诺如病毒衣壳蛋白重组人3型腺病毒的构建

目的 制备表达诺如病毒衣壳蛋白的重组人3型腺病毒.方法 将诺如病毒衣壳蛋白基因(Noro-orf2)克隆到腺病毒穿梭载体pBSE3CMV-egfp上,与线性化人3型腺病毒骨架质粒pBRAdv3共电转化感受态大肠杆菌BJ5183,使其在细菌内发生同源重组,带Noro-orf2基因的表达框置换腺病毒E3区,PCR及酶切筛选得到重组腺病毒质粒,将重组腺病毒质粒转染Hep-2细胞进行包装,获得感染性的重组腺病毒粒子,免疫组化分析重组腺病毒中诺如病毒衣壳蛋白的表达.结果 同源重组后经酶切和PCR鉴定证明插入Noro-orf2基因的重组腺病毒质粒pBRAdv3E3dNor成功构建,并经转染包装得到高滴度的重组腺病毒Adv3E3dNor,免疫组化证明诺如病毒衣壳蛋白得到表达.结论 成功构建表达诺如病毒衣壳蛋白的重组3型腺病毒Adv3E3dNor,为研制人3型腺病毒-诺如病毒双价疫苗奠定了基础.     

鼠巨细胞病毒抑制神经干细胞分化及分化基因表达的体外研究

目的 研究鼠巨细胞病毒(MCMV)感染对体外培养神经干细胞(NSCs)分化及分化基因表达的影响,探讨CMV先天感染致神经损伤的机制.方法 体外分离培养和鉴定BALB/c胎鼠NSCs并检测其分化潜能,用感染复数(MOI)为5、1和0.1的MCMV Smith毒株感染NSCs并进行分化培养,倒置显微镜下观察细胞形态学改变,流式细胞术检测分化细胞比率,免疫荧光法观察NSCs及其分化细胞标记物Nestin、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)表达的变化,采用MCMV早期抗原(EA)示踪感染过程(MOI=1),real-time RT-PCR检测分化早期NSCs Wnt信号途径关键分化基因Wnt-3和Wnt-Ta mRNA水平的动态变化.结果 体外培养的NSCs呈球样生长,神经干细胞特异性标记Nestin表达阳性,并可进一步诱导分化为NF-200阳性的神经元和GFAP阳性的星形胶质细胞;分化培养后,感染组NSCs不能贴壁分化生长并逐渐出现肿胀,细胞Nestin表达下调缓慢并显著高于正常对照组,而GFAP和NSE表达显著低于正常对照组(P<0.05),可检测到MCMV EA的阳性表达;分化培养3-9 d,感染组Nestin阳性细胞比率显著高于正常对照组,GFAP和NSE阳性细胞比率显著低于正常对照组(P<0.05);感染组Wnt-3 mRNA水平在分化培养后第1～2天显著低于正常对照组(P<0.05),感染组Wnto-7a mRNA水平在第0.5～2天明显低于正常对照组(P<0.05);感染组和正常对照组的差异随病毒MOI的增加而更加明显.结论 MCMV感染可明显抑制NSCs向神经元和星形胶质细胞方向分化,导致分化细胞比率减少;下调或干扰NSCs wnt信号途径分化基因wnt-3和Wnt-7a的表达;抑制NSCs分化及其分化基因表达的效应与MOI大小存在一定量效依赖关系;MCMV可能通过抑制NSCs分化基因的表达来抑制其分化,这可能是CMV先天感染致脑发育异常的重要机制之一.     

乙肝疫苗免疫预防效果影响因素的巢式病例对照研究

目的 研究影响乙肝免疫效果的因素,探讨提高乙肝免疫预防效果的方法 .方法 使用巢式病例对照研究方法 ,以2006年全国乙肝等疾病血清流行病调查河北现场的1734名1-15岁儿童作为研究对象,按其HBsAg是否阳性分为病例组和对照组,分析造成儿童HBsA9阳性的危险因素.结果 母亲HBsAg阳性和儿童年龄、出生医院是影响乙肝疫苗预防效果的主要因素(P<0.0001).结论 当前乙肝免疫预防的工作重点在于发现HBsAg阳性孕妇,同时改进农村地区的新生儿乙肝免疫预防条件.     

不同剂量羊瘙痒因子263K颅内感染仓鼠临床终末期脑中GFAP表达的研究

目的 研究不同剂量羊瘙痒因子263 K经颅内注射感染仓鼠后,在发病的终末期星形胶质细胞增生程度是否与注射剂量及潜伏期长短有关.方法 以胶质纤维酸性蛋白(glial fibrill aryacidic protein,GFAP)作为星形胶质细胞增生的分子标志物,采用Western Blot和免疫组化方法检测感染仓鼠终末期脑匀浆和脑组织病理切片中的GFAP表达,经定量分析比较各感染剂量组间是否存在差异.结果与正常对照相比,不同剂量感染仓鼠发病终末期脑组织GFAP阳性细胞数量和总GFAP含量均明显升高,但各感染剂量组间无显著差异.结论 不同感染剂量羊瘙痒因子263K经颅内注射感染仓鼠在发病终末期脑中星形胶质细胞的增生程度相似,与感染剂量及潜伏期无关联性.     

神经管缺陷产前筛查的AFP中位数倍数校正值的建立

目的 探讨和构建北京人群神经管缺陷(neural tube defect,NTD)产前筛查的血清标志物甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)浓度中位数倍数(multiple of the median,MOM)的校正模型.方法 选取5668例孕中期孕妇,通过分析其AFP浓度与孕周和体重之间的相关性,分别进行回归...     

