干细胞共培养的方法及其分化诱导

目的:体细胞与干细胞共培养可以诱导干细胞向该种体细胞表型分化,文章就干细胞共培养的不同方法及其诱导分化的机制进行综述。资料来源:应用计算机检索PUBMED1990-01/2006-11期间的相关文章,检索词为"stem cells,coculture",并限定文章语言种类为English。同时计算机检索中国期刊全文数据库1990-01/2006-11期间的相关文章,检索词为"干细胞,共培养",并限定文章语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,并查看每篇文献后的引文。纳入标准:文章所述内容应与干细胞共培养分化诱导研究相关。排除标准:重复研究或Meta分析类文章。资料提炼:共收集到40篇相关文献,30篇文献符合纳入标准,排除的10篇文献为内容陈旧或重复。符合纳入标准的30篇文献中,分别涉及干细胞与体细胞共培养的不同方法、体细胞的旁分泌作用、细胞与细胞接触介导诱导以及干细胞与体细胞之间的缝隙连结诱导干细胞分化的可能机制。资料综合:干细胞可以通过特定的培养条件被诱导分化成具有不同表型的细胞,这为组织工程技术的应用提供了又一有效的种子细胞来源。用体细胞与干细胞共培养同样可以诱导干细胞向该种体细胞表型分化。干细胞与体细胞共培养的方法主要有六种,分别为单层共培养(monolayer co-culture)、分层渗透培养(transwells)、悬浮培养(suspension culture)、细胞团块培养(cell pellet)、细胞层培养(cell sheet)以及三维支架培养。干细胞分化的可能机制是体细胞通过分泌一些细胞因子,从而激活蛋白激酶,如PI3-激酶、促分裂原活化蛋白激酶、蛋白激酶C等,作用于相关的受体或抑制体,为干细胞的分化增殖提供了合适的环境。同时,有研究显示细胞与细胞接触反应是干细胞分化的独立机制。缝隙连接介导的细胞与细胞间反应也是干细胞分化中必需的。结论:干细胞与体细胞共培养诱导干细胞定向分化已经成为一种确实可行且非常有研究前景的方法,但共培养诱导分化的机制尚未完全明确。     

钛表面粗糙度对牙周韧带细胞早期附着的影响

目的:观察牙周韧带细胞在不同表面粗糙度的纯钛表面早期附着情况。方法:实验于2005-01/2006-07在赣南医学院科研中心完成。实验分组:24个纯钛片分别按100,280,400,800目水砂纸顺序打磨。根据对钛片处理方法的不同分为4组,每组样品6个。单纯机械处理组;单纯机械处理 酸处理组:单纯机械处理 65%硝酸(100℃,1h)处理;单纯机械处理 喷砂处理组:单纯机械处理 100μm的Al2O3喷砂处理;单纯机械处理 喷砂处理 酸处理组:单纯机械处理 100μm的Al2O3喷砂 65%硝酸(100℃,1h)处理。处理后采用TR240便携式表面粗糙度仪测定表面粗糙度。实验方法:将传至第3代的牙周韧带细胞,以2×108L-1的浓度分别接种于4组样品表面,MTT比色法测定牙周韧带细胞在纯钛表面早期附着0.5,1,2,4h的情况。实验评估:①各组纯钛表面的粗糙度。②牙周韧带细胞在不同表面粗糙度的纯钛表面早期附着情况。结果:①各组纯钛表面的粗糙度:单纯机械处理 酸处理组、单纯机械处理 喷砂处理组、单纯机械处理 喷砂处理 酸处理组纯钛表面的粗糙度低于单纯机械处理组[分别为(0.4065±0.0046),(0.3588±0.0118),(0.0087±0.0022),(0.5995±0.0083)μm],差异有显著性意义(q=61.7,76.9,188.8,P<0.001);单纯机械处理 喷砂处理组、单纯机械处理 喷砂处理 酸处理组纯钛表面的粗糙度低于单纯机械处理 酸处理组,差异有显著性意义(q=15.2,127.1,P<0.001);单纯机械处理 喷砂处理 酸处理组纯钛表面的粗糙度低于单纯机械处理 喷砂处理组,差异有显著性意义(q=111.9,P<0.001)。4组间方差分析结果表明,组间差异有显著性意义(F=6190,P<0.0001)。②牙周韧带细胞在纯钛表面的早期附着量:随着时间的推移,吸光度值()增高,各组早期附着在纯钛表面的牙周韧带细胞增多。单纯机械处理 酸处理组、单纯机械处理 喷砂处理A组、单纯机械处理 喷砂处理 酸处理组附着量(A)高于单纯机械处理组,差异有显著性意义(P<0.0001);单纯机械处理 酸处理组、单纯机械处理 喷砂处理组附着量(A)低于单纯机械处理 喷砂处理 酸处理组,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:钛表面粗糙度越小,牙周韧带细胞早期覆辙越多,有利于细胞黏附和增殖。     

