大鼠主动脉内膜损伤后新生内膜各种生长因子表达与表没食子儿茶素没食子酸酯的干预

目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3 gallate,EGCG)对大鼠主动脉内膜损伤后再狭窄的影响,探讨其对新生内膜各种生长因子表达的干预效应。方法:实验于2006-03/10在汕头大学医学院细胞衰老实验室完成。实验分组:选用清洁级雄性健康SD大鼠72只,体质量(300±35)g,随机数字表法分为对照组、模型组、EGCG低剂量组和EGCG高剂量组,每组18只。实验方法:以球囊损伤方法建立大鼠主动脉内膜损伤模型。①对照组:结扎左颈总动脉,不插入球囊导管,不给药。②模型组:结扎左颈总动脉并球囊拉伤主动脉内膜,不给药。③EGCG低剂量组:拉伤主动脉内膜,给予20mg/(kg.d)EGCG灌胃。④EGCG高剂量组:拉伤主动脉内膜,给予50mg/(kg.d)EGCG灌胃,药物组术前3d给药。对照组及模型组予生理盐水灌胃,直至实验结束。实验评估:每组于术后14,28d分别随机选取9只大鼠,取其主动脉进行苏木精-伊红染色并作血管形态学检测;同时进行免疫组织化学染色检测增殖细胞核抗原、血小板源性生长因子BB、碱性成纤维细胞生长因子、生长转化因子β1的表达水平。结果:纳入大鼠72只,其中模型组28d时1只鼠死于腹主动脉血栓;14d时1只鼠右后肢出现血栓性跛行;EGCG低剂量组14d时1只死于手术急性呼吸窘迫综合征,1只死于术后21d胸水形成,无血栓形成现象;EGCG高剂量组14,28d各有1只分别因感染、误灌入气管死亡,无血栓形成现象;对照组动物生长状况良好;最后67只大鼠进入结果分析。①模型组新生内膜显著增厚,新生内膜平均厚度、面积自胸主动脉到腹主动脉上段及下段逐渐增加、狭窄逐渐明显。②EGCG低剂量组新生内膜平均厚度及面积于术后14d下降,与模型组比较,无显著差异[(45.89±9.54),(60.75±17.70)μm;(1.10±0.29),(1.55±0.61)mm2;P>0.05],但两者于术后28d则显著降低(P<0.05);EGCG高剂量组术后14,28d的新生内膜平均厚度、面积均显著下降[14d:(20.21±5.55),(60.75±17.70)μm;(0.48±0.22),(1.55±0.61)mm2;28d:(35.08±12.39),(80.75±22.27)μm;(0.82±0.50),(2.35±1.03)mm2;P<0.01]。③模型组动脉增殖细胞核抗原、血小板源性生长因子BB、碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子β1表达显著增加;低剂量EGCG对内膜损伤后增殖细胞核抗原、血小板源性生长因子、碱性成纤维细胞生长因子表达无明显抑制作用;而高剂量在术后14,28d均显著抑制增殖细胞核抗原、血小板源性生长因子、碱性成纤维细胞生长因子表达。EGCG对转化生长因子β1表达无影响。结论:EGCG剂量依赖性地抑制动脉内膜损伤后再狭窄,其作用与抑制血小板源性生长因子、碱性成纤维细胞生长因子表达有关。     

神经干细胞研究进展

0 引言 神经干细胞(neural stem cells, NSCs)在临床应用中有广阔的前景,对它的研究一直是近年来的热点,现对NSCs的生物学特性,培养鉴定以及在中枢神经系统退行性疾病,缺血损伤和肿瘤治疗等方面的研究进展做一概述.     

