全文获取类型
收费全文 | 73962篇 |
免费 | 7421篇 |
国内免费 | 3860篇 |
专业分类
耳鼻咽喉 | 506篇 |
儿科学 | 1358篇 |
妇产科学 | 392篇 |
基础医学 | 4227篇 |
口腔科学 | 1329篇 |
临床医学 | 9261篇 |
内科学 | 5943篇 |
皮肤病学 | 820篇 |
神经病学 | 1158篇 |
特种医学 | 2820篇 |
外国民族医学 | 1篇 |
外科学 | 6382篇 |
综合类 | 21043篇 |
现状与发展 | 15篇 |
预防医学 | 9528篇 |
眼科学 | 612篇 |
药学 | 9149篇 |
85篇 | |
中国医学 | 7500篇 |
肿瘤学 | 3114篇 |
出版年
2024年 | 424篇 |
2023年 | 943篇 |
2022年 | 2427篇 |
2021年 | 3078篇 |
2020年 | 2535篇 |
2019年 | 1432篇 |
2018年 | 1528篇 |
2017年 | 2031篇 |
2016年 | 1559篇 |
2015年 | 3008篇 |
2014年 | 3851篇 |
2013年 | 4740篇 |
2012年 | 6864篇 |
2011年 | 7102篇 |
2010年 | 6704篇 |
2009年 | 5912篇 |
2008年 | 6061篇 |
2007年 | 5627篇 |
2006年 | 4976篇 |
2005年 | 4015篇 |
2004年 | 2787篇 |
2003年 | 2173篇 |
2002年 | 1668篇 |
2001年 | 1562篇 |
2000年 | 1144篇 |
1999年 | 394篇 |
1998年 | 95篇 |
1997年 | 100篇 |
1996年 | 91篇 |
1995年 | 65篇 |
1994年 | 71篇 |
1993年 | 35篇 |
1992年 | 15篇 |
1991年 | 26篇 |
1990年 | 28篇 |
1989年 | 28篇 |
1988年 | 17篇 |
1987年 | 28篇 |
1986年 | 17篇 |
1985年 | 23篇 |
1984年 | 10篇 |
1983年 | 15篇 |
1982年 | 8篇 |
1980年 | 7篇 |
1978年 | 3篇 |
1977年 | 2篇 |
1976年 | 3篇 |
1975年 | 3篇 |
1964年 | 2篇 |
1962年 | 2篇 |
排序方式: 共有10000条查询结果,搜索用时 15 毫秒
991.
目的:构建DEK基因的RNA干扰( RNAi)慢病毒表达载体,并对其生物学功能进行初步检测。方法采用RNAi技术,根据DEK基因的序列,确定其有效靶序列,合成DEK基因的Oligo DNA,退火形成双链DNA,将其克隆到经BamHⅠ与EcoRⅠ酶切后的小干扰RNA( siRNA)表达载体PSIH-H1上,产生PSIH-H1-DEK慢病毒载体,筛选阳性克隆并测序鉴定。与3个包装质粒共转染293T细胞,包装成慢病毒后感染乳腺癌细胞ZR75-1,经嘌呤霉素( puromycin,puro)筛选2周后,收集部分细胞利用实时聚合酶链反应( real time-PCR,RT-PCR)和Western印迹分别检验DEK在信使RNA ( mRNA )和蛋白水平的敲低效果,并通过细胞生长实验检测DEK对人乳腺癌细胞系ZR75-1细胞生长的影响。结果 PCR和DNA测序结果证实,DEK siRNA慢病毒表达载体PSIH-H1-DEK构建成功。 RT-PCR和Western印迹结果显示,构建的DEK siRNA可有效抑制DEK基因的表达,并由此建立了敲低DEK的稳定克隆。生长曲线实验表明, DEK siRNA可抑制人乳腺癌细胞系ZR75-1细胞的生长。结论成功构建了DEK基因的RNAi慢病毒表达载体,感染人乳腺癌细胞系ZR75-1细胞后,有效沉默了ZR75-1细胞中的DEK基因的表达,为进一步研究DEK基因在乳腺癌中的作用奠定基础。 相似文献
992.
目的观察选择性光刺激NG2细胞对海马神经元内Ca2+活性和电活动的影响,并初步探讨可能的作用机制。方法体外纯化培养新生SD大鼠NG2细胞,通过脂质体转染的方法,在NG2细胞中特异性表达光敏感通道(channelrhodopsin-2,ChR2)蛋白DNA,并与体外培养7 d的海马神经元共培养48 h,采用蓝光(470 nm、5 s、5 mW/cm2)选择性刺激表达ChR2蛋白的NG2细胞,利用Ca2+成像和电生理的方法记录NG2细胞周围海马神经元中的Ca2+浓度变化和电流改变情况,同时比较加入/未加入γ-氨基丁酸A型受体抑制剂情况下神经元的电流变化特点。结果当蓝光刺激表达ChR2蛋白的NG2细胞后,首先NG2细胞内的Ca2+信号增强,随后其周围海马神经元内的Ca2+升高约20%;Ca2+缓慢下降后再次出现一个Ca2+峰,幅度较第1次小;NG2细胞周围海马神经元的电流频率增加,振幅增大。而当预先在细胞外液中加入50 μmol/L γ-氨基丁酸A受体抑制剂后,海马神经元的电流频率和振幅较未加抑制剂组明显减小(P<0.05)。结论选择性光刺激表达ChR2蛋白的NG2细胞可使其兴奋,且可能通过释放γ 氨基丁酸来调节神经元活动。 相似文献
993.
