人resistin基因原核表达载体构建和表达

[目的]构建人resistin基因原核表达载体并观察其表达,为开展对resistin的研究打下实验基础.[方法]酚氯仿一步法从一位2型糖尿病合并胆管癌患者腹壁皮下脂肪组织抽取总RNA,RT-PCR法扩增出re-sistin基因cDNA,经测序后,PCR产物亚克隆入T载体,用EcoRI和KpnI分别酶切重组T质粒和原核表达载体pGENKS,然后resistin基因片段和表达载体通过T4DNA连接酶进行定向连接,用核酸内切酶EcoRI、KpnI酶切和测序方法鉴定出重组表达质粒.重组表达质粒转化大肠杆菌JM109,经1 mmol/LIPTG在32℃诱导表达2 h,裂解细菌,进行PAGE凝胶电泳鉴定融合蛋白的表达.[结果]RT-PCR扩增产物分子大小为327 bp,序列分析表明为人resistin基因完整编码区.PCR产物与T载体连接、转化大肠杆菌后,从细菌质粒中酶切回收了目的片段.重组表达质粒经EcoRI和KpnI双酶切后能产生出327 bp、4 980 bp大小的两个片段,序列分析表明重组表达质粒包含人resistin基因完整编码区,基因编码无移位,PAGE凝胶电泳表明在细菌裂解上清有分子质量为39.5 kD的融合蛋白.[结论]成功构建了人resistin基因原核表达载体,且构建的载体能表达出含目的蛋白的融合蛋白,为下一步研究打下了实验基础.     

Deleterious effects of oxygen during extracorporeal circulation for the microcirculation in vivo.

OBJECTIVE: Clinical complications arising from extracorporeal circulation (ECC) have been linked to disturbances in the microcirculation. Hyperoxia, a mainstay of supportive treatment, is clinically used for a variety of pathological states. In previous in vivo animal experiments we found increased leukocyte/endothelial (L/E) cell interaction following ECC due to oxygen derived free radicals. This study was carried out to investigate the link between arterial pO2 during ECC and the potential damage to the microcirculation, supposedly caused by oxygen derived radicals. METHODS: Intravital fluorescence microscopy was used on the dorsal skinfold chamber preparation in syrian golden hamsters. ECC was introduced via a micro-rollerpump (0.7 ml/min) and a 60 cm silicon tube (1 mm inner diameter) shunted between the carotid artery and the jugular vein after application of 300 IE Heparin/kg/bw. Experiments were performed in chronically instrumented, awake animals (age: 10-14 weeks, weight: 65-75 g). Control inspired room air, experimental group 1 inspired 100% oxygen, group 2 received 100% oxygen and 2000 IE of Heparin i.v. (n=7/group), that releases endothelial bound superoxide dismutase, a natural scavenger of oxygen derived free radicals in the hamster. Results: Normobaric inhalation of 100% oxygen increased arterial pO2 from 64+/-8.1 mmHg to 512+/-124 mmHg (P<0.05 vs. baseline). ECC under 100% oxygen reduced functional capillary density (FCD) to 70% of baseline values 8 h after ECC (P<0.05). Adherent leukocytes in postcapillary venules and arterioles increased significantly (P<0.05). 2000 IE Heparin prevented the reduction in FCD and decreased the number of adherent leukocytes. CONCLUSIONS: Reduction in FCD, increased leukocyte adherence to the microvascular endothelium of postcapillary venules and arterioles under hyperoxia compared to ECC under room air conditions, demonstrates harmful effects of oxygen during ECC in vivo. A high dose of Heparin enhances functional capillary density, thus attenuating the microvascular dysfunction/damage in the period after ECC.     

