基因定量检测方法研究进展

基因定量检测已经成为研究基因组变异以及由于基因重组所引起的相关疾病的重要手段。大片段的基因组的重复和缺失可以引起致病突变。使用PCR和测序等定性检测方法很难探测到杂合状态的缺失和重复,因此探寻高效、可靠、灵敏的基因定量检测方法是当务之急。在过去的几年中已经相继出现了一些自动高效的技术方法。现在可用的基因定量方法大致可以分成3类:DNA印迹技术,细胞遗传学方法和以PCR扩增为基础的定量。本文对基因定量的最新进展作一综述,探讨其优缺点以期对定量研究方法的选择有所帮助。     

行为干预对慢性乙型肝炎患者健康相关行为影响的研究

目的 观察行为干预对慢性乙型肝炎患者健康行为的影响。方法 将300例慢性乙型肝炎患者作为目标人群进行健康教育，建立目标人群管理档案，进行目标人群健康行为干预，比较教育前后相关行为的改变。结果 慢性乙型肝炎患者8项健康行为和8项危险健康行为有明显改观，差异具有统计学意义（P〈0．01）。结论 通过行为干预，有效地使慢性乙型肝炎患者完全遵从医嘱合理用药，完全依从健康行为，从而减少危险行为的发生。     

脂质体介导的单纯疱疹胸苷激酶基因在人前列腺癌细胞中的表达

目的：提取并鉴定已构建的EB病毒表达载体pDR2-TK，利用脂质体介导的基因转染技术将pDR2-TK转染人前列腺癌细胞并对单纯疱疹胸苷激酶（HSV－TK）表达状况进行检测。方法：采用DNA大量制备及纯化系统提取pDR2-TK，酶切和DNA测序进行鉴定，采用阳离子脂质体法将pDR2-TK导入激素非依赖性人前列腺癌细胞系PC－3m，逆转录PCR（RT－PCR）法和SABC免疫组化法检测TK mRNA和蛋白的表达。结果：扩增提取的质粒经PstⅠ和EcoR Ⅴ酶切后各获得4个及2个片段，与原基因酶切图谱一致；所提取质粒PCR产物经DNA测序，与NCBI公布的HSV－TK基因序列对照，证实所提取质粒含目的基因序,旨质体法转染PC－3m细胞后，mRNA和蛋白均有HSV－TK的表达，其蛋白表达率约为22％。结论：pDR2-TK质粒含有目的的基因HSV－TK，阳离子脂质体法可将pDR2-TK导入人前列腺癌细胞并获得较高效率的表达。     

人野生型parkin基因真核表达载体的构建及其在PC12细胞中的表达

目的 克隆人野生型parkin基因并构建真核表达载体pCDNA3．1—parkin，将重组质粒转染PC12细胞获得高表达人野生型parkin基因的PC12细胞克隆。方法 从胎脑组织中提取总RNA，用RT—PCR方法获得人野生型parkin基因的全长cDNA，插入pCR2．1—TA克隆载体中进行序列测定，测序正确后将其亚克隆至表达载体pCD—NA3．1，利用脂质体将重组质粒转染PC12细胞，经G418筛选获得抗性细胞克隆，采用RT—PCR和Western Blot方法鉴定人野生型parkin基因在PC12细胞中的过表达。结果 经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列测定证实目的基因已插入重组质粒，RT—PCR和Western Blot证明经G418筛选得到的转基因PC12细胞克隆中存在人野生型parkin基因的表达。结论 成功构建了人野生型parkin基因的真核表达载体，获得了稳定表达人野生型parkin基因的PC12细胞克隆，为进一步研究parkin的生物学功能以及parkin在帕金森病发病机制中的作用奠定了良好的基础。     

门静脉置管注射中西药对慢性乙肝患者细胞免疫功能影响的探讨

目的探讨经门静脉注射药物治疗慢性乙型肝炎的可行性,观察门静脉置管注射中西药对慢性乙型肝炎患者细胞免疫功能的影响。方法8例肝癌术后的慢性乙型肝炎患者,于肝癌手术时皮下埋置药盒门静脉内置管,向药盒内注入胸腺肽40mg,黄芪注射液10ml。治疗前后用流式细胞术绝对计数T淋巴细胞及其亚群、自然杀伤细胞(NK),并观察其副反应。结果治疗前后CD3665.63±434.80个/μlvs1326.50±551.09个/μl,CD3 CD8 275.63±205.78个/μlvs513.50±231.00个/μl,CD3 CD4 515.88±329.75个/μlvs981.75±478.54个/μl,NK细胞130.86±176.58个/μlvs303.43±190.90个/μl,差异具有显著性意义(P<0.05),除1例中度发热、4例轻度发热外,无其他副反应。结论胸腺肽与黄芪合用可增强慢性乙肝患者的细胞免疫功能。经门脉注射药物可能成为乙肝治疗的新途径,应加大样本进一步研究。     

