核磁共振氢谱法(~1H-NMR)测定西他沙星标准物质的含量

目的建立核磁共振氢谱法测定西他沙星标准物质的绝对含量。方法采用Bruker AVANCE-500型和AVANCE-300型仪器,分别以盐酸吉西他滨和齐多夫定为内标,西他沙星中质子信号在δ8.69,δ7.76,δ3.43和δ3.14,盐酸吉西他滨质子信号在δ8.12,δ6.21和δ6.02,齐多夫定中质子信号在δ7.61和δ6.01作为定量峰,0.5 mL DMSO-d6∶氚代盐酸(DCl,44.8mg·L-1)=4∶1为溶剂,测定条件为:探头温度303K,谱宽11.0,中心频率4.9,脉冲序列为zg 30°,延迟时间20s,采样次数32次,窗函数0.3Hz。结果在此条件下,样品与内标盐酸吉西他滨及齐多夫定的定量峰分离良好,进样精密度及重复性较好,线性范围宽,样品与内标盐酸吉西他滨和齐多夫定质量比分别在0.354 9~1.343 9和0.312 4~1.189 2范围内,其线性拟合方程分别为:Y=1.440 9X+0.017 8(r=1.000 0,n=5),Y=1.634 6X+0.008 5(r=0.999 9,n=5)。结果西他沙星的含量分别为99.26%(RSD为0.06%)和99.22%(RSD为0.17%)。结论该方法准确、专属、简便、快速,适用于该药物标准物质的绝对含量测定。     

3种人血清白蛋白降解多肽片段的血液相容性研究

目的 研究3种人血清白蛋白降解多肽片段(PF1-123、PF124-298、PF299-585)的血液相容性.方法 分别考察3种多肽片段对新鲜人血的溶血率、对血细胞形态的影响、全血凝固时间以及血浆复钙时间,测试其血液相容性.结果 PF1-123、PF124-298和PF299-585对新鲜人血的溶血率分别为0.52％±0.47％、0.39％±0.33％、0.32％±0.23％,对血细胞形态均无不良影响,说明3种多肽片段均符合医用材料的溶血率要求;3种多肽片段的全血凝固时间曲线以及血浆复钙时间曲线与人血清白蛋白相似,说明其与血液接触后不会激活相关因子而促成凝血.结论 PF1-123、PF124-298和PF299-585具有良好的血液相容性.     

右美托咪定与丙泊酚用于子痫前期产妇剖宫产手术术中镇静的比较

目的 比较右美托咪定与丙泊酚用于子痫前期患者剖宫产手术术中镇静的有效性和安全性。方法 腰硬联合麻醉下行择期剖宫产手术的子痫前期患者90例,随机均分为右美托咪定组、丙泊酚组及对照组,各组按预定方法分别给予药物。记录患者入室时(T₀)、CSEA给药前(T₁)、切皮时(T₂)、清理腹腔时(T₃)及手术结束时(T₄)的平均动脉压(mean arterial pressure,MAP)、心率(heart rate,HR)、脉搏血氧饱和度(oxygen saturation,SpO₂)、警觉-镇静(observer’s assessment of alertness/sedation,OAA/S)评分,记录新生儿Apgar评分及各组不良反应发生情况。结果 MAP、HR及OAA/S T_1-4右美托咪定组及丙泊酚组均低于对照组,MAP T_1-4,HR T₁、T₃及T₄及OAA/S T₄右美托咪定组低于丙泊酚组(P<0.05)。新生儿Apgar 评分,3组组间比较差异无统计学意义。恶心呕吐、牵拉痛及寒战发生率右美托咪定组及丙泊酚组均低于对照组(P<0.05);低血压及心动过缓发生率右美托咪定组及丙泊酚组略高于对照组,呼吸抑制及躁动发生率右美托咪定组低于丙泊酚组,但差异均无统计学意义。结论 右美托咪定和丙泊酚均可安全有效地应用于子痫前期患者剖宫产术中镇静,比较而言,右美托咪定镇静后可唤醒,血流动力学更平稳,呼吸抑制等不良反应更少。     

盐酸普拉克索B晶型的制备和表征

目的 制备盐酸普拉克索的B晶型并优化制备工艺,同时进行结构表征和稳定性研究。方法 制备盐酸普拉克索的B晶型,采用热重法(TGA)、差示扫描量热法(DSC)、X射线粉末衍射(PXRD)、X射线单晶衍射(SXRD)等分析手段,对盐酸普拉克索B晶型进行表征研究。结果 制备得到了盐酸普拉克索B晶型,其晶型属正交晶系,空间群P2₁2₁2₁,结构中不含溶剂(包括水)。盐酸普拉克索B晶型热处理后晶型不发生转变。结论 盐酸普拉克索B晶型为无水晶型,热稳定性优于一水合物晶型,具有高温稳定性。     

