Macrophage polarization in response to wear particles in vitro

Total joint replacement is a highly successful surgical procedure for treatment of patients with disabling arthritis and joint dysfunction. However, over time, with high levels of activity and usage of the joint, implant wear particles are generated from the articulating surfaces. These wear particles can lead to activation of an inflammatory reaction, and subsequent bone resorption around the implant （periprosthetic osteolysis）. Cells of the monocyte/macrophage lineage orchestrate this chronic inflammatory response, which is dominated by a pro-inflammatory （M 1） macrophage phenotype rather than an anti-inflammatory pro-tissue healing （M2） macrophage phenotype. While it has been shown that interleukin-4 （IL-4） selectively polarizes macrophages towards an M2 anti-inflammatory phenotype which promotes bone healing, rather than inflammation, little is known about the time course in which this occurs or conditions in which repolarization through I L-4 is most effective. The goal of this work was to study the time course of murine macrophage polarization and cytokine release in response to challenge with combinations of polymethyl methacrylate （PMMA） particles, lipopolysaccharide （LPS） and IL-4 in vitro. Treatment of particle-challenged monocyte/macrophages with IL-4 led to an initial suppression of pro-inflammatory cytokines and inducible nitric oxide synthase （iNOS） production and subsequent polarization into an M2 anti-inflammatory phenotype. This result was optimized when IL-4 was delivered before PMMA particle challenge, to an M 1 phenotype rather than to uncommitted （MO） macrophages. The effects of this polarization were sustained over a 5-day time course. Polarization of M1 macrophages into an M2 phenotype may be a strategy to mitigate wear particle associated periprosthetic osteolysis.     

新型化合物FLZ抑制血管性痴呆模型大鼠脑内低氧诱导因子过表达

目的研究新型化合物FLZ对暂时性大脑中动脉阻断(tMCAO)局部脑缺血再灌注致血管性痴呆模型大鼠学习记忆能力的作用,及对低氧诱导因子(HIF-1α)表达的影响。方法用tMCAO缺血2 h再灌致痴呆模型大鼠,30 d后用Morris水迷宫实验检测学习记忆能力。用TTC染色检测脑梗死体积;HE染色检测皮质、海马病理学改变。此外,大鼠tMCAO缺血2 h再灌24 h后,用Western blot法检测HIF-1α表达。结果 FLZ明显缩短tMCAO大鼠在Mor-ris水迷宫中的逃避潜伏期,显著减小脑梗死体积和减轻皮质、海马的病理学改变。FLZ显著抑制缺血2 h时HIF-1α过度表达。结论 FLZ可以显著改善tMCAO诱导的大鼠学习记忆功能障碍,抑制皮质HIF-1α过度表达和神经保护作用可能是其作用机制之一。     

卵巢浆液性肿瘤中MCM4与Ki-67的表达及意义

目的 探讨微小染色体维持蛋白4(minichromosome maintenance proteins 4,MCM4)、Ki-67在卵巢浆液性肿瘤中的表达及意义.方法 采用免疫组化EliVision两步法检测MCM4、Ki-67蛋白在10例正常卵巢上皮组织(对照组)、19例卵巢良性浆液性嚢腺瘤、16例交界性浆液性肿瘤和43例浆液性腺癌中的表达.结果 MCM4在对照组、卵巢良性浆液性囊腺瘤、交界性浆液性肿瘤、浆液性腺癌的阳性表达率分别为10.00%、21.05%、43.75%、79.07%,Ki-67在对照组、卵巢浆液性乳头状腺瘤、交界性嚢腺瘤、浆液性腺癌的阳性表达率分别为10.00%、15.79%、25.00%、53.49%,其随着卵巢肿瘤病变的升级呈增高的趋势.MCM4在卵巢浆液性腺癌和交界性浆液性肿瘤中的表达与正常对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05).Ki-67在卵巢浆液性癌和交界性浆液性肿瘤中的表达与正常对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05).MCM4在卵巢浆液性癌中的表达与临床分期、病理分级及转移[淋巴结转移和(或)器官转移]有明显相关(P<0.05).Ki-67蛋白在卵巢浆液性癌中的表达与病理分级及淋巴结转移有明显相关(P<0.05),MCM4和Ki-67呈正相关.结论 MCM4、Ki-67为卵巢浆液性肿瘤的增殖指标,用于卵巢良、恶性肿瘤的鉴别和诊断,并可初步评估肿瘤预后,指导临床治疗.     

