胰岛素样生长因子-1及其受体在胃癌发生发展中的作用

目的 :探索胰岛素样生长因子 -1(in sulin likegrowthfactor 1,IGF 1)及其受体 (in sulin likegrowthfactor 1receptor ,IGF 1R)在胃癌发生、发展中的作用 ,寻找新的胃癌早期诊断标志物 ,并为胃癌的病因研究提供理论依据。方法 :对 2 8例经手术切除并由病理证实的胃癌患者的癌、癌旁及胃黏膜正常区组织标本进行研究 ,以 14例正常人胃黏膜标本作对照 ,应用RT PCR方法 ,检测IGF 1/IGF 1R在胃癌组织与正常人胃黏膜中的表达变化和胃癌患者的癌、癌旁及胃黏膜正常区组织中的表达变化。结果 :IGF 1/IGF 1RmRNA的表达量在胃癌组明显高于正常对照组。在胃癌组织中IGF 1/β actin比值为 0 3 0 5± 0 0 3 2 ,IGF 1R/β actin比值为 0 12 9± 0 0 11;在正常胃黏膜中IGF 1/β actin比值为 0 15 4± 0 0 13 ,IGF 1R/β actin比值为 0 0 2 7± 0 0 0 4。两组间的差异有统计学意义 ,P <0 0 1;且mRNA的表达量按正常、癌旁、癌组织顺序逐渐增高 ,3组间差异有统计学意义 ,P <0 0 5。结论 :IGF 1/IGF 1R因子的高表达 ,促进了胃黏膜上皮细胞的异常增殖 ,在胃癌的发生发展中起重要的作用。     

肿瘤坏死因子-β抗肿瘤及作用机制的研究

目的 :探讨肿瘤坏死因子 -β(tu mornecrosisfactor β ,TNF β)对 3种人癌细胞的增殖抑制作用及其细胞分子机制。方法 :采用多种体外及体内实验方法 ,从多侧面证实TNF β的抗肿瘤作用。并采用细胞内游离钙浓度测定、12 5I cAMP放免检测法检测cAMP含量。结果 :不同浓度TNF β对肿瘤细胞系均有增殖抑制作用 ,且呈剂量依赖性。当TNF β与顺铂和多柔比星合用 ,JF3 0 5细胞死亡百分比分别达到 ( 68 6±9 0 ) %和 ( 76 5± 7 9) %。TNF β实验组细胞内cAMP浓度明显增加 ,JF3 0 5细胞由( 0 0 5 72± 0 0 176)上升到 ( 0 2 896±0 0 784) pmol/10 6个细胞。此外细胞内钙浓度上升并且凋亡。结论 :TNF β具有体内、外抗肿瘤作用 ,其部分机制是通过增加cAMP含量及诱导细胞凋亡     

VEGF及其受体KDR表达与宫颈癌细胞增殖及侵袭转移的关系

目的 :探讨血管内皮生长因子 (vascu larendothelialgrowthfactor ,VEGF)及其受体(kinaseinsertdomaincontainingreceptor ,KDR)在早期宫颈癌的表达和临床意义。方法 :采用免疫组织化学SP法检测 75例早期宫颈癌(ICC)、18例宫颈上皮内瘤样病变 (CIN)和 15例正常宫颈上皮 (NCE)中VEGF、KDR和增殖细胞核抗原 (Ki 67)的表达。结果 :VEGF、KDR、Ki 67在NCE、CIN和ICC的阳性表达率分别为 2 6 67% ( 4 /15 )、61 11% ( 11/18)和77 3 3 % ( 5 8/75 ) ,13 3 3 % ( 2 /15 )、 61 11%( 11/18)和 69 3 3 % ( 5 2 /75 )及 13 3 3 % ( 2 /15 )、72 2 2 % ( 13 /18)和 96 0 0 % ( 72 /75 )。从NCE到CIN再到ICC ,VEGF、KDR和Ki 67的阳性表达率均逐渐升高 ,P <0 0 5。VEGF、KDR在ICC的表达均与盆腔淋巴结转移、脉管浸润、组织学分级和Ki 67表达有关 ,P <0 0 5 ;而均与患者年龄、FIGO分期、组织学类型和间质浸润深度无关。有盆腔淋巴结转移、脉管浸润、组织学分级为Ⅲ级及Ki 67高度表达者的VEGF、KDR阳性表达率分别显著高于无盆腔淋巴结转移、无脉管浸润、组织学分级未超过Ⅱ级及Ki 67表达在中度以内者 ,P<0 0 5。VEGF与KDR在ICC的表达呈显著正相关 ,r =0 5 6,P <0 0 1;并且两指标均阳性表达者 ,其Ki 67高度表达、     

