运用甘油磷酸氧化酶法测定冰冻红细胞解冻后残留甘油的含量

目的 建立测定冰冻红细胞解冻洗涤后残留甘油含量的酶学方法测定工艺.方法 进行甘油磷酸氧化酶法的线性范围测定、重复性、准确性(回收试验)、游离血红蛋白干扰试验,并比较不同样本处理方法(钨酸钠裂解法、三氯醋酸裂解法及制备后2h直接取上清液法)对酶法检测甘油的影响;进行系列浓度甘油红细胞酶法测定结果与传统过碘酸钠滴定法测定结果比对.结果 用GPO-PAP法检测甘油浓度在0.05～2.0 g/L时有较好的线性关系,,=0.9994,Y=0.942 X+0.0239;甘油含量为0.2 g/L、1.0 g/L的样本,批内CV值分别为2.68％、0.81％(n=20),日间CV值分别为4.59％、4.37％(n=20);甘油浓度从0.29～2.09 g/L间其回收率97.1％～100.8％,样本的平均回收率为99.0％;10g/L游离血红蛋白对GPO-PAP法检测结果无干扰;3种样本处理方法所测得的系列浓度甘油红细胞样品及解冻去甘油红细胞制品(n=18)酶法测定结果一致(P＞0.05);系列浓度甘油红细胞测定结果显示酶法测定比滴定法更准确,滴定法测定值偏高.结论 甘油磷酸氧化酶法可用于冰冻解冻去甘油红细胞制品中残留甘油含量的测定,方法简便、快速、准确、重复性好.3种样本处理方法对GPO-PAP法检测甘油含量无影响.     

糖尿病周围血管病患者内皮祖细胞一氧化氮、内皮型一氧化氮合酶含量的变化

目的 观察糖尿病周围血管病患者内皮祖细胞(endothelial progentior cells,EPC)一氧化氮(NO)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达的变化.方法 采用硝酸还原酶法测定NO的浓度,免疫印迹杂交法(Western blot)半定量测定eNOS的含量.结果 糖尿病合并周围血管病组EPCs数量最少,增殖、迁移和黏附能力降低,No和eNOS表达最弱,糖尿病无血管痛组表达增强,对照组表达最多,差异具有统计学意义(P＜0.05).No和eNOS的表达与EPC的数量呈正相关(r=0.651,P＜0.05).结论 糖尿病合并周围血管病患者EPC数量减少,功能降低,可能与eNOS、NO表达减弱有关.     

慢病毒载体介导的RNAi技术构建稳定抑制β-catenin的人鼻咽癌细胞株

目的建立稳定抑制β-catenin基因表达的人鼻咽癌6-10B细胞株,为探讨Wnt/β-catenin信号在鼻咽癌发生中的作用提供细胞模型。方法于β-catenin CTNNB1基因编码区选择3个siRNA靶点合成3对shRNA干扰序列,分别与pLKO.1载体连接,构建pLKO.1-sh-β-catenin质粒(干扰组1)、pLVTHM-sh-β-catenin(干扰组2)和pLKO.1-sh-β-catenin-Neg质粒(阴性对照组);将重组质粒与慢病毒包装质粒共转染293T细胞,收集含慢病毒颗粒的上清液感染人鼻咽癌6-10B细胞,感染pLKO.1-sh-β-catenin和pLKO.1-sh-β-catenin-Neg质粒的细胞经嘌呤霉素筛选并扩大培养后得到稳定克隆株。Western blot检测干扰组β-catenin抑制效率及下游基因c-myc蛋白的表达;四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测比较细胞增殖状况,Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移率。结果 Western blot检测结果显示pLKO.1-sh-β-catenin(干扰组1)干扰效率最佳,β-catenin及c-myc蛋白表达减少;MTT检测显示干扰β-catenin后细胞吸光度下降,细胞增殖受到抑制;穿过Transwell小室底膜的细胞数:干扰组1为(23.5±4.6)个,明显低于阴性对照组(50.3±5.3,P<0.01)及空白对照组(54.3±5.6,P<0.01)。结论成功构建了β-catenin shRNA慢病毒表达载体,建立了稳定抑制β-catenin基因表达的人鼻咽癌6-10B细胞株,为进一步研究以β-catenin为靶点的鼻咽癌基因治疗奠定基础。     

