经胸微创非体外循环下封堵膜部室间隔缺损

目的探讨一种新的经胸微创非体外循环下封堵膜部室间隔缺损(VSD)的手术方法,总结临床应用经验,观察中期随访结果。方法自2007年3月至2009年6月,采用改良新型输送系统封堵技术连续对136例膜部VSD患者施行修补,年龄3个月~15岁,平均年龄1.8岁;体重4.0~26.0 kg,平均体重12.7 kg;VSD直径3~12mm,平均5.1 mm。患者经胸部微创小切口(胸骨下端3~4 cm纵行小切口或胸骨左缘第3肋间2~3 cm横切口)在非体外循环下手术,于右心室表面选择适当的穿刺点,在食管超声心动图(TEE)实时引导下,建立VSD输送轨道,将封堵器安放在VSD部位,封堵VSD。术后密切随访病情变化,按期复查经胸心脏超声心动图、心电图和胸部X线片检查。结果 136例患者中131例(96.3%)封堵成功,手术时间少于90 min,安置封堵器时间5~42 min(16.3±5.7 min)。89例(67.9%)采用对称封堵器,42例(32.1%)采用偏心封堵器。术后即刻用TEE监测,3例存在轻微残余分流,4例发生新的微量至轻度三尖瓣反流,但所有术前有三尖瓣反流患者未见反流加重,主动脉瓣未受影响,无左、右心室流出道梗阻和完全性房室传导阻滞发生。1例患者术后第4 d发生一过性完全性房室传导阻滞,但经内科处理3 d内恢复正常心律。5例(3.7%)术中改为常规体外循环手术。介入封堵成功的131例患者均获得随访,随访时间6~30个月(18.3±6.6个月)。随访期间3例原有轻微VSD残余分流者分流全部消失;所有患者未出现新的三尖瓣和主动脉瓣反流,无血栓和溶血,无封堵器位置移动现象,未发现左、右心室流出道狭窄。手术切口隐蔽,基本不影响美观。结论在TEE引导下经胸微创封堵VSD技术不需要体外循环辅助,适用于大多数膜部限制性VSD患者,是一种简单、安全、有效的治疗方法。远期结果尚需要随访观察。     

达芬奇机器人手术系统在精准肝切除中的应用

目的 探讨达芬奇机器人手术系统在精准肝切除中应用的可行性、安全性及优势.方法 回顾性分析2009年4月至7月解放军总医院应用达芬奇机器人手术系统对13例肝病患者行精准肝切除的临床资料进行.结果 所有患者手术获成功,无中转开腹.其中广泛肝切除9例,左外叶切除4例.所有患者鞘内解剖选择性人肝血流阻断下的解剖性肝切除.平均手术时间为338 min(150～720 min),平均失血量为208 ml(50～800 ml),无术中、术后输血.术后仅1例患者出现胆汁漏,经保守治疗后痊愈,无围手术期死亡.术后平均住院时间为7 d(2～13 d).结论 达芬奇机器人手术系统行精准肝切除安全可行,它极大地拓展了腹腔镜肝切除的适应证,尤其利于精准的肝门解剖和腹腔镜下缝合.     

环氧氯丙烷处理对瓣膜组织结构及表面性状的影响

目的 通过研究环氧氯丙烷（ECH）处理对瓣膜组织结构及表面性状的影响，探究ECH处理生物瓣膜后防钙化的机制。方法 通过测定ECH处理瓣膜组织的抗酶消化能力、茚三酮值、热皱缩温度，以及血浆蛋白吸附实验、血小板黏附实验评价ECH处理瓣膜组织的表面性状。结果 经ECH处理后，抗酶消化能力增加，茚三酮值下降，热皱缩温度升高（P〈0．01），且对血浆蛋白和血小板的黏附减少，表面性状改善。结论 ECH处理能够增加瓣膜组织的交联，且改善瓣膜的表面性状，是ECH处理瓣膜组织防钙化、防衰坏的机制之一。     

小鼠睾丸gdnf基因的克隆及其在支持细胞中的表达

目的:从小鼠睾丸中克隆胶质细胞源神经营养因子基因gdnf,构建真核表达载体,并转染支持细胞,以便用作培养精原干细胞(SSCs)的滋养层。方法:以正常成年昆明鼠为材料,提取小鼠睾丸组织中总RNA后,以RT-PCR技术克隆小鼠睾丸gdnf基因,构建真核表达载体,并转染TM4细胞(睾丸支持细胞株),在转染后40h进行免疫荧光鉴定。结果:成功克隆小鼠睾丸gdnf基因的cDNA,测序正确,免疫荧光细胞染色显示转染后的支持细胞中有GDNF蛋白表达。结论:本研究为以转染了gdnf基因的支持细胞作饲养层培养SSCs奠定了基础。     