脂肪干细胞与骨髓间充质干细胞心肌样分化特性的比较

目的：骨髓间充质干细胞与脂肪干细胞均具有分化为心肌细胞的潜能。观察脂肪干细胞体外诱导分化为心肌细胞的特性及相关基因表达，比较骨髓间充质干细胞与脂肪干细胞心肌分化能力的差异。方法：实验于2006—08／2007—04在吉林省耳鼻咽喉研究所和教育部吉林大学人兽共患病重点实验室完成。①实验材料：脂肪组织标本来源于本院手术患者，所有患者知情同意，术中收集多余的皮下脂肪。（爹实验方法：分离培养人脂肪干细胞，用5-氮胞苷诱导传4～6代的脂肪干细胞分化，平行培养第5代骨髓间充质干细胞，诱导条件相同，对照组培养液不添加任何诱导因子。③实验评估：采用免疫荧光技术观察脂肪干细胞和骨髓间充质干细胞表达结蛋白Desmin和肌钙蛋白TroponinT的阳性细胞率。通过即时RT．PCR的方法检测诱导过程中细胞内GATA-4和NKX2．5的mRNA水平。结果：脂肪干细胞经5-氮胞苷诱导后3周，肌性基因标志结蛋白desmin和肌钙蛋白Troponin—T阳性细胞明显增加。与骨髓间充质干细胞组比较，脂肪干细胞表达心肌特异蛋白的阳性细胞率在诱导后第14天明显升高，而在第21天时，两组细胞的阳性表达率均达到60％左右，无明显的统计学差别，未加任何诱导条件的脂肪干细胞对照组培养14d时有2．5％和1．6％的细胞表达Desmin，Troponin．T，在骨髓问充质干细胞对照组未见心肌标记蛋白的阳性表达。即时PCR检测结果发现，诱导组与未经诱导组的脂肪干细胞均表达GATA-4和NKX2．5，骨髓间充质干细胞组在诱导后第7天出现GATA-4和NKX25的转录活性。结论：体外培养的脂肪干细胞能够被5-氮胞苷诱导分化为心肌样细胞，并且具有自发分化的能力，与骨髓间充质干细胞相比，脂肪干细胞的早期分化特性更有利于心肌干细胞移植治疗。     

