血管内皮生长因子受体启动子驱动双自杀基因联合survivin反义寡核苷酸对结直肠癌细胞及血管内皮细胞的特异性杀伤作用

目的探讨腺病毒介导血管内皮生长因子受体（KDR）启动子驱动的CDglyTK融合基因（AdKDR-CDsbrTK）体系联合survivin反义寡核苷酸（ASODN）对结直肠癌细胞（sw620）及血管内皮细胞（ECV304）的特异性杀伤作用。方法将质粒pAdEasy—KDR-CDglyTK在293细胞内包装、扩增产生重组腺病毒。体外感染表达KDR的SW620、ECV304细胞株,同时用survivin ASODN转染同一细胞株,观察腺病毒的感染效率和ASODN的转染情况。应用RT．PCR和Western印迹检测CDglyTK和survivin基因的表达．MTT法测定两者联合应用对细胞株的杀伤效应和旁观者效应。结果survivin ASODN可转染重组腺病毒感染的细胞,并且两者的转染及感染效率无明显变化。CDglyTK可在SW620、ECV304细胞株高效表达。survivin ASODN可明显降低survivin蛋白表达。各基因治疗组细胞存活率明显低于阴性对照组（P〈0．001）。survivinASODN与AdKDR—CDglyTK基因联用后。随着前药浓度的增加,细胞存活率迅速下降,两者联合作用与单一基因作用相比,差异具有统计学意义（P〈0．05）。但在GCV100μg／ml、5-FC 2000μg／ml时,联合基因治疗组细胞存活率略低于单用AdKDR-CDglyTK,两者间差异无统计学意义（P〉0．05）。Survivin ASODN和AdKDR—CDglyTK联合作用,在前药浓度较低时表现为协同效应,并具有更明显的旁观者效应。结论KDR启动子调控的AdKDR-cDglyTK体系和survivin ASODN基因联合,较单一基因具有更强的特异性杀伤结直肠癌细胞及血管内皮细胞的作用。     

一氧化氮合酶对精索静脉曲张患者精子功能的影响

为探讨一氧化氮、一氧化氮合酶对精索静脉曲张（VC）患者精子功能的影响,本文测定15例VC不育患者外周静脉血清、精索静脉血清和精浆中一氧化氮（NO）及一氧化氮合酶（NOS）,并与12例有生育能力的对照组进行了对比研究。结果显示VC组精索静脉血清和精浆中NO含量及NOS活性,不仅高于其外周静脉血清（P＜0．01）,而且高于对照组（P＜0．01）,但两组外周静脉血清中两项指标无显著性差异（P＞0．05）。提示VC时可能是由于曲张精索静脉血和精浆中NOS的产生增加导致精子生成障碍或（和）精子活力下降,从而导致不育症。     

特异性COX-2抑制剂在慢性盆底疼痛综合征治疗中的应用

目的 应用特异性COX-2抑制剂及特拉唑嗪分组治疗ⅢB型CPPS，探讨其可能发生机制及选择合理的治疗方案。方法 以两杯法及尿常规、前列腺液常规检查及NIH—CPSI评分筛选ⅢB型CPPS患者87例，并随机分为特拉唑嗪治疗组27例，塞来昔布治疗组29例及两者联合用药组31例，分别连续药物治疗4周。治疗前后分别进行NIH—CPSI评分，并对正常对照组及入组患者治疗前后的前列腺液标本应用western blot方法进行COX-2表达水平测定及应用ELISA方法进行PGE2浓度测定。结果 （1）治疗前各治疗组COX-2表达及PGE2浓度测定结果均明显高于正常对照组，有显著性差异（P〈0．05），各治疗组间尤显著性差异（P〉0.05）。（2）治疗后各治疗组COX-2表达及PGE2浓度测定结果比较治疗前有显著性差异（P〈0.05），但组间比较无显著性差异。（3）CPSI评分各治疗组治疗后每个变量与治疗前比较均有显著性差异（P〈0.05）；且组间比较有显著性差异（P〈0.05）。结论 本研究表明CPPS患者前列腺液中COX-2和PGE2的表达水平与CPPS的发生及症状的严重程度有密切的相关性。特异性COX-2抑制剂及α-肾上腺素受体阻断药均可降低前列腺液中炎症因子表达，治疗上联合用药可以提高疗效。     

