NNMT基因启动子双荧光素酶报告系统的构建及其与SND1靶向关系的验证

目的:构建尼克酰胺-N-甲基转移酶（NNMT）启动子区的双荧光素酶报告质粒并检测其活性,从而验证SND1蛋白对NNMT基因的调控作用。方法:根据NNMT基因启动子区上、下游-1 500至+200区间的序列设计引物,并以HepG2细胞提取的RNA逆转录得到cDNA为模板进行PCR扩增,得到的NNMT启动子区片段经酶切后连接到双荧光素报告载体GLuc-ONTM启动子报告克隆中,得到Gluc-NNMT 启动子重组质粒,分别与pLVX-IRES-Puro-Flag-SND1质粒和pLVX-IRES-Puro-vector质粒共同转染HeLa细胞,并检测启动子活性。然后用免疫共沉淀的方法验证NNMT蛋白是否与SND1蛋白之间存在相互作用。结果:重组质粒构建成功。双荧光素酶活性实验显示,共转染Gluc-NNMT启动子重组质粒和pLVX-IRES-Puro-Flag-SND1过表达质粒的实验组与对照组相比,NNMT启动子区活性明显增强。结合免疫共沉淀实验结果,证明NNMT与SND1存在相互作用。结论:成功构建了NNMT启动子双荧光素酶报告质粒,SND1对NNMT启动子活性有增强作用,SND1与NNMT蛋白之间存在相互作用。     

免疫效应细胞增殖与细胞毒性功能检测3种方法的比较

目的：对比研究用于检测免疫效应细胞增殖与细胞毒功能的方法。方法：分别采用CCK?8法、EdU标记法、CFSE标记法检测不同培养条件下NK92细胞增殖［组1：100 U/mL白细胞介素（interleukin,IL）?2;组2：100 U/mL IL?2+10 U/mL IL?15］。用乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）释放法、活细胞染料双标流式法、荧光素酶法检测两组NK92对K562细胞的杀伤。结果：CCK?8法检测结果提示组2增殖能力强于组1,但差异无统计学意义（P＞0.05）,而EdU和CFSE标记法均提示两组间增殖能力有显著差异（P＜0.05）。活细胞染料双标流式法与荧光素酶法均能够检测出不同效靶比下两组NK92细胞毒功能的差异（P＜0.05）,LDH释放法在低效靶比下未检测出两组细胞毒性的差异（P＞0.05）。以双标流式法的检测值为标准参照,荧光素酶法和LDH释放法的检测值与其呈显著相关性（rS=0.979 4,P＜0.001;rS=0.973 2,P＜0.001）。结论：CCK?8法更侧重于检测代谢活性,EdU和CFSE标记法更适用于悬浮类免疫细胞的增殖检测。3种细胞毒功能检测具有一致性,活细胞染料双标流式法适合检测对悬浮类靶细胞的杀伤,荧光素酶法比LDH释放法更适用于检测对贴壁细胞的杀伤作用。     

产前应用地塞米松促胎肺成熟对先兆早产孕妇血糖的影响研究

背景　早产是一种严重而常见的妊娠并发症,早产儿因身体各系统器官发育不成熟而存活率低,会造成沉重的家庭社会负担。产前使用糖皮质激素是国际公认的促胎肺成熟、使新生儿获益的标准措施,但地塞米松的治疗对母体血糖有一定的不良影响,且母体血糖随地塞米松血药浓度峰值变化的机制尚不清楚。目的　探究产前应用地塞米松促胎肺成熟对先兆早产孕妇血糖的影响。方法　选取2018年10月-2020年2月佛山市妇幼保健院收治的因先兆早产需住院行地塞米松促胎肺成熟治疗且符合纳入标准的63例孕妇为研究对象,根据孕24~28周的口服葡萄糖耐量试验（OGTT）结果分为妊娠期糖尿病（GDM）组和非GDM组。两组孕妇入院后均接受统一的促胎肺成熟方案：地塞米松肌肉注射,6 mg/次,1次/12 h,共4次。使用美敦力MINIMED动态血糖监测系统监测两组孕妇每次注射地塞米松前1 h和注射后3 h的血糖。比较两组孕妇第1、2、3、4次地塞米松注射前1 h和注射后3 h血糖,4次地塞米松注射后血药浓度峰值前后1 h血糖,并绘制相应的血糖随时间变化趋势图。结果　最终完成研究55例,其中GDM组16例,非GDM组39例。GDM组和非GDM组孕妇第1、2、3、4次地塞米松注射前1 h和注射后3 h血糖比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。GDM组孕妇第2、3、4次地塞米松注射前1 h血糖均高于第1次（P<0.05）;GDM组孕妇第1、2、3、4次地塞米松注射后3 h血糖比较,差异无统计学意义（P>0.05）。非GDM组孕妇第2、3次地塞米松注射前1 h血糖均高于第1次（P<0.05）;非GDM组孕妇第2、3、4次地塞米松注射后3 h血糖均高于第1次（P<0.05）。GDM组与非GDM组孕妇第1、2、3、4次地塞米松注射后血药浓度峰值前后1 h血糖比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。接受地塞米松注射后3 h内,非GDM孕妇血糖均在参考范围内波动,无明显规律趋势;GDM组孕妇血糖波动范围较大,且4次地塞米松注射120 min后血糖逐渐升高。结论　单胎孕妇注射地塞米松2 h内,其血糖可能不受地塞米松血药浓度峰值影响;地塞米松升高血糖的作用时间是在注射后3 h,4次地塞米松注射对血糖的升高无累积效应。接受地塞米松注射后3 h内,非GDM孕妇血糖均在参考范围内波动,无明显规律趋势;GDM组孕妇血糖波动范围较大,且4次地塞米松注射120 min后血糖逐渐升高。     

