磷酸化蛋白质组学富集策略进展及其在疾病研究中的应用

蛋白质磷酸化是生物体内重要的翻译后修饰,几乎参与调节着细胞增殖、信号转导、新陈代谢、肿瘤发生等过程在内的所有生命活动。对磷酸化蛋白质组的全面分析可以帮助人们深入了解磷酸化蛋白在生命过程中的作用,协助发现生物标志物,辅助疾病的诊疗。然而,磷酸化蛋白丰度低、信号被非磷酸化肽段所掩盖等问题限制了磷酸化蛋白质组学的发展。因此,亟需开发高效的富集策略,如设计新型纳米材料,合并多种分析方法等,以提高检测灵敏度、富集特异性,增大富集容量。本文回顾了近年来磷酸化蛋白质组学研究策略中的富集策略进展及其在疾病研究中的应用。     

PLR联合VTI评估急性循环衰竭容量反应性的单中心随机对照研究

目的探讨被动抬腿试验(PLR)联合左室流出道速度时间积分(VTI)评估外科ICU中急性循环衰竭(ACF)早期容量反应性的价值。方法采取前瞻性观察队列研究方法选取急性循环衰竭患者先后进行被动抬腿试验和容量负荷试验,试验前后采用经胸超声心动图测量每搏量(SV),做左室流出道速度时间积分(VTI),定义试验前后SV增加(ΔSV)≥15%为有容量反应性,根据有无容量反应将患者分为有反应组和无反应组,观察两组PLR前后相关血流动力学参数的变化及其相关性,最后采用受试者工作特征曲线(ROC曲线)评价VTI预测容量反应性的价值。结果研究共计纳入60例患者,其中有容量反应35例,无容量反应性25例;有容量反应性组PLR前后平均动脉压MAP(67±19 vs 73±13 mm Hg,P=0.02)、每搏量SV(48±11 vs 56±10 ml,P=0.03)、VTI(14±4 vs 18±5 cm,P=0.04)的变化存在显著统计学差异;PLR前后与容量负荷试验前后ΔSV呈显著正相关性(r=0.8846,P<0.0001);PLR后下腔静脉塌陷指数(c IVC)、ΔVTI与ΔSV呈显著正相关性(r=0.8034,P<0.001;r=9212,P<0.001),而CVP与ΔSV无显著相关性(r=-0.1121,P=3947);PLR后ΔVTI预测容量反应性AUC(ROC曲线下面积)为0.8686±0.04(P<0.001),其中ΔVTI>8.75%预测容量反应性敏感性和特异性分别为90.63%和85.00%,阳性预测率和阴性预测率分别为90.67%和84.00%。结论 PLR联合VTI可以准确预测外科ICU中急性循环衰竭患者容量反应性,可指导临床液体治疗。     

鱼腥草注射液联合阿莫西林治疗上呼吸道感染的临床研究

目的探讨鱼腥草注射液联合阿莫西林治疗上呼吸道感染的临床效果。方法选取2015年10月—2017年3月于航天中心医院进行治疗的上呼吸道感染患者120例,随机分为对照组和治疗组,每组各60例。对照组口服阿莫西林胶囊,0.5 g/次,3次/d。治疗组患者在对照组治疗基础上静脉滴注鱼腥草注射液,20 m L加入5%葡萄糖250 m L,1次/d。两组患者均连续治疗5 d。观察两组的临床疗效,比较两组体温变化、临床症状及体征改善情况、血清学指标的变化情况。结果治疗后,对照组和治疗组的总有效率分别为78.33%、91.67%,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。治疗后,两组患者体温均显著降低,同组治疗前后比较差异有统计学意义(P0.05);治疗后3、4 d治疗组患者体温均显著低于对照组,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。治疗组患者咳嗽消失时间、咽痛消失时间、啰音消失时间均显著短于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。治疗后,两组白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平均显著降低,同组治疗前后比较差异有统计学意义(P0.05);治疗后,治疗组IL-6、IL-10、TNF-α水平均显著低于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论鱼腥草注射液联合阿莫西林胶囊治疗上呼吸道感染具有显著的效果,可显著改善患者临床症状,降低机体炎症因子水平,具有一定的临床推广应用价值。     

