结束后,整理专家咨询结果,计算专家积极系数、权威系数、协调程度和指标重要性赋值、满分比、变异系数。结果　3轮函询专家积极系数分别为88.5%、100.0%、100.0%,专家权威系数分别为0.905、0.909、0.922,变异系数分别为0.06~0.24、0~0.17、0~0.22,Kendall's W系数分别为0.249、0.252和0.316。依据指标筛选标准,综合专家意见后,第1轮删除12个指标、增加16个指标,第2轮删除5个指标、修改1个指标、增加1个三级指标,第3轮无删除、修改、增加指标,最终形成了3个一级指标、15个二级指标、64个三级指标的医养结合社区居家养老中心供给服务质量评价指标体系。结论　构建的医养结合社区居家养老中心供给服务质量评价指标体系的专家意见集中度较高,结果可靠性较强,可为医养结合社区居家养老中心服务质量的评价、建设和改进提供依据。     

1990—2014年徐州地区布加综合征空间分布特征和空间自相关分析研究

背景　布加综合征（BCS）是因肝静脉或下腔静脉流出道阻塞而导致各种症状的总称,流出道阻塞的范围可以是肝静脉到下腔静脉连接处之间,以及肝静脉到右心房之间的任何一处血管,目前中国BCS患者病因仍不明确。地理信息系统（GIS）是一门结合地图和地理空间分析方法的综合学科,不仅在地理学上有所应用,还广泛应用于疾病的空间分布研究。本研究首次应用GIS来描述徐州地区BCS患者空间分布情况及特征。目的　通过分析1990—2014年徐州地区BCS的空间分布特征及空间自相关关系,为BCS的病因研究和疾病防治提供参考依据。方法　收集1990—2014年徐州地区徐州医科大学附属医院、丰县人民医院、沛县人民医院、邳州市人民医院、新沂市人民医院、睢宁县人民医院的住院病历信息系统中所有首次确诊的BCS患者病历资料。汇总病例的人口信息,包括姓名、性别、年龄、家庭住址、住院日期、诊断等。每5年为1个时间段统计1990—2014年徐州地区BCS发病率;基于ArcGIS 10.4软件,采用全局空间自相关Moran's I指数分析和局部空间自相关Getis-Ord指数分析进行空间自相关分析。结果　1990—2014年,徐州市共有568例新发BCS患者。1990—2014年徐州地区BCS发病率逐年上升（由1990—1994年间的0.08/10万上升到2010—2014年间的0.35/10万）。对1990—2014年徐州地区BCS发病率以镇为单位进行全局空间自相关Moran's I指数分析,结果显示P值均>0.05,表明1990—2014年的各时间段BCS发病率空间分布自相关性均不显著（P>0.05）。局部空间自相关Getis-Ord指数分析结果显示,1990—1994年徐州地区BCS发病热点区域有徐州丰县、徐州市区东南部与睢宁县交界地区;1995—1999年徐州地区BCS发病热点区域为徐州市区与丰县、沛县交界地区,冷点地区为邳州市与睢宁县交界地区。2000—2004年徐州地区BCS发病热点区域为沛县微山湖周边,冷点区域为睢宁县南部;2005—2009年徐州地区BCS发病热点区域为沛县微山湖周围地区,冷点区域为徐州市区与丰县、沛县交界处;2010—2014年徐州地区BCS发病热点区域为徐州睢宁县东南部、沛县靠近微山湖地区、徐州市区,冷点区域在邳州市东部、新沂市、丰县。结论　1990—2014年各时间段徐州市BCS热点区域多为徐州市区及丰县、沛县、睢宁县以及微山湖周围受水污染的城镇,冷点区域为邳州市、新沂市;BCS热点区域多出现在重工业区和环境污染区,这提示环境污染以及重体力劳动可能是BCS发病的影响因素。     

