shRNA真核表达质粒介导的RNA干扰对人结肠癌LoVo细胞mTOR基因表达的抑制作用

目的探讨shRNA真核表达质粒介导的RNA干扰技术对人结肠癌LoVo细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）基因表达的抑制作用。方法合成编码shRNA的特异性DNA序列，连接到质粒pGenesil-1，采用脂质体Lipofectamine^TM 2000转染LoVo细胞，G418筛选4周。根据转染质粒的不同，实验分为3组：A组（正常对照组）为未转染的正常培养LoVo细胞，B组（阴性对照组）为转染pGenesil-1空载体质粒，C组（阳性实验组）为转染质粒pGenesil-1-mTOR。采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测LoVo细胞mTOR基因mRNA表达，免疫印迹（Western blot）法检测mTOR蛋白表达。结果双酶切产物琼脂糖凝胶电泳显示，重组质粒pGenesil-1-mTOR和空载体质粒pGenesil-1分别切出一条410、350bp大小的片段。G418筛选的转染细胞在倒置荧光照相显微镜下可观察到绿色荧光。C组LoVo细胞mTOR基因mRNA表达水平明显低于A组（P〈0.05），表达抑制率为73．0％。C组LoVo细胞mTOR蛋白表达水平明显低于A组（P〈0．05），表达抑制率为72．5％。结论shRNA真核表达质粒介导的RNA干扰可明显抑制人结肠癌LoVo细胞mTOR基因表达。     

翼状胬肉切除联合自体角膜干细胞移植术后巩膜融解

目的:探讨翼状胬肉切除联合自体角膜干细胞移植术后巩膜融解的原因及处理方法。方法:回顾性分析276例2001年3月至2006年8月在我院行翼状胬肉切除联合自体角膜干细胞移植术治疗原发性翼状胬肉患者,术后有7例(2.54%)术区巩膜出现融解坏死,取坏死组织涂片、微生物培养及病理检查,并对7例患者进行血清学检查。1例融解范围大者行带蒂球结膜瓣转位移植,修补将要穿孔处。7例采用贝复舒眼药水点眼并泰利必妥眼膏包眼,每天换药,持续3-5 d。待有血管长入术区巩膜时改为环孢霉素A眼水点眼4次/d。结果:7例患者细菌及真菌培养均未见微生物生长,病理检查:7例均未见白细胞浸润。1例修补术后及另外6例均恢复良好,眼球运动正常,视力同未行胬肉切除术前时视力。随访12-24月,7例术区外观无异常变化。结论:手术因素造成的局部损伤缺血及诱发的免疫反应等可能是自体角膜干细胞移植术后巩膜融解的因素。     

人视网膜色素上皮细胞条件培养液对视网膜干细胞生物学特性的影响

目的观察人胚视网膜色素上皮细胞条件培养液(HRPE-CM)对人胚视网膜干细胞(HRSCs)体外生物学特性的影响。方法利用HRPE-CM模拟体内环境,分为对照组、表皮生长因子(EGF) 碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)组和HRPE-CM组。体外培养HRSCs,通过细胞计数方法比较不同环境条件对HRSCs体外生物学特性的影响,并进一步鉴定其神经干细胞特性。结果与对照组比较,HRPE-CM对HRSCs有明显的促增殖作用(P<0.01);与EGF bFGF组相比较,HRPE-CM的促增殖作用也更为强大(P<0.01)。在HRPE-CM中培养的原代和子代HRSCs均表达Nestin,具有自我更新能力和多向分化潜能。结论HRPE-CM对HRSCs的增殖能力具有明显的促进作用,并且能很好地维持其神经干细胞特性。     

外周血穿孔素和颗粒酶B mRNA检测对胰腺移植急性排斥反应早期诊断的价值

目的 研究胰腺移植术后外周血穿孔素和颗粒酶B的基因表达对急性排斥反应早期诊断的价值.方法 实验动物为杂种长白猪,分为3组(n=8):对照组,移植组.免疫抑制剂治疗组.移植手术为同种异体门静脉回流、肠内引流全胰十二指肠移植.免疫抑制剂治疗组在行同种异体胰十二指肠移植的同时应用环孢A 骁悉 甲强龙三联免疫抑制治疗.分别于术前1 d和术后1、3、5、7 d采集受者锁骨下静脉血,抽提总RNA,RT.PCR方法检测静脉血淋巴细胞中穿孔素和颗粒酶B的mRNA表达,检测受者血糖、胰岛素、胰高血糖素水平.在术后1、3、5、7d,开腹取胰腺组织进行常规病理学检查,与血液中穿孔素和颗粒酶B的mRNA表达水平进行比较分析.结果 ①对照组、移植组、免疫抑制剂组之间受体的血糖、胰岛素、胰高血糖素水平变化差异无统计学意义.②与移植组比较,免疫抑制剂组静脉血淋巴细胞中穿孔索和颗粒酶B的mRNA表达水平下降(P<0.05).③胰腺移植术后静脉血穿孔素、颗粒酶B mRNA表达变化比急性排斥反应病理学改变早2～d.结论 监测外周血淋巴细胞中穿孔素和颗粒酶B mRNA表达的变化,可以对胰腺急性排斥反应做出早期诊断.     