野菊花水提液抗氧化作用的实验研究

目的：观察野菊花水提液的体内外抗氧化的作用。方法：分别用ＴＢＡ法、ＤＴＮＢ法及紫外分光光度测定脂质过氧化（ＬＰＯ）产物ＭＤＡ的含量、全血谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐx）及过氧化氢酶（ＣＡＴ）活力。结果：野菊花水提液体外可抑制大鼠心、脑、肝、肾组织自动ＬＰＯ及由Ｈ２Ｏ２引发的红细胞脂质过氧及溶血;小鼠ｉｇ给药２ｇ／（ｋｇ．ｄ）７ｄ,可显著升高全血ＧＳＨ－Ｐx、ＣＡＴ活力（Ｐ〈０．０５）。结论：野菊     

Colorectal cancer biomarkers: To be or not to be? Cautionary tales from a road well travelled

Colorectal cancer(CRC)is the second most common cause of cancer-related death worldwide and places a major economic burden on the global health care system.The time frame for development from premalignant to malignant disease typically spans 10-15 years,and this latent period provides an ideal opportunity for early detection and intervention to improve patient outcomes.Currently,early diagnosis of CRC is hampered by a lack of suitable non-invasive biomarkers that are clinically or economically acceptable for populationbased screening.New blood-based protein biomarkers for early detection of CRC are therefore urgently required.The success of clinical biomarker discovery and validation studies is critically dependent on understanding and adjusting for potential experimental,analytical,and biological factors that can interfere with the robust interpretation of results.In this review we outline some important considerations for research groups undertaking biomarker research with exemplars from our studies.Implementation of experimental strategies to minimise the potential effects of these problems will facilitate the identification of panels of biomarkers with the sensitivity and specificity required for the development of successful tests for the early detection and surveillance of CRC.     

成纤维细胞胶原合成及细胞内STAT6蛋白磷酸化与白细胞介素13的促进作用

目的:观察重组白细胞介素13对成纤维细胞3T3的胶原合成作用,及其在3T3细胞胞内的信号转导途径,探讨白细胞介素13促纤维化的作用机制。方法:实验于2005-03/2006-03在江西医学科学研究所江西省医学生物高技术重点实验室进行。将3T3细胞分为实验组和对照组,在进行实验前,两组细胞均用无血清DMEM培养12～16h,实验组加重组白细胞介素13(100 μg/L),作用24,48,72h后,应用胶原纤维特殊染色观察白细胞介素13作用下3T3细胞体外合成胶原纤维情况;上清液用羟脯氨酸试验检测细胞分泌的总胶原含量;用逆转录-聚合酶链反应检测3T3细胞白细胞介素13受体的表达;用免疫印迹技术检测白细胞介素13作用0,1,2,4h后STAT6蛋白磷酸化情况,组间比较采用t检验。结果:①实验组细胞胶原纤维合成增加及上清液分泌总胶原含量高于对照组(P<0.05)。②逆转录-聚合酶链反应检测到3T3细胞表达白细胞介素13受体α1。③免疫印迹技术检测到白细胞介素13作用1,2,4h均有磷酸化STAT6蛋白表达,且白细胞介素13作用2h磷酸化STAT6蛋白表达最强,4h衰减。结论:白细胞介素13受体α1在3T3细胞上表达,重组白细胞介素13促进3T3细胞胶原合成和STAT6蛋白磷酸化,可能在纤维化发病机制中发挥重要作用。     