关节镜技术在胫骨平台骨折治疗中的应用

目的探讨关节镜技术应用于胫骨平台骨折手术治疗的价值。方法自2002年2月至2005年12月，共治疗39例胫骨平台骨折，合并前交叉韧带止点撕脱骨折11例、半月板损伤19例，Schatzker分型为Ⅰ型4例、Ⅱ型12例、Ⅲ型9例、Ⅳ型12例、Ⅴ型2例。术前行膝关节正侧位摄片、三维CT重建和磁共振检查，术中在关节镜辅助下，首先对合并损伤进行相应处理，然后对骨折进行解剖复位，通过螺钉和克氏针等固定，骨折块塌陷者植骨，术后坚持早锻炼、晚负重的原则。结果所有患者均在术后3～4个月骨性愈合，未出现切口愈合不良、感染和骨筋膜间室综合征等早期并发症，在随访的1—3年期间未观察到创伤性膝关节炎和超过5°的膝关节内翻、外翻畸形，36例膝关节主动屈曲超过90°，根据Rasmussen评分，36例病例为优良，3例SchatzkerⅢ型为可以，本组总评分为（26±3）分。结论 在治疗SchatzkerⅠ—Ⅴ型胫骨平台骨折时，采用关节镜辅助下的有限切口结合简单固定的手术，具有创伤小、可同时处理关节腔内的其它损伤等优势，可以获得骨折愈合快、膝关节功能良好的近期疗效，因此具有较高的应用价值。     

兔VX2肝癌模型的制作及CT、MRI表现

目的建立稳定的兔VX2移植性肝癌模型,分析少血供移植性肝恶性肿瘤的CT及MRI影像特征,与病理学相对照。方法取荷瘤兔后腿肌肉内VX2肿瘤,剪成小块后,经开腹种植于30只新西兰大白兔肝左叶或肝中叶,于种植后第2周、第3周分别进行CT及MRI增强扫描,统计肿瘤种植成功率,观察肿瘤体积及生长指数,分析肿瘤CT及MRI平扫和增强表现,区分富血供、少血供肿瘤;分别处死2只实验兔进行病理分析,与影像学相对照。结果VX2移植瘤种植成功22只;成瘤率为73%。2周与3周时肿瘤生长率有显著差异(P<0.01)。VX2移植瘤在CT及MRI上表现为占位性病变,呈类圆形或分叶状低密度或低信号结节,增强后发现少血供VX2移植瘤14只,表现为肿瘤无强化或轻微强化,肿瘤主体保持为低密度或低信号;富血供肝移植瘤8只,表现为肿瘤中度强化或明显强化,肿瘤主体密度或信号明显高于肝实质。光镜下肿瘤新生毛细血管虽较丰富,但纤细。结论经开腹种植法制作兔VX2肝移植瘤模型是一种简单、成功率高的建模方法,但易发生转移。CT及MRI平扫和增强扫描是检测肿瘤生长和血供的可靠方法,兔VX2肝移植瘤模型在CT与MRI上主要是一种少血供肝癌模型。     

去甲斑蝥素对蛋白负荷肾病大鼠干预的研究

目的 观察去甲斑蝥素对蛋白负荷肾病大鼠蛋白尿及肾脏病理的影响。 方法 摘除SD大鼠右肾，腹腔注射牛血清白蛋白，建立蛋白负荷肾病模型后分成模型组和去甲斑蝥素组；对照组仅注射生理盐水。检测各时间点各组大鼠尿蛋白定量（24 h）。第5周末处死大鼠，检测血常规及生化指标；肾组织行光镜、电镜及免疫荧光染色作病理学检查。 结果 与对照组比较，模型组肾重/体重、各时间点尿蛋白定量（24 h）、肾小球硬化指数、小管间质病理损伤积分均显著升高（P均 ＜ 0.01）， 血清白蛋白（Alb）显著降低（P ＜ 0.01)。电镜结果显示模型组小鼠肾小球系膜区有明显电子致密物沉积，足突融合；免疫荧光显示IgG和C3沉积于系膜区（3+～4+）。去甲斑蝥素干预后，肾病大鼠除Alb升高（P ＜ 0.01）外，上述其余指标均显著降低（P ＜ 0.05或0.01)；系膜区有散在电子致密物沉积，足突灶状融合；IgG和C3免疫荧光染色强度减弱。各组间Scr、BUN、ALT及血常规差异均无统计学意义。 结论 去甲斑蝥素能显著降低蛋白负荷肾病大鼠尿蛋白，减轻其肾小管间质病理损伤，且无肝肾毒性及骨髓抑制等严重不良反应。     