血清妊娠相关蛋白A水平对代谢综合征患者预后评价

目的探讨血清妊娠相关蛋白A(PAPP-A)水平对代谢综合征(MS)患者危险分层和预后判断的价值。方法测定120例MS患者血清PAPP-A水平,根据检测的血清PAPP-A水平,以PAPP-A水平的75%百分位数值作为分界点,分为高PAPP-A水平组和低PAPP-A水平组,各组随访6个月,报告主要急性心血管事件发生率(包括不稳定型心绞痛、非致命性心肌梗死)及发生急性心血管事件后行经皮冠状动脉介入治疗(PC I)或冠状动脉旁路移植术(CABG)进行血运重建及死亡发生情况。结果随访期间无死亡病例。高PAPP-A水平组发生急性心血管事件8例,其中7例行PC I治疗,1例行CABG治疗,急性心血管事件发生率为26.7%(8/30);低PAPP-A水平组发生急性心血管事件3例,其中2例行PC I治疗,无CABG治疗者,急性心血管事件发生率为3.33%(3/90),高PAPP-A水平组急性心血管事件发生率明显高于低PAPP-A水平组(P<0.05)。随着血清PAPP-A水平的升高,6个月急性心血管事件的发病危险性随之上升,2组之间存在正向中等强度联系(OR=3.62,95%CI=1.83~6.21,P<0.05)。结论血清PAPP-A水平可作为MS患者有价值的预测指标,对筛选MS患者中高危患者具有重要意义。     

广东省人感染猪链球菌2型10株病原学特征

目的分析广东省2005-2006年分离的10株2型猪链球菌菌株的病原学特征，为诊断、治疗和制定今后防控措施提供科学依据。方法对10株菌进行常规方法鉴定及PCR技术检测。结果经血清学分型和生化鉴定，10菌株均为猪链球菌2型，其中9株菌三种基因（菌种基因（16SrRNA）、荚膜多糖编码基因（CPS2J）和溶菌酶释放相关蛋白基因（mrp））均阳性，1株菌mrp基因检测阴性。结论广东省人感染猪链球菌病由2型猪链球菌引起。     

儿童高危和超高危急性淋巴细胞白血病的预后因素分析

 【目的】 探讨影响我国儿童高危急性淋巴细胞白血病(HR-ALL)治疗和预后的因素。【方法】收集1999年5月～2007年3月在我院儿科初诊符合HR-ALL的患儿76例，其中VHR-ALL组41例。治疗上非VHR-ALL用蓉城98高危或ALLIC BFM2002MR方案化疗，VHR-ALL用中山大学附属第一医院高危方案化疗。【结果】 总放弃治疗率25%，总预期6年无事生存率(EFS)49.3%，坚持治疗者EFS64.7%，非VHR-ALL组坚持治疗者EFS78.8%。Cox模型分析显示诱导33 d不缓解或BCR-ABL阳性是不良的独立预后因素，高强度化疗不能改变其预后差的特性，而泼泥松不敏感与其它任一项高危因素并存时复发法的危险性明显增高。【结论】放弃治疗和复发是本组治疗失败的前2位原因，多数HR-ALL如能坚持合理治疗应有信心获得较好的预后，诱导33 d不缓解或BCR-ABL阳性患者应争取造血干细胞移植，2项或以上高危因素并存对预后的影响值得深入研究。     

人乳头状瘤病毒16型DNA诱导的永生化人喉上皮细胞系的建立(英文)