胰岛素在严重烧伤大鼠急性肺损伤中的保护作用

目的:观察胰岛素对严重烧伤所致的急性肺损伤的保护效应。方法:实验于2006-01/08在解放军第四军医大学西京医院全军烧伤中心实验室完成。取成年雄性SD大鼠36只,随机分成3组,每组12只:①烫伤 胰岛素组:水浴锅94℃,20s,制备30%总体表面积全层皮肤烫伤模型,伤后即刻腹腔注射生理盐水40mL/kg,并皮下注射胰岛素3U/kg。②烫伤组:造模和腹腔注射同烫伤 胰岛素组,皮下注射等体积生理盐水。③假烫组:用室温水浴模拟烫伤过程,伤后不给予补液。烫伤24h后,收集动脉血测定超氧化物歧化酶活性,收集支气管肺泡灌洗液测定蛋白含量,取肺组织进行苏木精-伊红染色观察病理变化,并测定髓过氧化物酶活性,同时电镜观察胸主动脉血管内皮细胞变化情况。结果:36只大鼠进入结果分析。①肺病理变化:烫伤 胰岛素组肺脏渗出和水肿较烫伤组明显减轻。②肺泡灌洗液中蛋白的质量浓度:烫伤组和烫伤 胰岛素组高于假烫组[(702.9±169.5),(486.5±149.2),(240.5±140.7)mg/L,P<0.05],烫伤 胰岛素组低于烫伤组(P<0.05)。③肺脏髓过氧化物酶活性:烫伤 胰岛素组低于烫伤组[(36.01±8.17),(59.51±12.50)nkat/g,P<0.05],与假烫组比较差异不显著。④血清超氧化物歧化酶活性:烫伤组和烫伤 胰岛素组低于假烫组[(2.27±0.18),(2.63±0.19),(2.81±0.21)mkat/L,P<0.01,0.05],烫伤 胰岛素组高于烫伤组(P<0.01)。⑤电镜下可见烫伤 胰岛素组内皮细胞损伤较烫伤组轻。结论:严重烧伤早期外源性胰岛素干预后可减轻急性肺损伤,具有明显的肺脏保护作用,这种作用可能与胰岛素的内皮细胞保护效应有关。     

腰神经根受压模型大鼠神经根局部炎症因子对温和灸的反应

目的:观察温和灸对腰神经根受压模型大鼠受压神经根局部炎症因子白细胞介素1和白细胞介素6的调节作用,并与灌胃给药莫比可相比较。方法:实验于2005-09/2006-04在上海第六人民医院实验中心完成。①分组:将40只SD大鼠随机分为4组,正常对照组,模型对照组,温和灸组及莫比可组,每组10只。②方法:温和灸组、莫比可组、模型对照组通过手术建立大鼠腰神经根压迫模型,正常对照组做与以上各组相同的捆绑固定,不予手术。温和灸组穴位选取受压神经根相应节段右侧的夹脊穴,采用精制清艾条以穴位为中心、半径为5mm的区域进行温和灸,20min/次,1次/d,7次为1个疗程,共治疗14次。莫比可组按3.75mg/kg灌胃莫比可(10mL生理盐水含药物5mg),每天灌胃1次。正常对照组及模型对照组:生理盐水灌胃10mL/kg,每日灌胃1次。于治疗14d后麻醉下处死取受压神经根组织。③评估:于光镜下观察受压神经根组织形态学变化;用免疫组织化学技术检测神经根局部炎症因子白细胞介素1、白细胞介素6水平。结果:40只大鼠均进入结果分析。光镜下观察温和灸组神经节细胞、神经纤维结构基本正常,见极少量炎细胞。与模型对照组相比,温和灸组与莫比可组神经根局部炎症因子白细胞介素1、白细胞介素6的含量有不同程度的减少(P<0.05);温和灸治疗组白细胞介素1、白细胞介素6的水平低于莫比可组(P<0.01)。结论:温和灸及西药莫比可均能有效抑制神经根局部炎症因子分泌,其中温和灸作用迅速,其效果明显优于莫比可。     

髋关节置换术后人工假体周围早期骨量变化的连续观察

目的:连续观察髋关节置换术后人工假体周围早期骨量变化,为假体技术完善和骨量丢失的药物预防提供依据。方法:选择2004-01/2006-01在商丘市第一人民医院骨科住院进行人工髋关节置换术患者55例,均在术后1周、3、6和12个月时用双能X线骨密度仪进行人工假体周围骨量测定(髋臼假体区,采用Wilkinson4区法,即R1、R2、R3、R4区;股骨柄假体区,采用Gruen方法分7个测量兴趣区,即ROI①、②、③、④、⑤、⑥和⑦区),上述采集数据与同一患者未置换部位比较。结果:55例患者均进入结果分析。①髋臼区骨密度:髋臼区术侧与健侧术后1周检查时各扫描区域骨密度检测值分布接近(P均>0.05),但在术后3、6和12个月检查中,术侧R1、R2和R3区骨密度全部测试结果均明显低于健侧同部位检测值(P均<0.05～0.01),两侧间R4区骨密度测试结果无明显区别(P>0.05)。②股骨区骨密度:术后1周时术侧各扫描区域骨密度检测值与健侧分布接近(P均>0.05),在术后3、6和12个月检查中,术侧ROI①、②、③、⑥和⑦区骨密度全部测试结果均明显低于健侧同部位检测值(P均<0.05～0.01),两侧间ROI④和⑤区骨密度大部分测试结果无明显区别(P均>0.05)。结论:髋关节置换术患者人工假体周围早期骨量丢失以R1、R2、R3区和ROI①、②、③、⑥、⑦区较为明显,并多发生术后3～12个月。     