杜仲对糖尿病大鼠扑捉行为和阴茎组织神经传导通路的影响

目的:探讨杜仲改善勃起功能的药效和病理学机制。方法:雄性糖尿病(DM)大鼠30只随机分为3组:A组(10只,DM大鼠赋形剂灌胃组)、B组(10只,DM大鼠西地那非灌胃组)、C组(10只,DM大鼠杜仲灌胃组)及10只正常对照组大鼠(赋形剂灌胃,D组);灌胃4周后观察4组大鼠扑捉行为,透射电镜检查阴茎组织有髓神经纤维超微特征;用免疫组化二步法显示阴茎组织中神经元型一氧化氮合酶(nNOS)的表达。结果:与A组比较,C组大鼠扑捉次数显著增多(P<0.05),阴茎组织中nNOS表达显著增强(P<0.001)。透射电镜显示:A组大鼠阴茎组织有髓神经纤维排布失序,部分变性、板层分离形成透明空泡或网络状,C组大鼠有髓神经纤维排列规整,板层结构清晰。结论:杜仲可通过减轻有髓神经的损伤、增强阴茎组织中nNOS表达改善ED。     

Pretreatment with recombined human erythropoietin attenuates ischemia–reperfusion-induced lung injury in rats

Objective: Based on the findings that erythropoietin (EPO) has been proved to be a multiple functional cytokine to attenuate ischemia–reperfusion (I/R) injury in various organs such as brain, heart, and kidney in animals, this experiment was designed to evaluate the effect of pretreatment with recombined human erythropoietin (rhEPO) on I/R-induced lung injury. Methods: Left lungs of rats underwent 90 min of ischemia and then were reperfused for up to 2 h. Animals were randomly divided into three experimental groups as sham group, I/R group, and rhEPO + I/R group (a single dose of rhEPO was injected intraperitoneally 3000 U/kg 24 h prior to operation). Lung injury was evaluated according to semi-quantitive analysis of microscopic changes, tissue polymorphonuclear neutrophils (PMNs) accumulation (myeloperoxidase (MPO) activity), and pulmonary microvascular permeability (Evan's blue dying method). Peripheral arterial and venous blood samples were obtained for blood–gas analysis after 5 min occlusion of right lung hilus at the end of reperfusion. The serum concentration of tumor necrosis factor (TNF)- was also measured by the method of enzyme-linked immunosorbent assay. Results: Histological injury scoring revealed significantly lessened lung alveolus edema and neutrophils infiltration in the rhEPO pretreated group compared with I/R group (p < 0.05). The rhEPO pretreated animals exhibited markedly decreased lung microvascular permeability (p < 0.05) and myeloperoxidase activity (p < 0.05). Blood–gas analysis demonstrated that the pretreated animals had significantly ameliorated pulmonary oxygenation function (p < 0.05). The serum concentration of tumor necrosis factor- in rhEPO pretreated group was markedly decreased compared with that of I/R group (p < 0.05). Conclusions: Pretreatment with rhEPO appears to attenuate I/R-induced lung injury. This function is partly related with the capacity that rhEPO inhibits the accumulation of polymorphonuclear neutrophils in lung tissue and decreases the systematic expression of tumor necrosis factor-.     

创伤输血的研究进展

现代创伤大多数伤情严重，失血量大。早期输血是救治危重患者的主要手段之一，尤其是失血性休克患者，尽快输血，改善组织微循环，可取得理想的救治效果。Schulman等报告美国每年创伤患者的数量庞大，仅1996年就有173900人死于创伤，2782400人因创伤而入院接受治疗，他们当中15％入院时即处于休克状态，为挽救其生命就需要输血。随着我国工业的快速发展，创伤患者逐年增多，输血在创伤救治中扮演着重要的角色。国内有关创伤输血的研究报道较少，为此，笔者对创伤患者输血相关的问题综述如下。     

丙帕锗的制备及分析

目的 探索合成条件，制备体内活性和稳定性好的高聚物丙帕锗．并分析其结构确定目的物的正确性。方法 以GeO2为起始原料，磷酸二氢钠为还原剂,制备3-氧锗丙烯酸低分子量聚合物和高分子量3-氧锗丙烯酸(丙帕锗)，并进行元素、红外光谱、核磁共振和X-射线的分析。结果 高分子量聚合物生成，在320℃以下不分解，终产率为72．9％。结论 所采用的方法可行，合成的产品结构正确。     

内镜治疗老年总胆管结石30例体会

目的：探讨内窥镜治疗老年总胆管结石的安全性和有效性。方法：对我院普外科收治的30例70岁以上的老年总胆管结石患者进行回顾性分析，所有患者均经B超或螺旋CT明确诊断并接受内镜治疗，治疗方法包括逆行胰胆管造影（endoscopic retrograde cholangiopancreatography,ERCP)，鼻胆管引流（endoscopic nasobiliary drainage,ENBD)，乳头括肌切开（endoscopic shincterotomy,est)和取石术，碎石术，测定患者内镜治疗前后的生化指标变化。结果：30例老年总胆管结石患者行ERCP检查，成功率100％，28例行EST，总胆管结石直径＜1.0cm者成功率100％，结石直径1.0-1.5cm者成功率86％，结石直径≥1.5cm者需进行机械碎石取石，成功率75％；另有2例患者植入塑料支架作长期引流。1例患者发生与内镜有关的并发症，死亡例，30例患者治疗后各项生化指标较治疗前均有明显改善（P＜0．001）。结论：内镜治疗老年总胆管结石成功率增高，避免了手术创新，安全性好，缩短住院时间，是当前治疗老年总胆管结石的首选方法。