Increased Expression of PI-3K in Asthmatic Rat T Lymphocytes

In order to explore the expression of PI-3K in T lymphocytes of asthmatic rats and the relationship between PI-3K and activation of T lymphocytes, 24 Wistar rats were randomly divided into 4 groups: normal control group, asthmatic one-week group, asthmatic two-week group and asth-matic four-week group. T cells were purified from blood of each rat and the expression of PI-3K was observed by immunocytochemical fluorescence staining, the semiquantitative fluorescence intensity was measured by HPIAS-2000 analytic software, and the expression of IL-4 in supernatants was de-tected by ELISA. The results showed that the fluorescence intensity of T lymphocytes in asthmatic groups was significantly higher than that in normal control (P<0.001), indicating that the expression of PI-3K in T lymphocytes of asthmatic rats was significantly higher than that in those of normal controls, and the difference between acute and chronic stage asthmatic groups was significant (P<0.05). The expression levels of IL-4 protein in supernatants of asthmatic T lymphocytes were sig-nificantly higher than those in the normal controls (P<0.05). There was a significant positive correla-tion between the expression of PI-3K in T lymphocytes and the IL-4 protein expression in super-natants (r=0.583, P<0.01). It was suggested that PI-3K signal pathway may participate in the proc-esses of activation and other cytological effects of asthmatic T lymphocytes, thus may play an impor-tant roles in the pathogenesis of asthma.     

慢性主动脉瓣关闭不全患者左室功能对运动的反应

本文对41例慢性主动脉瓣关闭不全(chronic aortic regurgitation,CAR)患者和20例对照者的研究指出,症状性和无症状性CAR患者在运动时呈异常左心室功能储备力,主动脉瓣返流减少,且休息时主动脉瓣关闭不全越严重,运动时返流量减少越明显。     

黑斑息肉病28例临床分析

目的 总结黑斑息肉病的临床特征及探讨治疗方式的选择。方法 回顾性分析28例黑斑息肉病的诊断及治疗。结果 近半数患者家族史明显,腹痛、便血、皮肤黏膜色素沉着为主要临床表现,肠梗阻、消化道出血、恶变为主要并发症,内镜高频电凝切除术(PSD)、息肉切除、肠切除为主要治疗手段。结论 黑斑息肉病患者是典型的恶性肿瘤高发人群,发病年龄轻,分化较差。应定期复查内镜,行PSD是提高黑斑息肉病远期疗效的有效方法。     

利用生物共振系统对十堰地区过敏性疾病患者过敏原的检测分析

目的:探讨生物共振系统检测过敏原的准确性和十堰地区过敏性疾病患者过敏原的分布特征。方法:利用生物共振系统对十堰地区的581例过敏性疾病患者进行过敏原检测,其中188例病人利用本地抗原同时进行皮内注射试验,比较两种检测方法结果的一致性。结果:①两种过敏原检测方法结果相比较,差异无统计学意义(χ2=2.456,P>0.05)。②十堰地区97.2%的过敏性疾病患者都存在明确的过敏原,人均过敏原阳性3.43次。其中吸入类占46.4%,以螨类、花草混合物和柳属为主;食物类占24.3%,以海水鱼Ⅱ、淡水鱼Ⅰ和牛奶为主;感染类占11.0%,以真菌为主;接触类占10.6%,以甲醛为主;动物类占5.2%,以动物毛屑为主;其他过敏原占2.5%。结论:生物共振系统用于过敏原的检测,结果准确可信。十堰地区过敏性疾病患者的过敏原分布具有一定特征,可为本地区过敏性疾病的防治提供依据。     

