人毛乳头细胞凝集性生长差异表达基因cDNA文库的构建

目的 构建毛乳头细胞凝集性生长状态下差异表达基因的消减cDNA文库。方法 分别提取凝集性生长和非凝集性生长状态下毛乳头细胞中的总RNA，应用SMART cDNA合成技术和抑制性消减杂交技术分离毛乳头细胞凝集性生长状态下差异表达基因的cDNA片段并建立消减cDNA文库；利用PCR对随机挑选的100个白色菌落进行插入片段的验证，对其中证实有插入片段的30个克隆进行cDNA斑点杂交验证。结果 所构建的消减cDNA文库扩增后得到320个阳性克隆，随机挑选的100个阳性克隆中95％的均有长度在100—600bp的插入片段，cDNA斑点杂交验证显示27个(90．0％)克隆为阳性。结论 结合SMART cDNA合成技术，应用抑制性消减杂交成功地构建了毛乳头细胞凝集性生长差异表达基因消减cDNA文库，为进一步筛选和克隆毛乳头细胞凝集性生长相关基因奠定了基础。     

cAMP对胰岛素刺激的NIH3T3细胞丝裂原激活蛋白激酶活性的抑制作用

目的 探讨cAMP-PKA信号途径对胰岛素激活的Ras-丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号途径的影响。方法 以3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)提高细胞内环腺苷酸(cAMP)浓度，藉四唑蓝比色法(MTT法)和蛋白免疫印迹试验分别观察cAMP对胰岛素刺激的小鼠成纤维细胞(NIH3T3细胞)的生长增殖和胞内丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)活性的影响。结果 IBMX(0．5mmol/L)抑制静息的和胰岛素(10mU／mL)刺激的NIH3T3细胞的增殖，作用呈时间依赖性。在胰岛素(10mU／mL)刺激的NIH3T3细胞，MAPK出现酪氨酸磷酸化；而以IBMX(0．5mmol/L)预处理细胞30min后，再以胰岛素作用10min，胰岛素刺激的MAPK的酪氨酸磷酸化受抑制。结论：cAMP可通过抑制MAPK磷酸化活化对NIH3T3细胞增殖起抑制作用。     

人巨细胞病毒pp150基因的原核表达及抗原性分析

①目的 构建人巨细胞病毒（HCMV）PP150的原核高效表达系统，制备用于急性，活动性HCMV感染血清学诊断的基因工程抗原。②方法 PCR扩增HCMV PP150抗原决定簇（840-1048aa）编码基因片段，分别插入原核表达载体PMAL-p2,pet-28a，转化宿主菌E.coli.诱导表达，经麦芽糖亲和层析树脂纯化，以WesternBlot及间接ELISA法鉴定及其抗原性。③结果 重组表达质粒PMAL-P2-PP150可在E.coli.5DH5a中有效表达，表达产物经SDS-PAGE电泳后，凝胶成像系统分析显示相对分子质量约为6.4万，约占菌体蛋白的10%。而重组质粒pET-28a-pp150未见明显表达带，Western-Blot检测，阳性识别率为80%（12/15）。用此蛋白包被ELISA板，检测正常孕妇血清，阳性率为6.5%(17/263)。与本室制备的全病毒抗原的ELISA的诊断符合率为96%。④结论此重组蛋白具有良好的抗原性，进一步完善后可用于HCMV急性和活动性感染的诊断。     

Dendritic Cells Coinjected with Tumor Cells Treated with an Anticancer Drug to Induce Tumor Rejection

Purpose: We examined whether bone marrow-derived dendritic cells (DCs) could induce antitumor immunity when a chemotherapeutic drug was added. Methods: CT26 (a murine colon cancer cell line syngeneic with BALB/c) and CT26-bearing mice were treated with mitomycin C (MMC) intraperitoneally (i.p.). Next, mice immunized with a coinjection of DCs and MMC-treated CT26 (i.p.) were given an intradermal inoculation of CT26. Finally, CT26-bearing mice were treated with MMC (i.p.) with or without DCs, given peritumorally. Results: Although the inoculated tumor was not rejected in the control mice, CT26 was rejected in 50% of the mice injected with MMC alone. Apoptosis was observed in the MMC-treated CT26 cells in vitro and in vivo. Immunization with DCs and apoptotic CT26 cells, but not with apoptotic CT26 alone, gave protection against tumor challenge in 7 of 13 mice. A significantly higher level of cytotoxic T-cell activity and interferon-γ production was seen in the protected mice. When MMC (i.p.) treatment was followed by peritumoral DC injection in the CT26-bearing mice, remarkable therapeutic effects were observed. Conclusion: DCs can collaborate with chemotherapy-induced apoptotic tumor cells and elicit improved antitumor immunity, probably through the acquisition of tumor-associated antigens from apoptotic tumor cells. Received: January 7, 2002 / Accepted: September 3, 2002 Acknowledgments. We thank Dr. Kazuo Kinoshita for his useful advice on using flow cytometry. This research was partly supported by the Ministry of Education, Culture, Sports, Science and Technology (No. 11671160). Reprint requests to: S. Yamasaki     