应用电生理检测肌皮神经肱肌肌支在神经根的定位

目的 探讨应用电生理检测肌皮神经肱肌肌支在神经根的定位,为肱肌肌支移位术的临床应用寻求理论依据.方法 选择30例臂丛神经损伤行健侧C7移位的患者,年龄16～50岁,平均[(28.9±7.7)岁,-x±s,下同],术中暴露健侧正常的臂丛神经,运用意大利ESAOTE的Reposer四道程肌电诱发电位仪,分别刺激C5～T1神经根,在肱肌记录诱发电位的潜伏期及波幅.结果 30例健侧C7移位者术中电生理检测,刺激臂丛神经根时,其中C529例、C630例、C728例记录到肱肌运动电位,而刺激C8、T1仅有6例记录到较小的肱肌运动电位.C5、6、7运动电位的潜伏期和波幅分别为(6.32±1.50)ms、(6.51±1.36)ms、(6.99±1.33)ms和(4.87±4.43)mV、(5.65±4.76)mV、(0.90±2.29)mV,其中以C6的波幅最大,C5次之,C7波幅较小,提示C5、6支配肱肌的神经纤维数可能最多.结论 肱肌主要接受来自C5、6神经纤维的支配,该肌支移位至正中神经(骨间前神经)是可行及有效的,同时该方法为今后临床研究周围神经的定位提供了检测手段.     

显微镜与椎间盘镜辅助腰椎间盘切除术治疗腰椎间盘突出症疗效的对比分析

目的 报道显微镜辅助直视下腰间盘切除术与椎间盘镜辅助腰间盘切除术两种不同手术方法治疗单节段腰椎间盘突出症的临床疗效.方法 比较分析显微镜与椎间盘镜辅助下的两种不同手术方法治疗单节段腰椎间盘突出症病例,治疗病例分别为33例和36例.比较手术时间、术中出血量、并发症、住院天数、术前及术后腰腿疼痛的JOAS(Japanese Orthopaedic Association Score)及VAS(Visual Analog Scales)评分、围手术期并发症等指标.结果 所有病例平均随访2年2个月(11个月至4年),2组术前及术后腰腿疼痛的JOAS及VAS评分、围手术期并发症、住院天数差异无统计学意义(P＞0.05),而在手术时间、术中出血量上差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 显微镜辅助直视下腰间盘切除术与椎间盘镜辅助腰间盘切除术治疗单节段腰椎间盘突出症均疗效满意,均为理想的微创手术方法.     

负压治疗技术在急、慢性骨感染中的应用

目的 探讨负压治疗技术在治疗急、慢性骨感染中的价值.方法 采用负压治疗技术.即在一段时间内将伤口置于密闭强力负压状态,治疗急、慢性骨感染患者30例(33个部位),辅助清创手术,应用敏感抗生素,应用植皮、肌皮瓣转移等方法闭合创面.结果 29个部位通过1次负压治疗就可达到创面闭合条件.所有患者均获随访,随访时间6～23个月,平均13.6个月,感染无复发.结论 负压治疗技术能有效控制急、慢性骨感染,缩短治疗时间,在骨感染治疗中有较好的应用前景.     