胃癌危险因素的病例对照研究

目的　探索湖南省胃癌发生的危险因素和保护因素 ,为综合防治提供流行病学依据。方法　采用 1:1配对的病例对照研究 ,对 175对病例及对照进行饮食及生活行为问卷调查。用比值比(OR)来估计各危险因素与胃癌的联系强度 ,采用Logistic回归进行单因素和多因素分析 ,筛选出胃癌的危险因素。结果　影响胃癌发生的主要危险因素有 :饮酒 (OR =1.5 8,95 %CI1.18～ 2 .13)、饮食不规律 (OR =2 .0 0 ,95 %CI 1.34～ 3.10 )、高盐饮食 (OR =1.82 ,95 %CI 1.2 1～ 2 .74 )等 ;饮绿茶 (OR =0 .4 7,95 %CI 0 .2 6～ 0 .85 )是胃癌发生的保护因素。结论　纠正不良的饮食及生活行为 ,经常饮绿茶可能减小胃癌的发生的危险性     

急性髓细胞性白血病病人TCRζ链基因表达特点

目的 建立实时定量PCR方法检测TCRζ链表达水平的方法,了解急性髓细胞性白血病病人外周血TCRζ链基因表达水平.方法 采用SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR和相对定量分析法检测31例急性髓细胞性白血病患者(M1型6例,M2型15例,M3型10例)和30例正常人外周血的单个核细胞的TCRζ链表达情况,以β2微球蛋白基因(Β2m)作为内参,根据相对定量公式2-△△α计算急性髓细胞性白血病患者与正常人TCRζ链表达差异倍数.结果 与正常人相比,急性髓细胞性白血病患者TCRζ链表达特点可以分为表达缺失(16%)、表达下降(26%)和表达上升(58%)三种情况.而三种不同亚型急性髓细胞性白血病之间的TCRζ链表达模式相似.结论 本研究成功建立了SYBR Green Ⅰ荧光实时定量PCR和相关定量分析TCRζ链表达水平技术,并首先报道了急性髓细胞性白血病病人TCRζ链表达水平的变化.     

缺氧时肺动脉平滑肌细胞血红素氧合酶/一氧化碳系统的变化及其对Ⅰ型胶原的影响

目的 :研究缺氧时大鼠肺动脉平滑肌细胞 (PASMC)诱导型血红素氧合酶 (HO 1 ) /一氧化碳 (CO)系统的变化及其对胶原合成的影响 ,探讨血红素氧合酶 /一氧化碳 (HO/CO)系统对缺氧性肺血管重建中胶原代谢的作用及其机制。方法 :原代培养的大鼠PASMC ,用分光光度计检测PASMC培养液中CO相对含量的变化 ,Westernblot检测PASMCHO 1和转化生长因子 β3 (TGF β3 )表达的变化 ,用免疫细胞化学法分别观察PASMCHO 1、TGF β3 、Ⅰ型胶原蛋白表达的变化 ,原位杂交法检测Ⅰ型前胶原mRNA表达的变化。结果 :缺氧 2 4h诱导PASMC表达TGF β3 、Ⅰ型胶原蛋白和mRNA ,与对照组比较缺氧使HO 1蛋白表达增加 6 7.4 5 % (P <0 .0 1 )、CO含量增加35 .4 1 % (P <0 .0 5 )。ZnPP(HO 1抑制剂 )使缺氧 2 4h大鼠PASMC的CO含量降低 7.88% (P <0 .0 1 )、HO 1蛋白表达减少 2 3.9% (P <0 .0 5 )、TGF β3 蛋白表达增高 393% (P <0 .0 1 )、Ⅰ型胶原蛋白和mRNA表达均增加。Hemin(HO 1诱导剂 )使缺氧 2 4h大鼠PASMC的CO含量增加 8.83% (P <0 .0 1 )、HO 1表达增高 1 0 5 % (P <0 .0 5 )、TGF β3 蛋白表达降低 6 8.1 2 % (P <0 .0 1 ) ,Ⅰ型胶原蛋白和mRNA表达均减少。结论 :缺氧刺激下大鼠PASMCHO/CO系统上调 ,内源性CO能够抑制Ⅰ型胶原