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目的　探讨腹腔镜食道裂孔疝修补术的可行性及安全性。方法　回顾性分析 2 0 0 1年 3月至 2 0 0 3年12月天津南开医院行腹腔镜食道裂孔疝修补术 11例病人的临床资料。结果　 10例行裂孔疝修补后同时行胃底折叠术 ,其中 7例行Nissen胃底折叠术 ,3例行Toupet胃底折叠术 ,1例仅行裂孔修补术。术后症状完全缓解。食道下段压力由 (8 6± 2 4 )mmHg(1mmHg =0 133kPa)提高到 (18 2 0± 3 4 3)mmHg(P <0 0 1) ,2 4hpH值监测评分由 5 3 4± 39 7降低到 8 0 4± 2 12 (P <0 0 1) ,较手术前有明显改善 ,并达到正常范围。无手术并发症 ,无中转开腹及死亡病例。结论　对于食道裂孔疝 ,腹腔镜食道裂孔疝修补术是一种安全、有效的治疗方法     

彩色多普勒超声检查对卵巢肿瘤的诊断价值

①目的 探讨彩色多普勒超声检查对卵巢肿瘤的诊断价值。②方法 对67例疑诊为卵巢肿瘤的病人术前行彩色多普勒超声检查及血流动力学分析，测其动脉血流收缩期峰值流速(PSV)和阻力指数(RI)，并与手术及病理结果对照。③结果 67例卵巢肿瘤经手术及病理证实良性49例，恶性18例，经彩色多普勒超声诊断为良性41例，恶性15例，超声诊断符合率分别为83．7％和83．3％。④结论 彩色多普勒超声对卵巢肿瘤的良恶性判断具有较高价值。     

MMP-9和TIMP-1在实验性肺气肿大鼠肺组织中的表达及其意义

目的研究基质金属蛋白酶(MMP-9)及其组织抑制因子(TIMP-1)在弹性蛋白酶所致肺气肿大鼠肺组织中的表达.方法雄性Wistar大鼠20只,随机分为两组:正常对照组和肺气肿模型组,每组10只.模型组大鼠气管内滴入弹性蛋白酶复制肺气肿模型.25d后,观察各组大鼠肺组织的病理改变,免疫组化方法观察肺组织MMP-9和TIMP-1中的蛋白表达情况.结果肺气肿模型组MMP-9和TIMP-1的表达与正常对照组相比明显增强(P＜0.01),且MMP-9/TIMP-1比值失衡.结论MMP-9/TIMP-1失衡在肺气肿形成中起重要作用.     

中医舌象计算机识别研究的现状分析

从静态舌图像计算机识别研究的关键环节出发,对当前的研究现状进行了分析.认为在舌图像的采集方面有必要引入正交设计、图像质量评价等方法以筛选出高标准、统一、实用的图像采集条件;图像分割研究可以考虑从多角度入手,综合使用多种分割方法,取长补短,以提高分割效果;同时采用Delphi评价法、多中心的网上专家判别等手段,大样本集中专家经验,综合各家的辨舌经验,建立科学规范的舌象诊断标准;当前舌象识别研究的热点主要集中在舌的颜色领域,研究的方向有待向颜色以外的其他方面拓展,并最终由定性向定量转化,而实现舌诊内容的综合判别将是今后努力的方向.     

肾综合征出血热特异性抗体的检测与中西医结合治疗的研究

目的探索一种更为简便、快速、特异、灵敏的肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome, HFRS)抗体的检测方法及更为有效的中西医结合治疗手段.方法559例HFRS患者血清同时采用免疫滴金法(colloidal gold immuno-dot assay,CGIDA)与酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)对比检测特异性免疫球蛋白M抗体(抗HFRS-IgM),间接免疫荧光法(indirect fluorescent antibody test,IFAT)对比检测特异性免疫球蛋白G抗体(抗HFRS-IgG).101例HFRS患者分组进行中西医结合治疗,治疗组50例用苦黄注射液、参麦注射液联合黄芪口服液,对照组51例用利巴韦林注射液联合甘利欣注射液,针对老年患者的临床特点,及早采用综合性防治措施.结果559例HFRS患者血清,以CGIDA法检测抗HFRS-IgM,阳性396例(70.8%);以CGIDA法检测抗HFRS-IgG,阳性489例(87.5%).治疗组与对照组用药后退热天数、主要症状和体征缓解天数相似(P＞0.05);肾功能恢复天数,对照组优于治疗组(P<0.01);在越期方面,治疗组越休克期数明显高于对照组(P<0.01). 结论CGIDA法检测HFRS特异性抗体分别与ELISA法及IFAT法对照,均有简便、快速、特异、灵敏之优点,检测抗HFRS-IgM,CGIDA法敏感性差于ELISA法,但是无假阳性;检测抗HFRS-IgG,CGIDA法的灵敏度高于IFAT法.苦黄注射液、参麦注射液联合黄芪口服液与利巴韦林注射液联合甘利欣注射液相比较,疗效无明显差别,但前者优于改善休克情况,后者强于改善肾功能.