NGAL基因5′侧翼区转录调控元件的分段定位鉴定

目的 :对中性粒细胞明胶酶相关脂萼蛋白 (neutrophilgelatinase associatedlipocalin ,NGAL)基因 5′侧翼区的转录调控元件进行分段定位鉴定。方法 :以双荧光素酶报告基因检测系统检测NGAL基因 5′侧翼区 ( -14 3 1～ +84)转录调控元件与转录调控蛋白之间的相互作用。结果 :在NGAL基因 5′端 -945～ -65 8和 -65 7～ -4 172个区段发现了转录增强子元件与转录激活蛋白之间的相互作用 ,而在 -4 16～ -15 2区段则发现了转录沉默子元件与转录抑制蛋白之间的相互作用。结论 :在NGAL基因5′侧翼转录调控区可能至少存在着 2个转录增强子元件和 1个转录沉默子元件     

三氧化二砷对人白血病细胞株NB4和K562及MOLt4的增殖、周期及凋亡的影响

目的 :观察三氧化二砷 (As2 O3 )对人白血病细胞株NB4、K5 62、MOLt4的增殖 ,周期及凋亡的影响。方法 :采用台盼蓝拒染法计数活细胞数 ,并计算细胞生长率 ;细胞涂片经Wright Giemsa染色 ,光镜下观察细胞的形态 ;流式细胞仪解析细胞周期。结果 :1)As2 O3 能够抑制NB4、K5 62、MOLt4细胞的增殖。 2 ) 4μmol/LAs2 O3 能够使K5 62细胞发生M期阻滞。但NB4、MOLt4细胞未见明显改变。 3 ) 2、4μmol/L的As2 O3 处理NB4、MOLt4和K5 62细胞 48h ,NB4、MOLt4细胞株的凋亡细胞明显增多。但是 ,K5 62细胞未见明显改变。结论 :As2 O3 不但对NB4细胞具有抑制增殖 ,诱导细胞凋亡的作用 ,而且对非t( 15 ;17)的K5 62、MOLt4细胞也具有抑制增殖的作用 ,同时诱导MOLt4细胞凋亡 ,使K5 62细胞发生M期阻滞。     

18F-FDG-SPECT显像技术在肺癌诊断中的意义

目的 :研究18F FDG SPECT显像技术在肺癌诊断中的临床意义。方法 :利用恶性肿瘤组织高糖酵解的特性 ,对 3 6例肺癌患者用18F标记脱氧葡萄糖 ,使18F浓聚于癌组织中 ,再用带符合线路的SPECT探测其摄取率达到诊断目的 ,并与术后病理切片作对照研究。结果 :3 6例患者病灶检出灵敏度10 0 % ,正确率 91 67% ( 3 3 /3 6) ,其中鳞癌正确率 10 0 % ( 17/17) ,腺癌 84 62 % ( 11/13 )。结论 :18F FDG SPECT能有效地显像肺癌病灶 ,瘤体及转移淋巴结的检出率高于CT ,作为一种补充检查有着重要的临床意义。该检查价格便宜 ,成像清晰 ,有良好应用价值。     

载体介导的RNA干扰技术抑制肝癌耐药细胞MDR1表达的研究

目的 :构建含多药耐药基因MDR1的短发夹状RNA(shorthairpinRNA ,shRNA)表达质粒 ,观察对肝癌耐药细胞Bel 740 2 /R的MDR1mRNA的抑制作用。方法 :利用分子克隆技术 ,将含MDR1的双链DNA ,与经双酶切后的载体PGE 1连接 ,构建pshRNA MDR1重组质粒 ,在脂质体的介导下转染肝癌耐药细胞株Bel 740 2 /R ;RT PCR分析MDR1mRNA的表达 ,MTT法检测细胞对药物的敏感性 ,流式细胞仪检测细胞内罗丹明 12 3 (Rh12 3 )的潴留和P gp的表达。结果 :PCR和DNA测序证实了表达质粒构建成功 ,并能明显地抑制MDR1mRNA的表达 ;对盐酸表柔比星和顺铂的半数抑制浓度IC50明显降低 ,P <0 0 5 ;P gp的表达阳性率降低了 5 7 3 % ;细胞内Rh12 3的浓度显著增高 ,P <0 0 5。结论 :构建的pshRNA MDR1表达质粒能有效地降低肝癌耐药细胞MDR1mRNA和P gp的表达。     

