小鱼际滚法对组织机化期骨骼肌钝性损伤家兔Fibronectin-1与CTGF-1表达的影响

目的观察小鱼际滚法对组织机化期骨骼肌钝性损伤家兔纤连蛋白-1(fibronectin-1,FN-1)、结缔组织生长因子-1(connective tissue growth factor,CTGF-1)表达的影响。方法选取30只成年新西兰大耳白兔,随机均分为手法治疗组、模型对照组、空白对照组,各10只。手法治疗组予造模、治疗处理,模型对照组予造模、不治疗处理,空白对照组予不造模、不治疗处理,采取自制重力铅锤击打兔右后下肢股四头肌造成骨骼肌钝性损伤模型,并在疗程3 d后3组全处死,在兔股四头肌受损区域内取肌肉组织,HE染色观察组织形态的变化,Western-Blot检测治疗前后FN-1、CTGF-1的变化情况。结果HE染色结果显示:模型对照组与空白对照组对比,其模型对照组肌纤维受损较多,并有不规则结缔样组织填充其中;手法治疗组与模型对照组对比,手法治疗组新生的肌纤维及新生血管更明显,炎性细胞较少,肌肉形态受损较轻。Western-Blot结果显示:模型对照组FN-1、CTGF-1指标显著高于空白对照组,手法治疗组FN-1、CTGF-1指标均显著高于空白对照组、低于模型对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论在组织机化期骨骼肌钝性损伤模型家兔股四头肌修复过程中,运用小鱼际滚法治疗,可有助修复受损的骨骼肌,使炎性细胞减少,促进骨骼肌新生,改善家兔运动功能,提高疗效,值得推广应用。     

茵陈五苓散对非酒精性脂肪性肝病模型大鼠RBP4的影响

目的:观察RBP4在非酒精性脂肪性肝病模型大鼠中的表达,并探讨茵陈五苓散对非酒精性脂肪肝病的治疗效果及作用机制。方法:60只SD大鼠随机分为空白对照组(15只)与实验组(45只)。空白对照组给予普通饲料,实验组大鼠饲喂改良以后的高脂饲料,制作非酒精性脂肪肝病模型,饲喂24周。造模成功后,将实验组的大鼠随机分为4组,非酒精性脂肪肝组、茵陈五苓散1.28 g·mL~(-1)组、茵陈五苓散0.64 g·mL~(-1)组和辛伐他汀对照组。每组大鼠进行灌胃,给予对应的药物治疗,6周后比较各组大鼠肝质量、体质量、肝指数、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterin,LDL-C)、三酰甘油(triacylglycerol,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)水平,采用HE染色,观察肝脏病理形态学的改变;ELISA法检测肝组织中RBP4的表达。结果:与空白对照组比较,非酒精性脂肪肝组大鼠的TG、LDL-C、体质量、肝指数、肝质量、TC、RBP4的表达均升高(P0.01)。与非酒精性脂肪肝组比较,辛伐他汀对照组、茵陈五苓散1.28 g·mL~(-1)组和茵陈五苓散0.64 g·mL~(-1)组大鼠各指标的表达均降低(P 0.01)。与辛伐他汀对照组比较,茵陈五苓散1.28 g·mL~(-1)组各指标均降低(P 0.01),茵陈五苓散0.64 g·mL~(-1)组除体质量外,其余各指标均降低(P0.01)。与模型组比较,各治疗组肝组织病理变化改善,且茵陈五苓散1.28 g·mL~(-1)组的改善结果优于茵陈五苓散0.64 g·mL~(-1)组和辛伐他汀组。结论:茵陈五苓散可通过调节大鼠RBP4的表达水平,改善脂代谢,减缓脂肪变性程度,从而抑制脂质过氧化反应和减少细胞变性,进而保护肝组织,治疗非酒精性脂肪性肝病。     

五味子种质资源雌花心皮数及相关性状研究

目的研究五味子种质雌花心皮数的精确估算方法及其变异规律，为五味子种质资源的收集、评价和品种选育提供理论依据。方法采用资源调查和统计分析相结合的方法。结果采用公式y=5z＋n（y=心皮数；z=各行一致心皮数；n=顶端心皮数）对五味子雌花心皮数的估算值与实测值差异不显著。五味子种内雌花心皮数的变异系数为14.33％，种质平均心皮数19．5～44．0枚。五味子种质雌花心皮数与心皮坐果率呈极显著负相关；雌花心皮数同心皮坐果率的乘积与果穗质量、果穗果粒数呈极显著正相关；雌花心皮数与同节位雌花数呈极显著正相关；不同粗度枝条雌花心皮数差异显著。结论公式y=5z＋n可较精确估算五味子雌花心皮数。五味子种内雌花心皮数存在较大变异，可作为五味子种质资源收集、评价及品种选育的重要性状。进行雌花心皮数评价时需注意取样的代表性和典型性。     