成人社区获得性肺炎合并呼吸道病毒感染住院患者病毒谱及临床特征分析

背景　成人社区获得性肺炎（CAP）合并呼吸道病毒感染与单纯CAP在临床治疗上是否存在差异尚不清楚。本研究拟从分析CAP合并呼吸道病毒感染病毒谱和临床特征与单纯CAP的差异来探讨此问题。目的　分析成人CAP合并呼吸道病毒感染患者的病毒谱特点及其临床特征。方法　选取2017年6月-2019年5月复旦大学附属上海市第五人民医院住院部收治的CAP患者223例,采集CAP患者的咽拭子,应用多重巢式反转录酶-聚合酶链式反应（nested multiplex RT-PCR）检测8种（10型）常见的呼吸道病毒。将CAP患者分为病毒阳性组和病毒阴性组,分析病毒阳性组CAP患者的临床特征。同时,采集病毒阳性、病毒阴性CAP患者及社区健康对照者的血清各24份,采用ELISA检测血清中白介素（IL）-6、IL-8、IL-10、干扰素（INF）-γ、干扰素诱导蛋白（IP）-10、肿瘤坏死因子（TNF）-α的浓度。结果　223例CAP患者中61例（27.35%）患者病毒检测阳性,其中单病毒感染58例（26.01%）,多病毒感染3例。单病毒感染包括22例（9.87%）流感病毒A（Flu A）、14例（6.28%）鼻病毒（RhV）、9例（4.03%）流感病毒B（Flu B）、5例（2.24%）腺病毒（ADV）、2例（0.90%）冠状病毒（CoV）、2例（0.90%）呼吸道合胞病毒A（RSVA）、2例（0.90%）偏肺病毒（MPV）、1例（0.45%）博卡病毒（BoV）、1例（0.45%）呼吸道合胞体病毒B型（RSVB）。根据年龄分为非老年（≤65岁）组和老年（>65岁）组,两组病毒检出率比较,差异无统计学意义（P>0.05）。CAP患者四季均会有病毒感染,冬季为高发季节,感染病毒主要有Flu A、RhV、Flu B。按照呼吸道病毒检测结果分为病毒阳性组和阴性组,病毒阳性组死亡率高于阴性组,差异有统计学意义（P<0.05）,其中病毒阳性组死亡患者均为合并流感病毒感染。进一步将呼吸道病毒阳性组分为流感组（包括Flu A和Flu B）和非流感组,发现流感组乳酸脱氢酶水平高于非流感组,流感组死亡率高于病毒阴性组（P<0.05）。影像学特征分析结果显示,病毒阳性组双肺病变、多肺叶病变、斑片状渗出影比例高于病毒阴性组,差异均有统计学意义（P<0.05）。血清细胞因子水平分析结果显示,病毒阳性组IL-10水平高于病毒阴性组。结论　上海闵行地区CAP患者合并呼吸道病毒感染较为常见,检出病毒以Flu A、RhV和Flu B为主,其临床特征无明显差异,合并流感病毒感染可能会导致死亡率增加,病毒阳性患者影像学多表现为双肺病变、多肺叶病变、斑片状渗出影,病毒阳性患者IL-10血清浓度明显升高,以上结果对于CAP合并呼吸道病毒感染有一定的参考价值。     

加味桔梗杏仁煎治疗肺气郁闭型新型冠状病毒疑似病例疗效观察

目的:回顾性分析加味桔梗杏仁煎对肺气郁闭型新型冠状病毒肺炎疑似病例的肺部病变的临床疗效.方法:采集2020年1月28日—2020年2月28日本院收治的34例疑似新型冠状病毒肺炎辨证为肺气郁闭的患者,随机分为对照组和观察组各17例.对照组采用常规西药对症治疗,观察组在对照组基础上口服加味桔梗杏仁煎中药颗粒剂,1剂/d,分2次服.两组疗程均为14d.统计比较两组患者临床症状、胸部CT、血常规及肝肾功能情况.结果:治疗后,舌苔好转情况观察组优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);胸部CT 14 d肺病灶吸收率观察组为70.6％,对照组为41.5％,两组差异有统计学意义(P<0.05).两组血常规、肝肾功能均无明显异常.结论:在常规西药治疗基础上加用中药加味桔梗杏仁煎颗粒剂治疗病毒性肺炎,可促进肺部炎症的吸收,缩短病程,无明显不良反应发生,值得临床推广.     