VEGF基因特异性siRNA转染后对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨利用干扰RNA（RNAi）抑制血管内皮生长因子（VEGF）基因表达对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响。方法：设计针对VEGF基因的小干扰RNA（siRNA）,合成DNA模板,体外转录siRNA。以脂质体转染法将双链siRNA导入MCF-7细胞后,用MTT比色法检测siRNA对MCF-7细胞增殖的影响。通过Hoechst33258染色观察MCF-7细胞的凋亡。用流式细胞术检测细胞周期的改变,RT-PCR检测VEGF mRNA表达的变化,免疫细胞化学法检测VEGF蛋白的表达。结果：所设计的两个靶位点siRNA,均能有效地抑制MCF-7细胞的增殖,诱导细胞凋亡,使细胞周期阻滞于G0/G1期,VEGFmRNA及其蛋白的表达明显减少;而作为阴性对照的错义序列组siRNASCR则没有上述效应。结论：体外转录合成的siRNA可抑制MCF-7细胞中VEGF基因的表达,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。     

抗人CD40人-鼠嵌合抗体在CHO细胞中的表达及其功能研究

目的:实现抗人CD40的人-鼠嵌合抗体(ch-5C11)在的CHO细胞中的稳定表达并对其生物学活性进行初步的研究。方法:pIRES/hu5C11嵌合抗体重组表达质粒用脂质体法转染CHO细胞,采用RT-PCR对CHO细胞进行基因水平鉴定,以流式细胞术(FCM)和Western blot对表达上清中ch-5C11人免疫球蛋白Fc段和κ链成分进行检测,利用Protein G亲和层析和Lowry法进行纯化和定量,MTT实验检测表达ch-5C11对Daudi细胞增殖的抑制效应。结果:获得稳定分泌目的蛋白的CHO稳定株,RT-PCR结果表明目的基因成功整合在CHO稳定株中,FCM和Western blot结果表明稳定株上清中含有抗人CD40抗体,且含人免疫球蛋白Fc段和κ链;Lowry法定量ch-5C11浓度为0.535mg/L,并经SDS-PAGE蛋白电泳鉴定纯度良好;ch-5C11能抑制Daudi细胞增殖。结论:获得了持续分泌ch-5C11的CHO稳定株,功能学研究显示ch-5C11能抑制B细胞淋巴瘤细胞株体外增殖。     

损伤神经环境中小胶质细胞促进MSCs神经营养功能的信号传导通路初探

目的：观察损伤神经环境下,与小胶质细胞（BV2）共育后发挥神经营养功能的骨髓基质细胞（MSCs）内的信号传导。方法：采用原代细胞培养法培养骨髓基质细胞（MSCs）,以BV2和PC12细胞株分别代表小胶质细胞和神经细胞进行传代培养,应用转移筛网进行BV2与MSCs的共育,流式细胞术检测PC12凋亡,W estern blot检测磷酸化ERK、磷酸化STAT3、总ERK、总STAT3蛋白。结果：损伤神经环境及小胶质细胞同时存在时,其上清显著提高受损PC12存活率的MSCs中STAT3的激活显著增高,同对照组相比差异显著（P〈0.05）。此外,STAT3激活程度与受损PC12存活率相关性的统计学检验有显著性差异（P〈0.05）。结论：神经损伤环境下小胶质细胞促进MSCs神经营养功能的过程中有STAT3相关的信号传导通路的参与。     

连续性血液净化救治突发公共卫生事件致急危重症患者的临床研究

探讨连续性血液净化(CBP)救治时机对突发公共卫生事件致急危重症患者预后的影响.研究济南军区血液净化治疗中心采用CBP紧急救援89例突发公共卫生事件致危重病的临床资料,并根据患者接受CBP治疗距发病后的自然时间为“截点”,将患者分为:(1)A组(早期治疗)43例,于急性损伤期(发病≤24h)开始CBP治疗.(2)B组(...     

精子蛋白17抗体免疫磁性颗粒活性分析及细胞成像研究

目的:制备精子蛋白17(Sp17)抗体免疫磁性纳米颗粒, 以期用于卵巢癌的磁共振成像靶向诊断.方法:在偶联剂EDC/NHS作用下, 将壳聚糖修饰磁性氧化铁纳米颗粒与抗人Sp17抗体结合, 制备抗Sp17抗体免疫磁性纳米颗粒(IMNPs).透射电镜观察颗粒的形貌特征, 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳评价抗体与磁性颗粒的结合效果, ELISA检测免疫磁性颗粒的免疫活性.将IMNPs与转染人Sp17的卵巢癌HO-8910细胞共孵育, 进行体外磁共振成像检测.结果:成功实现了抗体与磁性纳米颗粒的偶联, 并且IMNPs保持良好的抗体活性.磁共振显示该颗粒成功靶向Sp17阳性的细胞, 没有发生明显的非特异吸附.结论:该免疫磁性纳米颗粒特异性良好, 可进一步用作卵巢癌的靶向治疗研究.     

猴表皮干细胞的分离和培养

目的： 探索猴表皮干细胞分离纯化和培养方法。 方法: 将猴皮肤标本剪成皮条,加入0.25％胰酶浸泡过夜；然后去除角质层，刮上皮面获取表皮细胞进行培养。取第2-4代的细胞,经消化后，用Ⅳ型胶原黏附法获得为快吸附的表皮细胞。对快吸附的表皮细胞行流式细胞仪、免疫组化和RT-PCR检测。 结果: 快吸附细胞从mRNA转录水平及蛋白表达水平均呈现表皮干细胞的特性：β1整合素、K15和α6整合素阳性，而CD71和K1/K10阴性。 结论: 所采用的分离纯化方法和培养条件适合猴表皮干细胞的分离纯化及生长。