不同牵引节奏对快速牵引治疗腰椎间盘突出症的影响

目的:不同牵引节奏对腰椎间盘突出症的治疗效果是否可以产生影响?分组比较其效果,以探索疗效更好、不良反应更少的牵引方法。方法:①对象:选择2005-10/2006-04山东省立医院门诊和病房以及济南华飞骨伤医院病房收治的腰椎间盘突出症患者220例,男116例,女104例;年龄(17～68)岁;病程1d～3年。②分组:按随机数字表法将患者分为一维牵引慢牵快放组60例,一维牵引快牵慢放组60例,三维牵引慢牵快放组50例,三维牵引快牵慢放组50例。各组性别、年龄、病程均衡。③干预:各组患者在普通治疗的基础上施以不同牵引节奏的牵引治疗。一维牵引慢牵快放组和快牵慢放组:应用山东省医疗器械研究所生产的WQL-307型牵引床,牵放时间分别为3～5s/0.5s,0.2s/1s;三维牵引慢牵快放组和快牵慢放组:应用济南市华飞产业有限公司生产的C型电脑三维牵引床,牵放时间分别为3～5s/0.5s,0.2s/1s;各组牵引距离为40～60mm,均牵引一两次,间隔不少于5d。④评估:观察各组患者临床疗效及治疗前后日本骨科学会(JOA)总评分变化。结果:220例患者全部进入结果分析。①临床疗效:一维慢牵快放牵引组的总有效率优于一维快牵慢放牵引组(91.67%,78.33%,P<0.05);三维慢牵快放牵引组的总有效率优于三维快牵慢放牵引组(96.00%,80.00%,P<0.05)。②治疗前后JOA总评分比较:一维慢牵快放牵引组前后差值与一维快牵慢放牵引组前后差值比较,差异有显著性(8.50±3.89,6.02±2.61,P<0.05),三维慢牵快放牵引组前后差值与三维快牵慢放牵引组前后差值比较,差异有显著性(9.14±4.09,6.78±2.45,P<0.05)。结论:无论是一维牵引慢牵快放还是三维牵引慢牵快放的疗效都优于传统的快牵慢放牵引法。慢牵快放牵引法能使手法的颤压力更有效地传递到突出物上,在安全前提下可牵引距离更大,相应椎间隙加大,后纵韧带牵张力增加,更有利于突出物变位还纳。     

Enzymatic conjugation of erythrocyte glutathione with 1-chloro-2,4- dinitrobenzene: the fate of glutathione conjugate in erythrocytes and the effect of glutathione depletion on hemoglobin

Erythrocyte glutathione (GSH) can be rapidly depleted by incubating the cells with 1-chloro-2,4-dinitrobenzene (CDNB), which forms 2,4- dinitrophenyl-S-glutathione with GSH through the reaction catalyzed by glutathione S-transferase. GSH-CDNB conjugate thus formed stays undegraded within the erythrocytes. This indicates that in the erythrocytes, mercapturic acid pathway is inoperative. Depletion of GSH in the intact erythrocytes by CDNB results in rapid oxidation of large amounts of hemoglobin to methemoglobin. When glutathione S-transferase- free hemolysate of erythrocytes is incubated with CDNB, the depletion of GSH as well as methemoglobin formation are minimal. Glutathione peroxidase and glutathione reductase activities of the erythrocytes are not affected by CDNB. These studies provide a specific enzymatic method for rapid removal of erythrocyte GSH and also indicate that GSH is vital in maintaining a reduced environment within the erythrocytes.