转化生长因子β1短发夹RNA对白蛋白刺激人肾近曲小管上皮细胞细胞因子表达的影响

目的 研究pcDU6载体质粒介导的转化生长因子β1（TGF-β1）短发夹RNA（shRNA）对人血清白蛋白（HSA）致人肾近曲小管上皮细胞（HK2细胞）增殖，TGF-β1、结缔组织生长因子（CTGF）和纤连蛋白（FN）表达的影响，并探讨有关机制。方法 构建TGF-β1shRNA的pcDU6载体质粒，体外培养HK2细胞株。采用脂质体转染将表达TGF-β1shRNA的pcDU6质粒载体（pcDU6-A1-A2和peDU6-B1-B2）分别导人实验组细胞。用HSA（5g／L）刺激HK2细胞12h或24h。四甲基偶氮唑盐（MTF）比色法测定细胞增殖水平。RT-PCR半定量分析HK2细胞中TGF-β1、CTGF和FNmRNA的表达水平；双抗夹心酶联免疫吸附法检测HK2细胞培养液中TGF-β1及FN蛋白质水平。结果 HK2细胞在HSA刺激下，其TGF-β1、CTGF及FNmRNA的表达明显上调，培养液中TGF-β1和FN的蛋白质含量亦明显升高（P〈0．05）。与pcDU6空载体组比较，pcDU6载体质粒介导的TGF-β1shRNA干扰组TGF-β1、CTGF及FNmRNA的表达明显下调（P〈0．05）。TGF-β1shRNA转染HK2细胞后12h或24h，细胞培养液中TGF-β1和FN蛋白质含量明显下降，HK2细胞增殖被部分抑制（P〈0．05）。在细胞增殖、TGF-β1、CTGF及FN基因表达方面，TGF-β1shRNA干扰组组间比较，以及pcDU6空载体转染组与HSA刺激组比较，差异均无统计学意义。结论 peDU6载体质粒介导的TGF-β1shRNA能够明显抑制HSA刺激下HK2细胞增殖、TGF-β1、CTGF和FN基因的表达。HSA刺激HK2细胞增殖及CTGF和FN基因的过表达可能通过TGF-β1介导。     

酸敏感离子通道1a在大鼠全脑缺血再灌注损伤中的作用

目的 探讨酸敏感离子通道1a(ASIC1a)在大鼠全脑缺血再灌注损伤中的作用.方法成年雄性SD大鼠40只,体重250～ 300 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为4组(n=10):假手术组(S组)、全脑缺血再灌注组(I/R组)、ASIC1a特异性阻断剂PcTX1组(P组)和溶剂对照组(SC组).采用改良的Pulsinelli四血管阻断法制备大鼠全脑缺血再灌注损伤模型.P组和SC组于再灌注即刻分别经侧脑室注射PcTX1 (500 ng/ml)6μl和双蒸水6μl.再灌注24h时处死大鼠,取海马组织,采用Western blot法测定Caspase-3的表达,采用免疫组织化学法检测海马CA1区Bcl-2、Bax的表达水平,并观察海马病理学结果.结果 与S组比较,I/R组、P组和SC组海马Caspase-3、Bcl-2和Bax表达上调(P＜0.05);与I/R组比较,P组海马Caspase-3和Bax表达下调,Bcl-2表达上调(P＜0.05),SC组差异无统计学意义(P＞0.05).P组海马病理学损伤较I/R组减轻.结论 ASIC1a激活后可能通过上调脑组织Caspase-3和Bax的表达,下调Bcl-2的表达,诱发细胞凋亡,从而导致大鼠全脑缺血再灌注损伤.     

特异结合唾液酸化LewisX抗原DNA适配子抑制肝癌细胞株HepG2体外侵袭转移

目的 观察特异结合唾液酸化LewisX (SLeX)抗原DNA适配子抑制HepG2细胞与E-选择素黏附能力及其体外抑制HepG2细胞浸润转移能力.方法 采用黏附实验、Transwell体外侵袭实验,检测该适配子对HepG2细胞与E选择素黏附及对HepG2细胞体外侵袭的影响.结果 该DNA适配子可有效抑制HepG2细胞与E-选择素黏附,黏附细胞数随适配子浓度的增加而减少(P＜0.01),20 nmol浓度的适配子与单克隆抗体CSLEX-1效果相似;Transwell侵袭实验中,5、10、20nmol适配子组的侵袭细胞数分别为159.00±3.27、142.00±5.50、115.00±5.07,与对照组(178.00±4.64)比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 特异结合唾液酸化LewisX抗原DNA适配子可以抑制HepG2细胞与E-选择素黏附,阻断Lewis-selectin途径,抑制HepG2细胞体外侵袭转移.