人成釉蛋白抗体的制备及组织表达特异性

目的:制备抗人成釉蛋白抗体,观察成釉蛋白在各组织中的表达。方法:实验于2002-03在解放军第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室完成。以重组、纯化的成釉蛋白C端肽为抗原,混入完全/不完全弗氏佐剂,免疫新西兰大白兔,经5次免疫后,颈动脉取血,分离血清并用饱和硫酸铵纯化,制备兔抗人成釉蛋白多克隆抗体,用双向免疫扩散试验和ELISA检测抗体的效价。用WesternBlot检测人成釉蛋白的组织表达特异性。结果:①ELISA检测结果:表明兔抗人成釉蛋白多克隆抗体效价达到1∶10000。②WesternBlot显示:成釉蛋白在人牙胚组织总蛋白中有特异性表达,相对分子质量约为65000,在脑、心、肝、脾、肺、肾、胰腺、胸腺、骨骼肌等组织中未见表达条带。结论:制备了抗人成釉蛋白抗体,为研究成釉蛋白在人牙胚中的组织表达以及利用抗体纯化蛋白提供了基础,从蛋白水平证实成釉蛋白为牙胚组织特异性蛋白,并证实人牙胚组织中的成釉蛋白相对分子质量约为65000。     

延边朝鲜族新生儿血红蛋白Gγ/(Gγ+Aγ)比值测定

目的:血红蛋白γ链包括Gγ和Aγ,基因图谱分析发现新生儿常有γ链基因的异常。实验测定延边朝鲜族新生儿血红蛋白Gγ/(Gγ Aγ)比值,对于研究人类遗传变异和基因调节具有重要意义。方法:实验于2005-12/2007-04在延边大学医学部基础医学院生物化学与分子生物学教研室完成。①材料来源:97例朝鲜族新生儿脐带血由延边大学医院妇产科产室提供,产妇均签署知情同意书。②实验方法:新生儿脐带血取样后立即冷冻于液氮之中,EDTA-Na2抗凝,进行血红蛋白解链,每500μL脐带血与0.9%的NaCl溶液1000μL相混合稀释,离心去上清,分离血红蛋白。用酸性聚丙烯酰胺以凝胶电泳法分离血红蛋白中的Gγ和Aγ肽链,电压200V,电泳50min,电泳方向为正极到负极。电泳后凝胶用丽春红2R染色,乙酸脱色致本底无色。用UVP扫描凝胶成像分析系统对凝胶板上的Gγ和Aγ肽链进行扫描定量,测定血红蛋白中Gγ/(Gγ Aγ)比值。结果:朝鲜族新生儿脐带血中的血红蛋白Gγ/(Gγ Aγ)比值分布情况:1例处于30%～48%低Gγ区,占总例数的1.03%,平均值27.60%;96例处于50%～79%中间区,占总例数的98.97%,平均值(68.40±2.90)%,明显低于相关文献报道的新疆维吾尔族、广西壮族、北京市汉族、西藏藏族新生儿Gγ/(Gγ Aγ)的整体均值(75.4±2.50)%,差异有显著性意义(P<0.05);未发现>80%高Gγ区者。结论:延边朝鲜族新生儿血红蛋白Gγ/(Gγ Aγ)比值多分布于50%～79%中间区,其平均值与其他民族比较相对较低。