张小萍从脏腑论治溃疡性结肠炎

张小萍认为溃疡性结肠炎是因脾失健运,导致水湿运化失司,湿邪蕴结肠道,气血壅滞,日久而成.脾胃虚弱为基本病因,涉及肝、肺、肾等多个脏腑,故治疗上以健脾祛湿为基本原则,同时根据辨证论治的不同辅以疏肝、温肾、补肺等治疗方法,临床治疗效果明显.     

益气养阴散结方联合左旋甲状腺素治疗甲状腺癌术后患者疗效及对β2-MG和免疫功能的影响

目的:探讨益气养阴散结方联合左旋甲状腺素治疗甲状腺癌术后患者疗效及对β2-微球蛋白(β2-MG)和免疫功能的影响.方法:选取2017年2月—2021年2月我院行甲状腺癌术的80例患者作为研究对象,采取随机数字表法分为两组,各40例.对照组予以对症和左旋甲状腺素治疗,观察组在对照组基础上予以益气养阴散结方治疗,治疗后比较两组患者的β2-MG、免疫功能指标、并发症发生率、治疗总有效率.结果:两组患者治疗后与治疗前比较,β2-MG水平均下降,CD3+、CD4+水平均上升(P<0.05),且观察组均优于对照组(P<0.05);观察组治疗后并发症发生率低于对照组(P<0.05);观察组治疗总有效率高于对照组(P<0.05).结论:益气养阴散结方联合左旋甲状腺素治疗甲状腺癌术后患者的疗效较佳,可明显改善β2-MG水平、提高免疫功能、降低并发症,值得推广.     

深圳地区女性感染人乳头瘤病毒基因类型分析

目的了解深圳地区各年龄段与不同生殖道疾病女性感染人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)基因类型分布状况,为深圳地区HPV分子流行病学研究提供依据。方法利用反向杂交技术分别对2005年1月~2005年12月来医院就诊的801例可疑患者进行23种HPV基因亚型检测,其中包括18种高危亚型(HPV16,18,31,33,35,39,45,51,52,53,56,58,59,66,68,73,83,MM4)及5种低危亚型(HPV6,11,42,43,44)。结果HPV阳性检出率为17.5%(140/801),其中高、低危型检出率分别为16.9%(135/801)与2.6%(21/801),高危型中主要为HPV16,58感染,低危型中主要为HPV11感染。不同生殖道疾病(宫颈炎性病变、尖锐湿疣、宫颈上皮内瘤变(≥CIN))与正常对照组比较差异有显著性意义(P<0.05)。20~30 y,31~40 y,40~50 y和>50 y各年龄组中HPV阳性的比率为32%,38.5%,22.4%和7.1%。结论HPV11,16,58是深圳地区HPV感染的主要型别,20~50 y为感染的高峰人群,对HPV阳性者进行定期的跟踪,是防治尖锐湿疣与宫颈癌的重点。     

支撑喉镜电视内镜下低温等离子射频治疗会厌囊肿的疗效研究

目的探讨支撑喉镜电视内镜下低温等离子射频治疗会厌囊肿的疗效及其对术后近期复发率的影响。方法选取因会厌囊肿拟行择期手术患者116例,以患者收治顺序分为观察组与对照组,每组各58例。对照组采用传统手术切除,观察组在支撑喉镜电视内镜下行低温等离子射频消融治疗。比较两组围手术期情况,术前及术后7d会厌囊肿评分,病理类型以及并发症,随访12个月观察复发情况。结果两组均一次手术成功,新生物切除干净;观察组手术时间、术中及术后出血量均少于对照组(P0.05或P0.01)。观察组和对照组患者术前厌囊肿评分为5.5±1.0和5.4±1.2,两组患者比较无统计学差异(P0.05),术后7d两组会厌囊肿评分术后分别为0.6±0.2及1.8±0.5,两组评分与术前比较均显著降低(P0.01),且观察组术后会厌囊肿评分低于对照组(P0.05)。病理类型主要为粘液囊肿、表皮样囊肿,差异无统计学意义(P0.05)。除观察组2例、对照组3例患者有轻微异物感外,未见其他并发症。术后1年,观察组与对照组复发率分别为1.72%(1/58)和8.62%(5/58),差异具有统计学意义(P0.05)。结论经支撑喉镜电视内镜下低温等离子射频治疗会厌囊肿具有较好的临床疗效,术中能精确切割病变组织,且无热效应损伤周围组织,术中出血量少,术后恢复迅速,且近期复发率较低,是一种安全、有效的微创治疗方法。