机器人手术系统于2007年首次应用于甲状腺手术,其整合了腔镜与传统开放手术的优点,进一步促进了甲状腺微创外科的发展。2014年,笔者单位首先在国内开展机器人甲状腺手术,并为3 200余例患者成功实施手术,截至2023年7月国内共完成11 931例机器人甲状腺手术。其美容效果明显优于传统开放手术,且常用入路的操作及肿瘤学安全性数据也随着开展数量及质量的提高而得到更新,为国内机器人甲状腺手术的开展,提供了经验指导。新技术的发展及临床应用,也同样促进了国产机器人的研发与实践。未来,将会有更多国产机器人投入临床,进一步降低手术成本,使其像腔镜技术一样得以在临床普及。在此,笔者对相关情况作一概述,以便国内同行进一步了解其在中国的发展和现状。 相似文献
994.
目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中磷酸化4E结合蛋白1(p-4EBP1)表达及其与根治术后复发的关系。方法:选取本院2020年1月—2021年1月收治的111例行根治术的NSCLC患者,收集患者手术切除的肺癌组织和癌旁组织,采用免疫组化法检测肺癌组织及癌旁组织中p-4EBP1蛋白表达,比较不同临床病理特征NSCLC患者肺癌组织p-4EBP1蛋白表达情况。随访统计NSCLC患者术后1年复发情况,对比复发组(20例)和未复发组(91例)肺癌组织p-4EBP1蛋白表达,并采用多因素Cox回归模型分析NSCLC根治术后复发的影响因素。结果:肺癌组织p-4EBP1蛋白阳性表达率高于癌旁组织(70.27%vs 16.22%,P <0.05);临床分期Ⅲa期、低分化、淋巴结转移患者肺癌组织p-4EBP1蛋白阳性表达率分别高于临床分期Ⅰ/Ⅱ期、中高分化、无淋巴结转移患者(P <0.05);术后1年,111例患者的复发率为18.02%(20/111),复发组肺癌组织p-4EBP1蛋白阳性表达率高于未复发组(90.00%vs 65.93%,P <0.05);复发组有吸烟史、临床分... 相似文献
995.
【摘要】 目的:建立并评价小鼠髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)体外衰老模型。方法:取8周龄C57BL/6雄性小鼠,体外分离培养小鼠NPCs,并采用细胞免疫荧光(immunofluorescence,IF)检测NPCs标志蛋白聚集蛋白聚糖(aggrecan)的表达进行细胞鉴定。取不同浓度(0μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、300μmol/L、400μmol/L、500μmol/L)的叔丁基过氧化氢(tert-Butyl hydroperoxide,TBHP)干预NPCs,采用CCK8法检测干预2h、4h后的细胞活性,筛选TBHP的最佳干预浓度及时间。应用最佳干预浓度TBHP、最佳干预时间干预P1代NPCs后换成完全培养基继续培养24h、48h、72h,采用衰老相关β半乳糖苷酶染色(senescence-associated β-galactosidase staining,SA-β-gal)检测各时间点的衰老NPCs阳性率,观察不同时间点NPCs的衰老变化。将P2代NPCs分为对照组和模型组,对照组在完全培养基中培养,模型组加入最佳干预浓度TBHP干预最佳时间干预后换成完全培养基培养,采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测两组细胞衰老相关基因p53、p21、p16以及Aggrecan、Ⅱ型胶原蛋白(collagen Ⅱ)、含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶-5(a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs-5,ADAMTS-5)、基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)、基质金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinase-13,MMP-13)mRNA表达,免疫印迹法(Western blot,WB)检测Aggrecan、Collagen Ⅱ、MMP-3、MMP-13、p53、p21蛋白表达水平。结果:分离培养的细胞高表达Aggrecan,为NPCs。TBHP最佳干预浓度为100μmol/L,最佳干预时间为4h。在100μmol/L TBHP干预4h后培养24h、48h、72h,NPCs的SA-β-gal染色阳性率均显著性增加(P<0.05),三个时间点间无统计学差异(P>0.05),后续模型组加入最佳干预浓度TBHP干预最佳时间干预后换成完全培养基培养24h,对照组培养相同时间。RT-qPCR检测模型组p53、p21、p16、MMP-3、MMP-13、ADAMTS-5 mRNA表达较对照组显著性升高(P<0.05),Aggrecan、Collagen Ⅱ mRNA表达较对照组显著性降低(P<0.05);WB检测模型组MMP-3、MMP-13、p53、p21蛋白表达较对照组显著性升高(P<0.05),Aggrecan、Collagen Ⅱ蛋白表达较对照组显著性降低(P<0.05)。结论:采用TBHP诱导能成功构建小鼠NPCs体外衰老模型,可为椎间盘退行性变的发病机制研究提供良好的研究样本。 相似文献
996.