骨髓单个核细胞移植对大鼠脊髓全横断损伤后髓鞘碱性蛋白表达影响

目的:探讨同种异体骨髓单个核细胞(BMMNCs)移植对脊髓全横断损伤区局部微环境中髓鞘碱性蛋白表达的影响。方法:取8周龄Wistar大鼠45只,雌雄不限、每只体重200~220g,随机分为3组:实验组(n=15)、对照组(n=15)、假手术组(n=15)。对实验组和对照组大鼠建立脊髓全横断损伤动物模型。实验组造模后对脊髓横断处上下两端立即注入骨髓单个核细胞;对照组对脊髓横断处上下两端注入磷酸盐缓冲液(PBS);假手术组不损伤脊髓,仅剪除T8~10棘突和椎板后逐层缝合。于细胞移植后的1d,5d,1w,2w,4w和6w分别行BBB大鼠后肢功能评估来判断脊髓神经功能恢复情况,并采用免疫组织化学检测观察大鼠脊髓髓鞘碱性蛋白的表达。结果:(1)BBB评分结果显示各时间点假手术组均为正常范围,实验组和对照组分值随时间均逐渐增加,且实验组较对照组高(P<0.05),但均未达到正常组水平,术后4周实验组BBB评分较对照组增加显著,差异有统计学意义(P<0.05);(2)免疫组织染色结果显示各时间点实验组和对照组大鼠脊髓中髓鞘碱性蛋白的表达量高于假手术组,且实验组高于对照组(P<0.05)。结论:同种异体的骨髓单个核细胞移植可能改变了局部的微环境并上调了脊髓内髓鞘碱性蛋白的表达。     

睡眠宝胶囊中非法掺入化学药品的检测方法研究

目的 建立薄层色谱结合超高压液相色谱-质谱联用法快速筛查及鉴定睡眠宝胶囊中非法掺加的氯氮平、地西泮、艾司唑仑。方法 采用硅胶GF254板,乙酸乙酯-无水乙醇-氨水(50∶2∶0.5)为展开剂,在254 nm下检视。色谱条件为：Aglient ZORBAX SB C₁₈柱(100 mm×2.1 mm,1.8 μm),流动相20 mmol·L^-1醋酸铵溶液-甲醇(50∶50),流速0.3 mL·min^-1,检测波长225 nm,柱温35 ℃,正离子扫描检测。结果 睡眠宝胶囊非法掺入氯氮平、地西泮、艾司唑仑在254 nm下显明显的斑点,通过UPLC-PDA-Q TOF MS可进一步快速确证。结论 本方法操作简便,结果可靠,可用于快速筛查及确证睡眠宝胶囊中非法掺入氯氮平、地西泮及艾司唑仑。     

柚皮苷对高糖诱导的血管内皮细胞损伤及PI3K/AKT/eNOS信号通路的影响

目的:研究柚皮苷(naringin,Nar)对高糖(high glucose,HG)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤的作用及对PI3K/AKT/e NOS信号通路的影响。方法:利用HG(33 mmol/L glucose)培养基孵育HUVECs不同时间(6、12、24、48、72 h)后,用胰岛素(5 m IU/L)刺激细胞15 min,建立内皮细胞损伤模型,分别测定各组上清液中NO水平、细胞中e NOS和磷酸化e NOS(p-e NOS)的水平。对损伤的HUVECs用不同浓度的Nar(5、10、25、50、100 mg/L)孵育不同时间(6、12、24、48和72 h),用胰岛素(5 m IU/L)刺激细胞15min,检测细胞上清中的NO水平,观察Nar对HG诱导HUVECs损伤的作用。对损伤细胞先分别用PI3K抑制剂LY294002(10μmol/L)和AKT抑制剂AKT inhibitorⅣ(0.5μmol/L)预处理24 h,再用50 mg/L的Nar处理24 h,用胰岛素(5 m IU/L)刺激细胞15 min,检测细胞上清中NO的水平,以及e NOS、p-e NOS、PI3K、AKT及p-AKT的蛋白水平,探讨Nar减轻HG对HUVECs损伤作用的机制。结果:Nar的量效和时效结果显示,50 mg/L Nar预处理HUVECs 24 h后,其减轻HG对HUVECs损伤的作用最为显著,表现为NO和p-e NOS的水平升高(P0.05)。加入PI3K和AKT抑制剂后,Nar减轻HG致内皮细胞的损伤及上调p-e NOS和NO水平的作用完全取消(P0.05)。结论:Nar能减轻HG诱导的血管内皮细胞损伤,其作用机制可能是通过PI3K/AKT/e NOS信号通路介导的。     