人骨髓间充质干细胞的贴壁分离与体外培养

目的:验证贴壁方式分离人骨髓间充质干细胞,并进行体外扩增培养的可行性。方法:实验于2006-02/12在解放军济南军区总医院脊髓修复科完成。①实验材料:骨髓来源于解放军济南军区总医院脊髓修复科收治的脊髓完全性损伤患者,对本实验知情同意。基础培养液由含体积分数为0.15胎牛血清和低糖α-MEM配置。②实验方法:无菌条件下髂后上棘穿刺抽取骨髓组织6mL,进行细胞培养,观察细胞生长情况,待细胞融合成片、长满培养瓶底部后,用质量浓度为2.5g/L的胰蛋白酶流过所有细胞表面。倒置显微镜下观察细胞变圆、部分脱壁后,立即加入有血清培养液终止消化。③实验评估:取第3代生长状态良好的细胞,胰蛋白酶消化制成细胞悬液,接种,以细胞数为纵坐标,时间为横坐标,绘制细胞生长曲线。同时每隔2h进行细胞贴壁率检测。结果:①骨髓间充质干细胞的形态学观察:倒置显微镜下,骨髓间充质干细胞接种1d即贴壁,去除悬浮细胞后继续培养3d贴壁细胞开始增殖,伸展为椭圆型、短梭型、多角型及不规则型等。至14d细胞密集在集落中心,基本铺满瓶底,第3～5代细胞呈均匀一致的长梭型,排列成旋涡状或放射状。②骨髓间充质干细胞的生长曲线:细胞传代后3d内处于潜伏期,3d后进入生长期,7d后进入平台期。③骨髓间充质干细胞的贴壁率:随着培养时间的延长,骨髓间充质干细胞贴壁率逐渐升高。传代后2,4,6,8,10,12,14,16,18,20h细胞贴壁率分别为(20.20±0.25)%,(33.00±0.29)%,(46.50±0.32)%,(69.20±0.30)%,(76.60±0.34)%,(86.50±0.27)%,(90.30±0.20)%,(96.10±0.28)%,(98.50±0.12)%,(99.00±0.07)%。结论:贴壁法分离骨髓间充质干细胞操作简便,经体外扩增培养后细胞增殖活性强,传代周期为7d,是比较理想的骨髓间充质干细胞培养方法。     

A Descriptive Study of United States-Based Human Trafficking Specialty Clinics

Psychiatric Quarterly - Human trafficking is a crime associated with serious adverse health and mental health outcomes. It has been estimated that more than 40 million people worldwide have been...     

槲寄生化学成分的研究——Ⅵ.槲寄生新甙Ⅵ中手性碳的绝对构型测定

本文采用降解及与已知构型的化合物进行对比的方法,确定了新黄酮甙槲寄生新甙Ⅳ中酸性部分手性碳的绝对构型     

高效液相色谱法测定人血中普鲁卡因酰胺及其代谢产物N-乙酰普鲁卡因酰胺

本文用高效液相色谱法测定人血中普鲁卡因酰胺(PA)及其代谢产物N-乙酰普鲁卡因酰胺(NAPA)。以正丙醇—氯仿(1:9)提取血清样品,蒸干,残渣用流动相溶解;色谱分析条件:NOVA-PAK 5μm ODS柱,醋酸(40 ml)—醋酸钠(4g)—水(1000ml)—乙腈(100ml)为流动相;定量分析以普鲁卡因为内标,样品的比率色谱图表明分离良好,PA和NAPA的线性测定范围分别为0.5～12.0μg/ml和0.5～6.0μg/ml,相关系数均优于0.99,平均回收率分别为99.4%和100.5%,平均变异系数分别为4.16%和4.36%。方法适用于血清样品分析和治疗药物监测,对病人血样的测定结果表明方法不受干扰。     

槲寄生化学成分的研究——Ⅵ.槲寄生新甙Ⅵ中手性碳的绝对构型测定

本文采用降解及与已知构型的化合物进行对比的方法,确定了新黄酮甙槲寄生新甙Ⅳ中酸性部分手性碳的绝对构型。     

纤维胆道镜临床应用160例

0　引言　纤维胆道镜 (下称胆道镜 )在肝内外胆道疾病中的应用 ,其诊治价值已得到充分肯定 .我院 1996 - 0 1/ 1999- 12 ,术中、术后使用胆道镜诊治胆道肿瘤及结石 16 0例 ,取得了较满意的效果 .1　对象和方法1.1　对象　术中应用胆道镜行胆道探查共 38(男 2 3,女 15 )例 ,其中胆总管结石 2 9例 ,肝内胆管多发结石 5例 ,胆管肿瘤4例 .术后经 T管瘘道取石或活检 12 2 (男 78,女 44 )例 ,年龄18～ 77岁 ,其中肝外胆管残余结石 114例 ,多发性肝内胆管残余结石 5例 ,胆总管下端肿瘤活检 2例 ,置管造影 1例 .1.2　方法　日本 Olympus CHP2 OQ…