目的:探讨亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR) 基因C677T 突变在急性肠系膜静脉血栓形成(AMVT)发病中的意义。 方法:采用高效液相色谱法测定63例AMVT患者和128名健康对照者血浆的同型半胱氨酸(Hcy)水平, 放射免疫法测定血浆叶酸浓度;应用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性方法进行MTHFR C677T 基因多态性分析, 并进行基因型及等位基因频率的计数。 结果:AMVT组和对照组血浆Hcy水平分别为(23.5±8.8) μmol/L和(12.7±6.9) μmol/L, 差异有统计学意义(P<0.01)。Hcy水平与叶酸呈负相关(AMVT组:r=-0.42, P<0.01;对照组:r=-0.39, P<0.01)。MTHFR C677T TT基因型在AMVT组的分布频率为33.3 %, 高于对照组的17.2 %, 差异有统计学意义(χ2=6.31, P<0.05)。结论:血浆Hcy水平升高是AMVT形成的危险因素之一。MTHFR C677T多态性中TT基因型可能是AMVT形成的一个重要遗传风险因子。 相似文献
997.
何汇海 《国际泌尿系统杂志》2008,28(5)
眼镜蛇毒膜毒素(membrane toxin,MT)是从蛇毒粗毒中分离出的一种膜活性多肽,是一种碱性蛋白,其毒性主要是通过破坏细胞膜而实现,故被称为膜毒素 (membrane toxin,MT).其化学成分非常复杂,含有多种蛋白质、多肽、酶类和其他小分子物质,具有广泛的生物学活性,可作为天然的药用资源.MT具有抗炎、治疗神经系统和心脑血管疾病、凝血和抗凝血、调控机体免疫反应、镇痛和抗肿瘤的作用.现就其抗肿瘤方面的研究进展作一综述. 相似文献
998.
999.
血管内皮生长因子受体启动子驱动双自杀基因联合survivin反义寡核苷酸对结直肠癌细胞及血管内皮细胞的特异性杀伤作用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的探讨腺病毒介导血管内皮生长因子受体(KDR)启动子驱动的CDglyTK融合基因(AdKDR-CDsbrTK)体系联合survivin反义寡核苷酸(ASODN)对结直肠癌细胞(sw620)及血管内皮细胞(ECV304)的特异性杀伤作用。方法将质粒pAdEasy—KDR-CDglyTK在293细胞内包装、扩增产生重组腺病毒。体外感染表达KDR的SW620、ECV304细胞株,同时用survivin ASODN转染同一细胞株,观察腺病毒的感染效率和ASODN的转染情况。应用RT.PCR和Western印迹检测CDglyTK和survivin基因的表达.MTT法测定两者联合应用对细胞株的杀伤效应和旁观者效应。结果survivin ASODN可转染重组腺病毒感染的细胞,并且两者的转染及感染效率无明显变化。CDglyTK可在SW620、ECV304细胞株高效表达。survivin ASODN可明显降低survivin蛋白表达。各基因治疗组细胞存活率明显低于阴性对照组(P〈0.001)。survivinASODN与AdKDR—CDglyTK基因联用后。随着前药浓度的增加,细胞存活率迅速下降,两者联合作用与单一基因作用相比,差异具有统计学意义(P〈0.05)。但在GCV100μg/ml、5-FC 2000μg/ml时,联合基因治疗组细胞存活率略低于单用AdKDR-CDglyTK,两者间差异无统计学意义(P〉0.05)。Survivin ASODN和AdKDR—CDglyTK联合作用,在前药浓度较低时表现为协同效应,并具有更明显的旁观者效应。结论KDR启动子调控的AdKDR-cDglyTK体系和survivin ASODN基因联合,较单一基因具有更强的特异性杀伤结直肠癌细胞及血管内皮细胞的作用。 相似文献
1000.
目的 探讨聚丙烯酰胺水凝胶注射隆乳术后哺乳期并发症处理的有效方法.方法 对13例行聚丙烯酰胺水凝胶注射隆乳术后在哺乳期并发乳汁淤积、乳漏、急性乳腺炎等患者,采取手术切开清除水凝胶及淤积乳汁、放置引流管、术区加压包扎,并结合有效的药物抑制泌乳等措施予以治疗.结果 13例术后7~15 d全部治愈.随访3个月至4年,效果满意.结论 切开清除水凝胶及淤积乳汁、持续引流,结合有效的药物抑制泌乳措施,是治疗注射隆乳术后哺乳期并发症的有效方法. 相似文献