硫化氢保护被ATP损伤的PC12细胞

目的:观察硫化氢的供体硫氢化钠(Na HS)对三磷酸腺苷(ATP)诱导的PC12细胞活力、胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)及膜通透性的变化,探讨硫化氢神经保护作用的嘌呤信号机制。方法:将对数生长期高分化的PC12细胞,随机分为4组,分别为(1)正常对照组:常规培养,不进行ATP处理;(2)ATP组:接种细胞24 h后ATP处理;(3)Na HS+ATP组:Na HS预先孵育30 min后再用ATP处理,并且Na HS始终存在于反应体系中;(4)KN-62(P2X7受体阻断剂)+ATP组:KN-62预先孵育30 min,其余同Na HS+ATP组。MTT检测各组细胞活力,Fura-2/AM荧光染料检测各组[Ca2+]i,检测荧光染料YO-PRO-1的相对荧光单位以反映膜的通透性。结果:(1)0.3mmol/L ATP对细胞活力无影响,但1、3、5、10 mmol/L ATP则呈浓度依赖式明显降低细胞活力,200μmol/L Na HS干预可明显逆转ATP引起的细胞活力下降(P0.05),而800μmol/L Na HS预处理则加剧ATP对PC12细胞的损伤(P0.05)。(2)ATP处理PC12细胞会引起[Ca2+]i迅速升高并且呈浓度依赖性,Na HS预处理能对抗ATP引起的[Ca2+]i升高(P0.05)。(3)随着ATP浓度的增加及作用时间的延长,PC12细胞内YO-PRO-1的荧光强度显著增加,Na HS预处理可明显减少细胞对YO-PRO-1的摄取(P0.05)。结论:硫化氢可保护ATP损伤的PC12细胞,可能与其抑制[Ca2+]i升高和YO-PRO-1荧光增强有关。     

赫赛汀诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡并增强其对化疗的敏感性

目的:研究赫赛汀单独或联合阿霉素(adriamycin,ADR)、顺铂(cisplatin,DDP)及紫杉醇(paclitaxel,PTX)对子宫内膜癌细胞凋亡和化疗敏感性的影响,为临床应用赫赛汀治疗子宫内膜癌提供理论依据。方法:MTT法检测赫赛汀、ADR、DDP及PTX处理子宫内膜癌Ishikawa细胞的IC50。进一步应用1/2 IC50量的赫赛汀与各1/2 IC50量的ADR、DDP及PTX药物联合,流式细胞术检测细胞周期与凋亡变化。结果:赫赛汀抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞生长,引起细胞G1期阻滞,诱导细胞凋亡。子宫内膜癌Ishikawa细胞应用赫赛汀、ADR、DDP及PTX的IC50分别为57.12 mg/L、0.572μmol/L、67.4μmol/L和719.5 nmol/L,赫赛汀联合化疗后显著提高各组化疗药的杀伤效果,诱导细胞凋亡,与单纯化疗组相比差异有统计学意义(P0.05)。结论:赫赛汀诱导子宫内膜癌细胞凋亡,并提高子宫内膜癌细胞株对化疗的敏感性。     

手工免疫组化检测非小细胞肺癌ALK蛋白表达的对比分析

目的探讨手工免疫组化(immunohistochemistry,IHC)法检测不同克隆号ALK抗体在间变性淋巴瘤激酶(anaplastie lymphoma kinase,ALK)融合的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中ALK蛋白表达,并与全自动免疫组化染色法进行比较。方法选取60例NSCLC石蜡样本,运用4种抗体D5F3(Ventana)、D5F3(Cell Signaling)、1A4/1H7(Ori Gene)、5A4(Abcam)联合常规手工IHC分别检测NSCLC中ALK蛋白水平,与抗体D5F3(Ventana)采用全自动IHC(Bench Mark)结果进行对比分析。结果 D5F3(Ventana+Bench Mark)检测发现ALK融合阳性NSCLC者32例,ALK融合阴性NSCLC者28例,经FISH法验证结果一致。采用手工IHC法检测4种抗体D5F3(Ventana)、D5F3(Cell Signaling)、1A4/1H7、5A4染色灵敏性分别为93.8%、84.4%、93.8%、56.3%,特异性均为100%,与D5F3(Ventana+Bench Mark)染色结果的一致性分别为96.7%、91.7%、96.7%、76.7%。手术切除大标本的ALK表达优于活检小标本。结论手工IHC法简便经济、易于普及,选择高灵敏性、特异性的抗体,可用于中小医院临床筛查ALK融合NSCLC,染色阳性病例再行抗体D5F3(Ventana)全自动IHC或FISH法检测。