EGCG干预LMP1激活的AP-1信号转导通路

目的　探讨EGCG对鼻咽癌细胞激活蛋白 1(AP 1)信号转导通路的干预作用 ,阐明在鼻咽癌细胞中茶多酚干预EB病毒潜伏膜蛋白 1(LMP1)活化的AP 1信号转导通路中靶分子的机制。方法　采用EB病毒阴性及阳性的鼻咽癌细胞系CNE1和CNE1 LMP1细胞。利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察EGCG对CNE1和CNE1 LMP1细胞的生存率的影响。采用瞬间转染及报道基因法观察EGCG对AP 1活性的作用。利用间接免疫荧光法观察EGCG对JNK核移位的影响 ,再分别提取CNE1和CNE1 LMP1的胞浆及胞核蛋白 ,Westernblot分析EGCG抑制JNK的核移位后 ,胞浆及胞核蛋白中JNK的变化。采用Westernblot分析EGCG对c Jun的磷酸化水平的影响。采用瞬间转染及报道基因法观察EGCG对cyclinD1启动子活性的影响 ,并用Westernblot分析EGCG对cyclinD1蛋白表达的作用。结果　EGCG对鼻咽癌细胞的抑制作用有剂量依赖性 ,并可抑制AP 1的活性。EGCG能抑制JNK的核移位 ,并抑制c Jun的磷酸化。EGCG对AP 1信号通路下游的靶基因cyclinD1的启动子活性及其蛋白表达都有抑制作用。结论　EGCG对信号转导通路上的AP 1、JNK、c Jun、cyclinD1多个靶点分子具有干预作用。LMP1是EB病毒这种编码的蛋白 ,因此 ,EGCG抑制与病毒相联系的信号转导通路 ,可能是EGCG抑制与病毒相关的肿瘤的分子机     

宫颈癌患者血浆可溶性P-选择素及一氧化氮的检测及临床意义

目的　探讨宫颈癌患者血浆可溶性P 选择素 (sP selectin)和一氧化氮 (NO)的临床意义。方法　采用ELISA法和化学比色法 ,分别测定 3 6例宫颈癌患者及 3 6例健康人血浆可溶性P 选择素及一氧化氮的水平。结果　血浆可溶性P 选择素及一氧化氮水平宫颈癌患者与健康人比较 :宫颈癌组血浆可溶性P 选择素为 ( 13 8.2 6± 2 9.40 )mg/L及一氧化氮水平为 ( 14 3 .60±3 9.61)μmol/L ;健康对照组血浆可溶性P 选择素为 ( 2 2 .65± 7.2 9)mg/L及一氧化氮水平为 ( 65 .3 6± 6.5 5 ) μmol/L ,两组分别两两比较有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。宫颈癌有淋巴结转移者P 选择素及一氧化氮水平分别为 ( 161.3 1± 2 5 .5 0 )mg/L、( 162 .5 2±3 8.2 7) μmol/L ,无淋巴结转移者P 选择素及一氧化氮水平分别为 ( 10 5 .66± 5 1.3 6)mg/L、( 12 0 .16± 49.64 ) μmol/L ,两组分别两两比较有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。宫颈癌患者手术后P 选择素及一氧化氮水平显著低于手术前 (P <0 .0 1)。结论　检测血浆P 选择素、NO水平的变化 ,对宫颈癌的病情判定及治疗指导具有参考意义     

应用RT-PCR检测CK19表达提高乳腺癌前哨淋巴结微转移检出的研究

目的:评价乳腺癌前哨淋巴结活检的临床意义,应用细胞角蛋白cytokeratin19(CK19)RT-PCR检测法提高其的敏感性及准确率.方法:随机选取1999年10月至2003年3月住院的乳腺癌患者73例,其中2001年1月至2003年3月的29例,对前哨淋巴结(SLN)进行了CK19 RT-PCR检测.采用专利兰进行SLN识别.RT-PCR法检测CK19 mRNA表达.结果:SLN识别成功67例,成功率为91.8%(67/73).对上述67例的SLN转移的常规病理诊断的敏感度68.8%(22/32),准确率85.1%(57/67).在行CK19 RT-PCR的29例中,检测出常规病理未检出的微小转移病例8例.敏感度90.0%(18/20),准确率93.1%(27/29).结论:前哨淋巴结活检可有效判断乳腺癌腋淋巴结转移状态,应用CK19 RT-PCR检测SLN的微转移,可提高敏感度及准确率.