应用siRNA敲低TPM3基因表达后对大鼠胰腺癌细胞侵袭转移能力的影响

目的：探究原肌球蛋白3（tropomyosin alpha-3 chain,TPM3）在大鼠胰腺癌细胞中对其侵袭转移能力的影响并初步阐述其可能的分子机制。方法：（1）将70只大鼠随机分为手术组40只[将7,12-二甲基苯并蒽（7,12-dimethyl-1,2-benzanthracene,DMBA]植入大鼠胰腺被膜下后荷包缝合被膜）,假手术组15只（只对胰腺进行荷包缝合而后关腹,不置入DMBA）,阴性对照组15只（不做任何处理）,建立大鼠胰腺癌模型。（2）通过组织免疫组化染色的方法对差异蛋白TPM3进行验证。（3）通过机械分离和酶阶段消化法分离胰腺癌组织的方法获取大鼠胰腺癌细胞,体外传代培养获得纯度较高的细胞后,应用siRNA敲低大鼠胰腺癌细胞中TPM3基因的表达;通过RT-PCR技术检测其沉默效果。（4）通过Transwell实验和平板克隆实验分别对细胞的侵袭、迁移能力及生长增殖能力进行观察。结果：（1）经病理验证模型组有37.83%（14/37）形成胰腺癌,证明大鼠胰腺癌模型建立成功。（2）免疫组化验证胰腺癌组织中TPM3阳性率（92.8%）明显高于正常胰腺组织（6.7%）。（3）RT-PCR结果显示,转染TPM3-siRNA的细胞中TPM3的表达量（0.31±0.02）明显低于其余各组,脂质体组（0.45±0.02）,阴性对照组（0.45±0.02）,空白对照组（0.43±0.02）（P＜0.05）,其余各组之间TPM3表达量差异无统计学意义（P ＞0.05）。（4）转染TPM3-siRNA的细胞其侵袭[（161.63±4.94）个]、迁移能力[（206.87±4.21）个]及生长增殖能力[（51.5±2.327）个]较对照组明显降低[分别为（39.7±1.40）个,（67.27±1.76）个,（5.900±0.767）个]（P＜0.05）。结论：体外化学合成的TPM3-siRNA可有效的抑制大鼠胰腺细胞TPM3的表达,TPM3表达降低后其侵袭能力、迁移能力及生长增殖能力下降。     

人肝再生增强因子真核表达及其对顺铂诱导肝癌细胞凋亡的影响

目的：构建人肝再生增强因子（human augmenter of liver regeneration,hALR）15kD亚型的真核表达系统,并探索ALR对顺铂（Cisplatin,DDP）诱导的人肝癌细胞株QGY凋亡的影响。方法：用聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）方法和基因重组技术,从重组质粒pPIC9K-rhALR中扩增出编码rhALR基因片段,将其克隆入pPICZαA质粒中构建重组质粒pPICZα－A-rhALR。重组质粒SacⅠ酶切线性化后电转入酵母GS115中,并在1%的甲醇诱导下表达。表达上清蛋白经Western blot（ALR多克隆抗体和His-tag标签抗体）鉴定和镍柱亲和层析纯化。MTS试剂检测rhALR体外对人肝癌细胞（HepG2、QGY）的促增殖活性,及流式细胞仪检测rhALR在顺铂诱导QGY细胞凋亡中的抗凋亡作用。结果：PCR、双酶切、DNA测序均鉴定重组质粒构建与预期一致。分泌表达的rhALR约占上清总蛋白的70%,目的分子量约17 kD,Western blot均可见单一条带。纯化后的rhALR对HepG2和QGY的体外促增殖作用呈浓度依赖性增强（HepG2组：F=246.729,P=0.000;QGY组：F=246.004,P=0.000）,且在QGY细胞顺铂诱导凋亡时也发挥着浓度梯度式抗凋亡作用（F=101.061,P=0.000）。结论：成功构建高效分泌表达rhALR的pPICZα－A-rhALR GS115真核表达系统;体外实验证实rhALR对顺铂诱导人肝癌细胞有呈浓度依赖性的抗凋亡作用。     

结合CARC、CARE病例报告标准探究“和法”治疗乳腺癌

乳腺癌是世界范围内女性发病率第一的恶性肿瘤。中医药特有的辨证论治体系及整体治疗方式在乳腺癌的治疗中起到至关重要的作用。从古至今中医医案一直是中医理论基础及经验传承的重要载体，但其病例报告格式的不规范影响了中医药的继承和规范化。本文中我们试图采纳规范的CARC和CARE中医病例报告形式报告1例“和法”论治乳腺癌的有效病例，以为乳腺癌临床治疗和中医病案报告提供新的思路。     

清开灵注射液的临床应用

清开灵注射是由牛黄、水牛角、栀子、金银花等清热解毒、化痰通络、醒神开窍的中药组成,具有抗菌、抗病毒、解热镇痛、解痉利胆、促进肝细胞修复、改善脑微循环及脑细胞功能等作用。现代药理研究认为,主药牛黄有解热、抗惊厥、抗过敏、抗炎作用,还可以与多种有机物结合形成稳定化合物而起解毒作用。该药剂有使用方便、药效稳定且无副作用等优点,被国家中医药管理局定为中医院急诊科首批中成药之一。随着临床研究的深入,清开灵注射液的应用范围不断扩展,本文仅就近年来在临床中的应用综述如下：     