白藜芦醇合酶基因的克隆及丹参的转化

目的为探索利用分子生物学技术培育新型药用植物的新途径,将外源的白藜芦醇合酶(RS)基因导入到丹参中表达,以改善或增加丹参的效用。方法根据已公布的核苷酸序列,利用引物悬挂延伸法,经过3次扩增,最终从葡萄基因组DNA中获得完整的RScDNA基因序列;以质粒pBin438为基础,构建含有RS目的基因的组成型植物表达载体。在根癌农杆菌介导下,利用叶盘法转化丹参,进而通过PCR、PCR-Southern杂交对不同的转基因植株进行筛选与检测。结果总共得到了45棵卡那霉素抗性植株,经PCR和PCR-Southern杂交检测,确定葡萄RS基因已整合到部分转基因丹参苗的基因组中。结论成功建立了白藜芦醇合酶基因转化丹参的体系,并获得了转基因植株。     

靶向葡萄糖代谢以外营养物质的纳米药物在肿瘤饥饿治疗中的应用

饥饿治疗是一种新兴的肿瘤治疗手段,其靶向肿瘤细胞异常活跃的营养物质吸收和代谢途径,抑制和杀伤肿瘤。除了葡萄糖以外,饥饿治疗的靶点也包括肿瘤细胞内的其他营养物质。然而,靶向效率较差以及药物耐受等问题可能会影响其临床转化。近年来,纳米材料辅助的饥饿治疗快速发展,可以部分解决上述问题。本文介绍了一系列具有饥饿治疗作用以及将饥饿治疗与其他疗法相结合的纳米药物,其靶向葡萄糖代谢以外的营养物质,包括乳酸、氨基酸和脂质,为进一步开发具有饥饿治疗作用的纳米药物提供参考。     

CELL-DYN3700血细胞分析仪的使用体会

CELL-DYN3700血细胞分析仪是美国Abbott公司1999年推出的全自动多参数血细胞分析仪。该仪器采用电阻法与激光技术相结合的原理，进行全血细胞计数（Complete Blood Cell Count，CBC）的同时，还可进行网织红细胞分析，为临床及科研提供白细胞系统15项，红细胞系统7项，血小板系统4项。网织红细胞系统3项等多项参数。     

绒山羊和绵羊源东毕吸虫ITS rDNA的PCR扩增及序列分析

目的扩增绒山羊和绵羊源东毕吸虫的ITS rDNA序列并进行分析比较。方法运用PCR方法,以保守引物BD1和BD2扩增从黑龙江绒山羊和绵羊体内分离的东毕吸虫（Oriemobilharzia spp．）rDNA的内转录间隔区（ITS-1及ITS-2）。PCR产物经测序后进行序列分析。结果黑龙江绒山羊和绵羊东毕吸虫的ITS序列总长均为875bp,其中ITS-1序列长为384Up,5．8S序列长为159Up,ITS-2序列长为332Up。黑龙江绒山羊和绵羊东毕吸虫的ITS序列相似性为99．9％,只有一个碱基差异,存在于ITS-2序列中。结论本研究在国际上首次报道了绒山羊和绵羊东毕吸虫的ITS序列,证实绒山羊和绵羊源东毕吸虫代表同一个种。这些结果为东毕吸虫分子生物学的进一步研究奠定了基础,并为寄生虫分子系统学研究提供了新资料。     

人子宫内膜细胞原代培养方法的改良

目的 寻求一种简便高效的人子宫内膜上皮细胞和间质细胞分离、纯化与鉴定方法,建立稳定的子宫内膜细胞体外培养体系.方法 简化Ryan等的子宫内膜细胞原代培养方法的取材,分离和培养条件,分离出高纯度的子宫内膜上皮细胞和间质细胞进行体外培养和传代.结果 培养成功的子宫内膜上皮细胞与间质细胞均可稳定传代,体外生长10～50 d,纯度均达90%以上.结论 该方法简便高效,可建立稳定的人子宫内膜细胞体外培养体系.     

小鼠微小RNA miR-22真核表达载体的构建及功能初步研究

目的 从基因组DNA扩增miR-22前体对应的基因组片段并克隆到pIRES2-EGFP,构建miR-22的真核表达载体.方法 利用PCR技术从基因组DNA扩增miR-22前体对应的基因组片段,克隆到质粒pUCm-T,测序正确后构建到真核表达载体pIRES2-EGFP中,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后1.5%琼脂糖凝胶电泳鉴定,并进行序列测定.脂质体Lipofectamin 2000法转染Hela细胞后G418筛选获得稳定转染克隆,提取总RNA,通过RT-PCR方法对neo片段进行鉴定,采用Northern blot技术检测miR-22的表达.结果 PCR扩增得到的334 bp片段与预期的miR-22前体对应的基因组片段序列一致;成功构建了真核表达载体pIRES2-EGFP/miR-22,测序结果正确.重组质粒转染Hela细胞后,经G418筛选成功获得阳性克隆.Northern blot分析显示miR-22在Hela细胞内高效表达.结论 本实验成功克隆了miR-22的前体对应的基因组片段,构建其真核表达载体,并在Hela细胞内获得高表达,为深入研究微小RNA miR-22的功能奠定了基础.