阴道毛滴虫Rab11鸟苷三磷酸酶eDNA克隆和序列分析

目的 近年研究表明Rab11鸟苷三磷酸酶在调节各种真核细胞的膜转运通道中发挥着重要作用。但是，对于原生动物毛滴虫膜转运系统的研究仍甚少。本研究旨在克隆和分析阴道毛滴虫Rabll鸟苷三磷酸酶基因，以便进一步探讨其功能。方法 使用SMART cDNA文库构建试剂盒构建阴道毛滴虫cDNA表达文库，用生物信息学进行TvRab11同源分析，鉴定TvRab11基因，用PCR方法扩增基因组DNA，TA克隆TvRab11 cDNA、测序及序列分析。结果 在分离出的cDNA克隆中发现一个Rab11鸟苷三磷酸酶同源基因。该cDNA序列长710bp，读码框含636bp，推测蛋白质序列具211个氨基酸。序列分析表明该基因系Rab11亚家族的同源基因，其推测肽链与拟南芥Rab11c的同源性晟高（一致性60％，相似性79％），与人类Rab11b次之（一致性58％，相似性78％）。该氨基酸序列拥有Rab鸟苷三磷酸酶家族的所有保守结构域和特异性Rab结构域（RabF1-5）。进化树分析也表明该基因系Rab11的同源基因。序列分析还显示该基因的基因组DNA序列与cDNA序列完全一致．提示该基因无内含子。结论分析表明该基因是阴道毛滴虫Rab11鸟苷三磷酸酶同源基因，其功能有待进一步研究。     

前路一期病变椎体切除并重建治疗胸腰椎结核并后凸畸形

目的:观察前路一期病变椎体切除、人工椎体或钛网融合器植骨替代、椎体钉板或钉棒系统内固定治疗连续两个及以上节段胸腰椎结核并后凸畸形的疗效。方法:34例病变累及连续两个及两个以上椎节的胸腰椎结核患者,术前后凸Cobb角27.8°￣65.4°(38.6°±10.3°),一期行前路病变椎体切除,椎间撬拔撑开复位,人工椎体或钛网融合器植骨替代,辅以椎体钉板或钉棒系统短节段邻近椎节内固定,重建脊柱稳定性,术后均给予短疗程化疗。观察术后局部疼痛缓解、脊髓神经功能恢复、后凸畸形矫正及脊柱稳定性情况。结果:患者术后局部疼痛缓解,术前伴有脊髓神经损伤的12例患者术后神经功能均有不同程度恢复。影像学检查示脊柱内固定物位置良好,椎体序列恢复良好,椎间高度恢复。后凸Cobb角矫正至2.1°￣14.2°(7.5°±8.3°),平均矫正31.2°±8.5°。随访18￣54个月,平均35个月。末次随访时后凸矫正度丢失4.3°±3.8°,均无结核复发。结论:连续两个及两个以上节段的胸腰椎结核采用前路一期行病变椎体切除有利于病灶彻底清除,减少复发;也有利于椎管彻底减压。前路椎体替代、植骨内固定重建脊柱稳定性可更好地纠正和预防脊柱后凸畸形。     

基于形状因子分析的重叠细胞自动判别技术研究

重叠细胞的判别在细胞计数和参数测量中有非常重要的意义.本文根据重叠细胞的形态特征,提出根据形状因子来判断细胞是否重叠.首先研究了形状因子的计算方法,对重叠细胞形状因子的阈值P0进行了探讨和实验,得出P0=0.5:当PE≤P0,认为目标存在细胞重叠;PE＞P0,认为目标不存在细胞重叠.实验结果证明本技术能检测出不同形状的重叠细胞,准确率为95%.     

微嵌合体表达与移植肾免疫耐受的实验研究

目的探讨肾移植术后受者微嵌合体表达与免疫耐受的相关性。方法采集接受男性供体肾脏移植术后女性受者不同生存期外周血及尿沉渣标本,采用Y染色体三对引物SRY1、DYZ11st和DYZ12nd,应用PCR和RT-PCR方法检测标本中微嵌合体特异性代表Y染色体DNA和mRNA的表达,同时测定移植肾功能。结果在130例供者为男性的女性肾移植受者检测到嵌合阳性者98例,占75.39%(n=130),嵌合阴性者32例,占24.61%。嵌合阳性与阴性两组比较,移植肾平均存活时间分别为(8.7±3.5)年和(5.4±3.3)年,P<0.05;嵌合阳性者发生过排斥反应的有11例,占11.22%,而嵌合阴性者为9例,占28.13%,P<0.05;血清肌酐在嵌合阳性者(74.3±32.5)mol/L,而嵌合阴性者为(113.6±37.8)mol/L,P<0.05。结论受者体内嵌合阳性与阴性者相比具有更好的移植肾功能和低排斥率,肾移植术后受者生存期愈长嵌合阳性率愈高,提示肾移植术后受者体内的嵌合状态与免疫耐受具有相关性。     