自拟骨伤复元汤对胸腰椎骨折术后早期白介素-2、纤维蛋白原表达及疼痛的影响

目的：观察自拟骨伤复元汤对胸腰椎骨折术后早期白介素-2、纤维蛋白原表达及患者疼痛的影响。方法：将符合要求的80例胸腰椎骨折患者随机分为2组。对照组40例,术后给予补充血容量、抗感染等常规治疗;观察组40例,术后给予常规治疗联合口服自拟骨伤复原汤治疗。分别于术后第1天、第7天及第14天,比较2组患者血浆中白介素-2、纤维蛋白原含量的变化情况及疼痛视觉模拟评分变化情况。结果：1血浆白介素-2含量。不同时间点间血浆白介素-2的差异有统计学意义（F=98.792,P=0.000）。2组血浆白介素-2的组间差异总体上有统计学意义（F=18.916,P=0.000）。进一步比较显示,术后第1天2组患者血浆白介素-2含量的差异无统计学意义[（6.20±1.03）ng·L-1,（6.50±0.85）ng·L-1,t=-0.714,P=0.475];术后第7天、第14天2组患者血浆白介素-2含量比较,组间差异有统计学意义[（8.30±0.95）ng·L-1,（9.70±0.67）ng·L-1,t=-2.950,P=0.030;（10.20±1.32）ng·L-1,（11.90±1.29）ng·L-1,t=-2.431,P=0.015];时间因素与分组因素存在交互效应（F=12.417,P=0.011）。2血浆纤维蛋白原含量。不同时间点间血浆纤维蛋白原含量的差异有统计学意义（F=118.439,P=0.000）。2组患者血浆纤维蛋白原含量的组间差异总体上有统计学意义（F=0.896,P=0.049）。进一步比较显示,术后第1天2组血浆纤维蛋白原含量比较,差异无统计学意义[（3.29±0.31）mg·dL-1,（3.34±0.23）mg·dL-1,t=0.277,P=0.741）];术后第7天、术后第14天,2组血浆纤维蛋白原含量比较,组间差异有统计学意义[（2.98±0.16）mg·dL-1,（2.39±0.18）mg·dL-1,t=1.487,P=0.042;（2.77±0.13）mg·dL-1,（2.11±0.12）mg·dL-1,t=8.952,P=0.039];时间因素与分组因素存在交互效应（F=22.248,P=0.000）。3术后疼痛视觉模拟评分。不同时间点间术后疼痛视觉模拟评分的差异有统计学意义（F=264.972,P=0.000）。2组术后疼痛视觉模?     

透皮吸收实验对九分喷雾剂处方的筛选

目的 筛选九分喷雾剂处方。方法 以稳定性和喷雾效果为指标，从19种处方中筛选出4种处方，然后以透皮速率为指标筛选。结果 处方17的稳定性和喷雾效果好，透皮速率最高。结论 九分喷雾剂的处方为：20%样品乙醇液 3%冰片 5%甘油。     

黄芪水提物和知母甙元ZMS对28～30月龄大鼠外周血淋巴细胞受体的调节作用

以１２５Ⅰ－心得静为放射配基，测定完整淋巴细胞β受体。多点法可得到典型单位点饱和曲线。在饱和区选定配基浓建立单位法，测定ＳＤ大鼠外周血淋巴细胞β受体的密度。结果２８～３０月龄鼠明显低于５～６月龄成年鼠。长期口服补气药黄芪有明显上调作用，而长期口服知母甙元ＺＭＳ无类似作用。以上结果与老龄时脑β受体降低及黄芪有上调作用而知母生地无上调作用基本吻合。     

胆盐/磷脂混合胶束对疏水性天然药物增溶性能的研究

目的:研究胆盐/磷脂混合胶束(BS/PC-MM)体系对疏水性天然药物的增溶能力及影响因素。方法:选择不同纯度的大豆磷脂(SPC)、蛋黄磷脂(EPC)与高纯度的胆酸盐制备胆盐/磷脂混合胶束(BS/PC-MM)。以透光率方法测定胆酸盐对磷脂的溶解能力,以20(S)人参皂苷Rg3、Rh2、黄芪甲苷、20(S)原人参二醇、原人参三醇和呋喃二烯为疏水性模型药物,考察了SDC/SPC-MM对药物的增溶特性。结果:高纯度的大豆磷脂和蛋黄磷脂适合制备成澄明的BS/PC-MM溶液。胆酸盐对磷脂的增溶能力为,脱氧胆酸钠>胆酸钠,胆酸盐对蛋黄磷脂的溶解度增加略高于大豆磷脂。20(S)原人参二醇、原人参三醇和呋喃二烯与SPC的亲和性较高。而20(S)人参皂苷Rh2、Rg3和黄芪甲苷与SDC的亲和性强,SDC/SPC-MM的脂质总质量增加,疏水性药物的溶解度提高。结论:胆盐/磷脂混合胶束(BS/PC-MM)对疏水性药物具有较好的溶解度,增溶能力受药物的理化性质和混合胶束的组成影响,可成为疏水性药物的非肠道给药新型载体。     

三七开花习性观察

本文报道了在云南省文山州气候条件下三七的开花、散粉规律，可为三七的杂交育种工作提供依据。     

从桃仁的毒性看有毒中药的临床应用

本文从桃仁的毒性记载和报道、毒性成分和机理、减毒方法三个方面对桃仁的毒性做综述,并结合临床经验,得出应用有毒中药的相关注意事项,以期为此类中药的临床应用做出提示。