经腹与经腹膜外腹腔镜下前列腺癌根治术的效果比较

目的 比较经腹与经腹膜外途径腹腔镜下手术治疗前列腺癌的临床效果.方法前列腺癌患者33例行腹腔镜下前列腺癌根治术,其中经腹21例,经腹膜外12例.对2组患者手术时间、术中出血量、术中并发症、肠功能恢复时间、术后住院时间、术后并发症等资料进行比较分析.结果 33例手术均成功.经腹与经腹膜外2组手术时间分别为(299±46)和(309±64)min,出血量分别为(618±448)和(677±469)ml,2组比较差异无统计学意义(P＞0.05).经腹组术中发生大出血3例、膀胱损伤2例、单侧输尿管损伤1例,经腹膜外组术中发生大出血1例、闭孔神经损伤1例、腹膜损伤1例、膀胱三角损伤1例.2组术后留置导尿时间分别为(14.6±3.8)和(12.3±2.9)d,肠功能恢复时间分别为(2.7±0.7)和(2.1±0.5)d,术后住院时间分别为(17.0±3.6)d和(11.2±3.5)d,2组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 腹腔镜下前列腺癌根治术经腹膜外比经腹途径具有视野清晰、对腹腔器官影响小、术后恢复快、术后住院短等优点.     

应重视对2型糖尿病患者肾脏损害临床与病理相关性的研究

2007年美国肾脏病基金会(NKF)制定了糖尿病及慢性肾脏病临床实践指南[1],这是第一个针对糖尿病并发慢性肾脏病的指南,并提出了糖尿病肾脏疾病(Diabetic Kidney Disease,DKD)的概念.     

内质网应激在乙酰化低密度脂蛋白引起的人单核巨噬细胞凋亡中的作用

目的 观察在脂质引起佛波酯（PMA）促分化后人单核细胞源性巨噬细胞（THP-1）凋亡中有无内质网（ER）应激，探讨巨噬细胞凋亡在慢性肾脏疾病并发加速进展的动脉粥样硬化和心血管事件中的作用。 方法 密度梯度法提取低密度脂蛋白，制备乙酰化低密度脂蛋白（ACLDL）。Hoechst染色定量计数凋亡细胞比例。caspase3,7活性测定检测凋亡。油红O染色观察细胞内脂滴变化。酶学反应法测定细胞内游离胆固醇（FC）和胆固醇酯（CE）的含量。Western印迹和实时定量PCR测定细胞乙酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶（ACAT）、生长停滞及DNA损伤基因（CHOP）和Bcl-2的表达。 结果 ACLDL呈剂量依赖和时间依赖促进细胞凋亡。100 mg/L ACLDL与THP-1巨噬细胞作用24 h，油红O染色下细胞内脂滴显著增多，细胞内FC和CE含量显著增加（P < 0.01）。Western印迹显示，ACLDL 100 mg/L作用3～24 h，ACAT1、CHOP表达较作用前持续升高，Bcl-2表达持续降低。实时定量PCR显示，ACLDL作用12～24 h，较作用前促进CHOP mRNA表达（P < 0.01），抑制Bcl-2 mRNA表达（P < 0.01）；ACLDL作用24 h点，较无ACLDL作用组促进CHOP mRNA表达（P < 0.01），抑制Bcl-2 mRNA表达（P < 0.01），但对ACAT1表达没有影响。 结论 在ACLDL引起的THP-1巨噬细胞凋亡中存在ER应激。     

β1转化生长因子对瘢痕疙瘩成纤维细胞分泌相关的基质金属蛋白酶的影响

目的探讨β1转化生长因子(TGF-β1)对瘢痕疙瘩成纤维细胞分泌基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)表达的调节作用,及TGF-β1与瘢痕的关系。方法培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞经TGF-β1处理,采用酶联免疫法(ELISA)测定瘢痕疙瘩成纤维细胞上清液中MMP-1、MMP-2和TIMP-1的水平。结果瘢痕疙瘩中成纤维细胞MMP-1、MMP-2和TIMP-1的生成量显著高于正常皮肤(P<0.01);加TGF-β1处理后,瘢痕疙瘩中成纤维细胞MMP-1的分泌量显著降低(P<0.01),MMP-2的分泌量显著升高(P<0.01),而TIMP-1的分泌量无显著改变(P>0.05)。结论培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞显示MMP-1、MMP-2和TIMP-1增加,TGF-β1在生成调节过程中起重要作用。