血管内覆膜支架置入治疗降主动脉夹层动脉瘤

目的 :介绍血管内覆膜支架置入治疗降主动脉夹层动脉瘤的初步经验。材料与方法 :本组 6例 Debakey 型的慢性降主动脉夹层动脉瘤患者行血管内覆膜支架置入治疗。经股动脉将 Talent覆膜支架置于夹层动脉瘤裂口处 ,支架张开使覆膜支架固定于裂口附近的主动脉壁上将裂口封闭并阻断血流。结果 :6例病人均获得成功 ,手术和临床成功率 10 0 %。 1例患者术中出现内漏 ,置入第二枚支架后漏口封闭。平均随访 7个月 ,所有患者内膜裂口全部完全封闭 ,假腔内血栓形成无内漏 ,假腔均明显缩小。结论 :血管内覆膜支架置入治疗主动脉夹层动脉瘤具有安全可靠 ,患者术后恢复快的优点     

集体心理干预在烧伤患者中的应用

目的 探讨在烧伤患者中实施心理干预的基本方法．了解不同心理干预方式对烧伤患者心理状态的影响。方法 将120例烧伤患者随机分为对照组（59例）和干预组（61例），对照组患者按常规进行治疗和护理，干预组在此基础上实施集体心理干预，由医务人员、患者度其家属一起座谈探讨烧伤有关问题，针对患者的心理问题度时给予干预。采用Zung焦虑量表（SAS）和抑郁量表（SDS）对患者入院后第1天、第7天、第14天的心理状态进行评定。结果 两组患者入院第1天SAS、SDS评分差异无显著性意义（均P〉0．05）；入院第7天、第14天两组SAS、SDS评分比较，差异有显著性意义（均P〈0．01）。结论 对烧伤患者实施集体心理干预可以改善其焦虑、抑郁情绪。     

常温与低温体外循环心脏直视手术对细胞因子及补体的影响

目的探讨常温及低温体外循环心脏直视手术对细胞因子及补体的影响。方法选择先天性和风湿性心脏病患者40例,随机分为常温组及低温组各20例,分别于术晨、体外循环结束时及术后1、4、7、14 d抽取患者静脉血标本,测定血浆TNF、IL-2、C3、C4值。结果两组术前各项检查指标无显著差异。(1)两组术后1~4 d的IL-2水平较术前显著下降,至术后7 d恢复正常。体外循环结束至术后4 d,低温组IL-2显著低于常温组。(2)体外循环结束时以及术后1、4、7 d,常温组TNF水平显著低于低温组。两组体外循环结束时及术后1、4 d均高于术前,常温组至术后7 d、低温组术后14 d恢复正常。(3)体外循环结束时及术后1、7 d,常温组C3水平高于低温组,术后4 d两组无差别;常温组及低温组于体外循环结束时、术后1、4 d均低于术前,至术后7 d常温组恢复正常,低温组至术后14 d恢复至术前水平。(4)两组体外循环结束时及术后1、4 d C4水平均低于术前。体外循环结束时、术后1 d,常温组C4水平高于低温组。结论常温体外循环心脏直视手术对细胞因子及补体的影响显著轻于低温组,因而对术后机体的恢复优于低温方法。     

颈前路带锁钛板在脊髓型颈椎病手术中的应用

目的评价脊髓型颈椎病前路减压后应用带锁钛板内固定的价值。方法对51例脊髓型颈椎病患者采用前路减压、取自体髂骨植骨和颈椎带锁钛板内固定治疗。结果随访43例,平均随访时间2a,术后3个月植骨块获得骨性融合,颈椎椎间高度和生理曲度维持满意,感觉、肌力明显恢复,钛板及螺钉无松动及断裂现象。结论脊髓型颈椎病前路减压术后应用带锁钛板内固定能促使植骨块融合,有效地维持椎间高度和颈椎生理曲度,有较高的应用价值。