O型臂导航引导下经皮椎体成形术治疗中段胸椎骨质疏松性椎体压缩骨折的精准性及安全性

目的 探讨O型臂导航引导下经皮椎体成形术（percutaneous vertebroplasty,PVP）在治疗中段胸椎骨质疏松性椎体压缩骨折的精准性及安全性。方法 2019年12月—2021年8月复旦大学附属浦东医院骨科收治中段胸椎骨质疏松性椎体压缩骨折（osteoporotic vertebral compression fracture,OVCF）患者15例（15个椎体）,男5例,女10例;年龄70~89岁,平均（76.7±5.8）岁。均采用O型臂导航引导下经单侧穿刺行PVP治疗。主要疗效指标：术中规划路径与实际路径的符合率,微创经皮开路器穿刺成功需要的次数,主要指标用于评价该手术操作的精准性。次要疗效指标包括：记录患者术前、术后2天以及末次随访时视觉模拟（visual analogue scale,VAS）疼痛评分,Oswestry功能障碍指数（Oswestry disability index,ODI）。同时记录患者的手术时间、骨水泥使用量、术中出血量及手术相关并发症发生情况等,测量并记录术前、术后2天及末次随访时伤椎前缘高度,次要指标用于评价该手术方案的临床疗效与安全性。结果 15例患者均顺利完成手术,术中规划路径与实际路径的符合率：优6例,良9例,优良率达100%,所有病例均为1次穿刺成功,无患者出现骨水泥渗漏或严重并发症。平均随访11.7个月。术前、术后2天及末次随访时患者VAS评分分别为7.2±0.7、2.3±0.5和1.9±0.5,患者ODI评分分别为68.1±4.0、23.6±4.3和23.0±4.6,患者伤椎前缘高度分别为（2.4±0.3）cm、（2.7±0.3）cm和（2.6±0.3）cm。术后2天患者VAS评分、ODI评分较术前明显改善（P<0.05）,术后2天及末次随访时患者伤椎前缘高度较术前均增加（P<0.05）。结论 O型臂导航引导下PVP治疗中段胸椎OVCF,可提高手术操作精准度及安全性,在治疗中段胸椎OCVF中可能具有较大的临床应用价值。     

虚拟导航联合径向超声引导下经支气管镜肺活检在早期周围型肺癌诊断中的应用价值

目的探讨虚拟导航(VBN)联合径向超声(EBUS)引导下经支气管镜肺活检(TBLB)在早期周围型肺癌诊断中的应用价值。方法回顾性分析2016年6月至2019年9月于绍兴市人民医院呼吸内科住院或门诊就诊,胸部CT高度怀疑为周围型肺癌的患者188例,根据操作设备不同,分为经支气管镜肺活检组(TBLB组),径向超声组(EBUS+TBLB组)及虚拟导航联合径向超声组(VBN+EBUS+TBLB组),评估三种不同检查方法的诊断阳性率、安全性,以及EBUS组及VBN+EBUS组操作时间。结果TBLB组、EBUS组及VBN+EBUS组三组患者的诊断率分别为32.2% .64.3%及67.1%,差异有统计学意义(P<005),特别是直径为2~3 em的病灶差异更为明显。亚组分析显示,诊断率与病变肺叶无关,VBN能明显缩短操作时间,超声探头在病灶内部或紧邻病灶诊断率高。结论在TBLB的基础上联合VBN及EBUS在不增加并发症的情况下能大大提高周围型肺癌诊断的阳性率。     

中医不同治法诱导肌源性干细胞向成骨细胞诱导分化中SDF-1蛋白表达的比较研究

目的 探究在中医补肾、健脾、补肾健脾的不同方法下,人骨形态发生蛋白2（BMP-2）诱导大鼠肌源性干细胞（MDSCs）成骨分化的过程中基质细胞衍生因子1（SDF-1）蛋白含量变化。方法 购置体外分离培养大鼠肌源性干细胞(MDSCs)。用随机数字表法将60只SPF级SD大鼠分为6组,依次为正常组、诱导液组、诱导液+补肾阴组（左归丸组）、诱导液+补肾阳组（右归丸组）、诱导液+健脾组（补中益气汤组）、诱导液+补肾健脾组。对大鼠进行7 d灌胃,大鼠胃容积为 1 mL /100 g,以此为大鼠配药及灌胃,制备含药血清。通过茜素红染色观察其细胞形态,使用qRT-PCR法、ELISA检测上述各组细胞中SDF-1mRNA及蛋白表达。结果 ①qRT-PCR检测结果显示：与正常组相比,诱导组、补肾阴组、补肾阳组、健脾组、补肾健脾组显著升高;与诱导组比较,除健脾组外,其余各组组中SDF-1均显著升高,且具有统计学意义(P<0.05);②ELISA检测结果表明：与正常组相比,诱导组、补肾阴组、补肾阳组、健脾组、补肾健脾组中SDF-1mRNA相对表达量均高于正常组,除补肾阴组与补肾健脾组外均具有统计学意义(P<0.05);与诱导组相比,除补肾健脾组外,补肾阴组、补肾阳组、健脾组均具有统计学意义（P<0.05）。结论 ①大鼠肌源性干细胞(MDSCs)向成骨细胞的转化与SDF-1的水平升高有关;②补肾阴、补肾阳、健脾和补肾健脾法大鼠肌源性干细胞(MDSCs)向成骨细胞诱导分化的过程中存在正向促进作用,可能是通过提高SDF-1水平来促进成骨细胞的转化。     

基于肠黏膜屏障及TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路探讨燮和饮改善PCOS-IR小鼠炎症反应的影响