杭州市青少年自杀问题现况调查

目的:了解青少年自杀问题的现况与相关因素。方法:采用分层整群随机抽样的方法,抽取7335例在校学生,包括初中生2695名、高中生3937名、大学生703名。采用2004年中国疾病预防控制中心编制的《中国青少年健康相关行为调查问卷》,对人口学资料、最近12个月内的自杀问题及相关因素进行调查。结果:本研究样本的自杀意念的检出率为14.3%,自杀计划的检出率为6.9%,自杀行为的检出率为2.1%,多次自杀行为的检出率为1.0%。自杀问题的相关因素分析发现:年级越低(OR=0.92)、求助行为越少(OR=0.62)、母亲受教育程度越高(OR=1.15)、孤独感越多(OR=1.41)、自我伤害行为越多(OR=1.40),自杀意念的检出率越高(均P0.05);求助行为越少(OR=0.67)、孤独感越多(OR=1.21)、自我伤害行为越多(OR=1.49),自杀计划的检出率越高(均P0.05);不安全感(OR=1.16)、失眠(OR=1.33)、抑郁情绪(OR=2.30)、自我伤害行为(OR=2.45)越多,自杀行为的检出率越高(均P0.05);年级越高(OR=1.28),抑郁情绪(OR=3.78)、自我伤害行为越多(OR=2.53),多次自杀行为的检出率越高(均P0.05)。结论:本研究显示杭州市青少年自杀问题的检出率较高,青少年自杀问题可能与孤独、不安全感、抑郁等负面情绪以及来自学校和家庭的压力和缺少社会支持等有关。     

支气管哮喘与急性呼吸道感染患儿血浆β防御素3水平的对照研究

目的β防御素3(HBD3)除了具有天然免疫功能,还发挥调节后天适应性免疫的作用。本研究拟通过支气管哮喘患儿、急性上呼吸道感染患儿及正常儿血浆HBD3浓度的比较,探讨HBD3在哮喘发病中的作用。方法研究对象选择2009年4月到12月在哈尔滨医科大学附属第一医院儿科就诊病例共81例,其中哮喘组21例,为急性发作期支气管哮喘患儿,感染组29例,为急性上呼吸道感染患儿,正常对照组31例,为健康体检儿。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法进行血浆HBD3水平测定。同时测定血嗜酸性粒细胞总数和白细胞数,9例哮喘儿测定了血清IgE浓度。结果血浆HBD3浓度正常儿为(8.028±1.078)μg/ml,哮喘患儿(12.212±1.124)μg/ml感染患儿(8.976±1.110)μg/ml,哮喘患儿与急性呼吸道感染及正常儿3组总体比较,血浆HBD3浓度明显升高,差异有显著性(F=4.448,P<0.05);哮喘组与正常组比较,差异显著,P<0.01;哮喘组与感染组比较,差异有显著性P<0.05;感染组与正常组比较,差异无显著性P>0.05;同时发现血浆HBD3水平与血清总IgE,血嗜酸性粒细胞及白细胞水平无显著相关性。结论支气管哮喘发作时HBD3表达升高,HBD3可能是超越感染之外,参与哮喘发病的独立因素。HBD3是否始动因素尚待进一步探索。     

慢性外侧踝关节不稳手术重建的研究进展

目的:总结各种慢性外侧踝关节不稳手术重建方案的研究进展.方法:查阅近年关于慢性外侧踝关节不稳手术重建方案的文献,进行综合分析.结果:根据手术适应证的不同,慢性外侧踝关节不稳手术重建方案可分为解剖型重建和非解剖型重建两种,并衍生出多种重建方案,手术重建方案选择需要综合各种因素考虑.结论:根据患者的临床症状以及损伤程度,系统评所选择手术的效能,以实施最佳手术治疗方案达到最佳效果.     

乳腺癌中S100A7与AKT的表达及意义

目的探讨乳腺癌中S100A7和AKT在乳腺癌中的表达及其相关性。方法采用免疫组化PV非生物素两步法检测226例乳腺癌中S100A7与AKT的表达及与ER、PR、Her-2表达的关系。结果 S100A7蛋白在乳腺导管原位癌中阳性率增高(52.50%),AKT在乳腺浸润性导管癌中阳性率高(50.00%);S100A7和AKT在伴淋巴结转移的病例中阳性率高(P=0.0062,P=0.044 8);且Ⅲ期乳腺癌阳性率高于Ⅰ和Ⅱ期(P=0.025 8,P=0.040 3)。AKT表达和肿瘤大小相关,差异有显著性(P=0.031 0);S100A7和AKT蛋白在乳腺癌中的表达与ER、PR呈负相关,与Her-2呈正相关,两者之间呈正相关。结论探讨S100A7与AKT蛋白在乳腺癌中的表达具有重要意义,两者有可能成为乳腺癌治疗的新的靶点。     

EV71结构蛋白VP1的原核表达及VP1单克隆抗体的制备

目的:原核表达EV71结构蛋白VP1并制备其单克隆抗体。方法:以肠道病毒71型(EV71)P1基因为模板,设计引物扩增出目的片段VP1,将其连接至大肠杆菌表达载体pET-32a(+)上,转化大肠杆菌TG1,筛选出阳性克隆后进行测序。将重组表达载体pET-32a(+)-VP1转化大肠杆菌表达菌株BLgold(DE3),对该工程菌进行诱导表达,SDS-PAGE电泳分析,表达产物以包涵体的形式存在。包涵体用6 mol/L盐酸胍溶解,经过Ni-NTA亲和层析法纯化,获得了纯度较高的目的蛋白。用纯化的VP1蛋白免疫小鼠,制备单克隆抗体(mAb)。结果:获得了24株mAb,其中1株EV71 Westernblot法鉴定呈阳性,5株EV71间接免疫荧光法(IFA)鉴定阳性。结论:成功地制备了VP1的mAb。