浙江省全科医师健康素养知晓及健康教育态度、行为研究

背景　健康教育是全科医师的职责之一,健康素养是健康教育效果评价指标,目前国家已开展数次健康素养评价,然而全科医师对健康素养知晓情况尚不可知。目的　了解全科医师健康素养知晓情况及健康教育开展态度、行为,为全科医师更好地开展健康促进活动提供理论依据。方法　于2018年3月采用自制问卷,在浙江大学医学院附属第一医院全科医学联盟内利用第三方平台进行调查,调查内容包括全科医师的基本信息,健康素养知识,健康教育行为开展、达标情况,对健康教育的态度。结果　共收集有效问卷208份,全科医师健康素养总体知晓率为56.2%,健康素养定义、内涵及分类知晓率分别为60.6%（126/208）、97.6%（203/208）及93.8%（195/208）;65.9%（137/208）的全科医师在平时工作中经常开展健康教育,健康教育形式以传统形式为主,且以门诊健康教育形式最常见（91.8%,191/208）。健康教育宣传栏设置和内容更新频次符合国家公共卫生规范最低要求的达标率最高为78.8%（164/208）。97.6%（203/208）全科医师认为有必要且愿意开展健康教育活动。结论　全科医师健康素养知晓率高,开展健康教育形式单一,开展健康教育达标情况尚可,后期可利用“互联网+健康教育”模式开展新型健康教育活动。     

2型糖尿病患者葡萄糖负荷后胰岛素分泌达峰时间的影响因素研究

背景　胰岛素分泌高峰延迟在2型糖尿病（T2DM）患者中普遍存在,其可能是T2DM患者餐后高血糖的重要原因。目前国内外对T2DM患者胰岛素分泌高峰延迟影响因素的研究较少。目的　探讨T2DM患者葡萄糖负荷后胰岛素分泌达峰时间（tmax）的影响因素。方法　选取2016年1月—2018年6月于武汉科技大学附属孝感医院内分泌科住院的T2DM患者490例,根据tmax将患者分为3组：短tmax组（tmax≤90 min,n=159）、中tmax组（90 min相似文献   

改良微柱凝胶法检测ABO变异型血型

目的：建立用于检测ABO变异型血型的改良微柱凝胶法。方法：选取2016年11月至2018年5月温州医科大学附属第二医院育英儿童医院、温州市人民医院和瑞安市人民医院ABO血型凝集强度改变或正反定型不一致的患者12例。采用血型血清学检查和血型基因检测结合临床表现确认标本ABO血型;对已知血型标本用微柱凝胶法复核;用1% O型、A3亚型和A抗原减弱红细胞调整微柱凝胶法离心方式建立改良微柱凝胶法,并对全部标本进行检测。结果：12例标本中A3亚型1例,B（A）型3例,类孟买型3例,ABO抗原减弱5例;微柱凝胶法和盐水试管法检测敏感度相似,12例标本中只检出2例,检出比例为2/12;选定改良微柱凝胶法的离心方式为900 r/min离心2 min、4 ℃孵育30 min、1 800 r/min离心3 min;用改良微柱凝胶法检测12例标本,1例不能检出,检出比例为11/12。结论：本研究建立的改良微柱凝胶法通过改变微柱凝胶血型卡的离心方式、增加孵育时间和孵育温度,提高了检测敏感度,适合ABO变异型血型的筛检。     

miR-181a靶向作用CARF基因抑制胰腺癌细胞凋亡

目的：探讨miR-181a与CARF基因是否存在靶向关系,并研究其在调节胰腺癌细胞增殖凋亡过程中的作用。方法：利用Real-time PCR检测胰腺癌组织细胞中miR-181a的表达水平,通过miR-181a拮抗剂下调胰腺癌细胞中miR-181a浓度,并用MTT检测其细胞增殖能力变化。建立包含CARF基因3’-UTR序列的PGL-3载体,结合双荧光素酶报告基因系统验证CARF基因是否存在miR-181a的作用靶点,然后通过激动剂及拮抗剂调节胰腺癌细胞中miR-181a浓度,用Western blot检测相应细胞CARF基因蛋白表达情况。结果：miR-181a在胰腺癌组织/细胞中的表达水平明显高于正常胰腺组织/细胞（P＜0.05）。转染miR-181a拮抗剂可显著下调胰腺癌细胞中miR-181a的表达,并使其增殖能力明显下降（P＜0.05）。双荧光素酶报告基因系统提示miR-181a与包含CARF基因3’-UTR序列的载体共转染,可明显下调荧光素酶活性,且下调水平与miR-181a剂量呈负相关（P＜0.05）;CARF蛋白表达情况和胰腺癌细胞中miR-181a水平呈显著负相关（P＜0.05）。结论：miR-181a在胰腺癌细胞中存在高表达,通过下调CARF靶基因促进细胞增殖而推动胰腺癌的发展。