目的建立人乳头状瘤病毒（HPv）16型DNA诱导的永生化人喉上皮细胞系，确证HPv与喉癌的发生有无关系。方法采用脂质体介导法，将pSVHPV16DNA导入原代培养的人喉上皮细胞，继续培养、传代，取20代细胞，用PCR检测细胞是否含有病毒的特异片段，用免疫组化染色检测E6、E7蛋白的表达，用倒置显微镜、生长曲线、流式细胞仪、细胞角蛋白免疫组化染色、透射电镜及软琼脂克隆形成试验检测细胞的生物学特性。结果有3株细胞已连续培养传代超过20代，细胞含有HPV16DNA的特异片段并有E6、E7蛋白的表达，细胞呈锚着依赖性、接触抑制性单层平铺生长，生长曲线呈典型的“s”型，细胞增殖指数为48％，所有细胞均表达角蛋白，胞浆含张力原纤维，软琼脂培养克隆形成试验阴性。结论成功建立了HPV16DNA诱导的永生化人喉上皮细胞系，为喉癌研究提供了新的理想模型，HPV16对人喉上皮有致癌作用，在喉癌组织标本中检测到的HPV16DNA必定在其多步癌变过程中发挥了重要作用。     

研究生教育创新计划的实践与体会

介绍了实施研究生创新计划的目的、意义及其主要内容;简要回顾了实施该计划以来取得的阶段性成果;提出并讨论了实施创新计划中值得重视的有关问题.     

伴恶性高血压的原发性IgA肾病临床、病理及中医证候特征研究

背景 IgA肾病（IgAN）是全世界最常见的原发性肾小球疾病,同时也是引起肾实质恶性高血压（MHT）的主要原因之一。既往研究认为伴MHT的IgAN临床病情和肾脏病变程度均比无MHT的IgAN严重,但尚不清楚IgAN患者发生MHT的中医证候特点。 目的 分析原发性IgAN患者发生MHT的中西医相关因素,探索其中医证候特点。 方法 纳入2013年12月至2021年9月在中国人民解放军总医院第一医学中心经肾穿刺活检确诊的518例原发性IgAN患者为研究对象,应用PASS 15.0软件中的变量相关性检验进行样本量估算,最终纳入伴MHT的IgAN患者17例作为IgAN-MHT组,按照1∶5比例随机抽取同时期85例无MHT的IgAN患者作为IgAN组,比较两组临床、病理及中医证候的差异。采用Lasso回归对93个中医证候信息进行筛选降维,进一步采用多因素Logistic回归分析探讨伴MHT的IgAN的中医证候相关因素。 结果 IgAN-MHT组首发临床表现为头痛头晕或恶心呕吐比例,临床诊断为肾病综合征比例,入院时平均动脉压、最高收缩压、最高舒张压、血尿素氮、血肌酐、血无机磷、血镁、24 h尿蛋白定量水平、慢性肾脏病（CKD） 3~5期的比例、血瘀证比例,气虚证中神疲乏力、四肢倦怠、胫酸腿软、头目眩晕、头痛、恶心、呕吐症状的比例,阴虚证中视物模糊、飞蚊症症状的比例,血瘀证中爪甲青紫、舌色紫暗症状的比例,肾内动脉硬化比例高于IgAN组;而首发临床表现为尿检异常比例、高血压病史比例、临床诊断为慢性肾炎综合征的比例、血IgM、血IgG水平、估算肾小球滤过率（eGFR）水平低于IgAN组（P<0.05）。两组伴肾小管萎缩/间质纤维化病变（T病变）比例比较,差异有统计学意义（P<0.05）。IgAN-MHT组的常见中医证型为气阴两虚兼血瘀证。IgAN-MHT和血瘀证呈正相关（P<0.05）,IgAN-MHT患者男性比例、24 h尿蛋白定量水平和气虚证呈正相关（P<0.05）,无机磷、血钾和阴虚证呈负相关（P<0.05）,IgAN-MHT患者肾小管萎缩/间质纤维化和血瘀证呈正相关（P=0.040）。多因素Logistic回归分析结果显示,头痛〔OR=7.895,95%CI（1.643,37.935）,P=0.010〕、视物模糊〔OR=5.499,95%CI（1.207,25.053）,P=0.028〕、口干喜饮〔OR=10.079,95%CI（2.289,44.373）,P=0.002〕、爪甲青紫〔OR=18.312,95%CI（2.179,153.884）,P=0.007〕是伴MHT的原发性IgAN的影响因素。 结论 （1）伴MHT的原发性IgAN患者肾功能更差,肾脏病理损伤更重。（2）伴MHT的原发性IgAN的常见中医证型为气阴两虚兼血瘀证。（3）伴MHT的原发性IgAN患者临床、病理指标与中医气虚证、阴虚证和血瘀证具有一定相关性。（4）中医证候中头痛、视物模糊、口干喜饮、爪甲青紫是伴MHT的原发性IgAN相关因素。早发现、早诊断、早治疗,关注并改善患者的气虚、阴虚、血瘀相关症状,有可能减少IgAN患者伴MHT的发生。