目的 探讨燮和饮对改善肥胖型多囊卵巢综合征胰岛素抵抗（PCOS-IR）,减缓炎症反应的可能作用机制。方法 将60只SPF级雌性C57BL/6J小鼠随机抽取10只,并设为正常组,其余小鼠均采用粪菌混悬液（2 g·kg^-1）联合来曲唑溶液（0.002 g·kg^-1）灌胃4周建立PCOS-IR模型。将模型复制成功的动物随机分为模型组,二甲双胍组（0.25 g·kg^-1）及燮和饮低、中、高剂量组（10,20,40 g·kg^-1）,给予相应剂量的药物灌胃,每天1次,连续治疗4周。除空白组外,其余各组小鼠在治疗期间持续灌胃粪菌混悬液和来曲唑溶液以维持模型。动物每周称1次体质量;治疗结束后测量空腹血糖（FBG）;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清睾酮（T）,促卵泡生成素（FSH）,促黄体生成素（LH）,空腹胰岛素（FINS）水平,计算LH/FSH及胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）值;摘取子宫和双侧卵巢称质量后固定,苏木素-伊红（HE）染色观察卵巢组织病理形态学变化;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测小鼠结肠组织中Toll样受体4/核转录因子-κB/NOD样受体蛋白3（TLR4/NF-κB/NLRP3）信号通路及下游炎症相关因子半胱氨酸天冬氨酸水解酶-1（Caspase-1）,白细胞介素-1β（IL-1β）,紧密连接蛋白-1（ZO-1）,闭合蛋白（occludin）表达水平。结果 与正常组比较,模型组小鼠体质量显著升高（P<0.01）;血清FBG,FINS和HOMA-IR明显升高（P<0.05）;血清T,LH/FSH显著升高（P<0.01）;子宫脏器比显著降低（P<0.01）,卵巢脏器比显著升高（P<0.01）,镜下可见卵巢中囊性扩张卵泡及闭锁小卵泡数量明显增多,黄体数量显著减少,卵泡颗粒细胞层减少,卵泡膜显著增厚;结肠组织中ZO-1,occludin的相对表达量显著下调（P<0.01）,炎症相关蛋白TLR4,NF-κB,NLRP3,Caspase-1,IL-1β表达量明显上调（P<0.05）。与模型组比较,燮和饮低、中、高剂量组小鼠体质量显著降低（P<0.01）;燮和饮中、高剂量组血清FBG,FINS,HOMA-IR明显降低（P<0.05）;高剂量组血清T,LH/FSH显著降低（P<0.01）;卵巢脏器比明显降低（P<0.05）,子宫脏器比显著升高（P<0.05）,卵巢中囊状卵泡明显减少,内见黄体,卵巢颗粒细胞正常排列,卵泡膜略增厚;高剂量组结肠组织TLR4,NF-κB,NLRP3,Caspase-1,IL-1β蛋白表达显著下调（P<0.01）,ZO-1,occludin蛋白表达量显著上调（P<0.01）。结论 燮和饮调控肠道TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路,减少下游炎症因子释放,通过重建肠黏膜屏障功能及抑制肠道炎症反应,改善肥胖和IR,从而逆转PCOS-IR。     

经肛减压导管置入处理结直肠癌并急性梗阻的临床观察

目的 探讨内镜辅助下经肛门置入减压导管在低位结直肠癌并急性肠梗阻中的应用及疗效观察。方法 13例急性结直肠癌性梗阻患者在结肠镜辅助下,经肛门置入肠梗阻减压导,灌洗、引流等保守治疗7~10天后行一期根治手术。结果 13例患者均成功置入减压导管;术后患者腹痛、腹胀明显缓解,腹胀呕吐症状消失;置管后第3天,腹围由92.7±5.7 cm减小到81.2±4.8 cm;腹腔内压力由21.00±1.5 cmH₂O减至12.2±0.8 cmH₂O;减压导管引流量从782.3±72.1 mL下降至33.8±15.3 mL;梗阻近端肠管最大横径由5.4±0.6 cm缩小至2±0.3 cm（均P<0.001）。所有患者均接受一期结肠癌根治手术,术后未发生吻合口漏、伤口、腹腔感染等并发症。结论 对于低位结直肠癌伴发急性肠梗阻,经肛门置管减压不仅可显著缓解梗阻症状同时有利于改善患者全身状况并进行充分的术前准备,为一期根治性手术赢得时机;具有有效、安全、经济、创伤小等优势。     

硫酸氢氯吡格雷片在中国健康人体的生物等效性研究简

目的：评价受试制剂硫酸氢氯吡格雷片（爱普瑞乐）与参比制剂硫酸氢氯吡格雷片（波立维）在中国健康人体中的生物等效性。方法：健康受试者双周期交叉空腹口服硫酸氢氯吡格雷片受试制剂和波立维片参比制剂75mg,用LC—Ms／MS法测定氯吡格雷的羧酸代谢物氯吡格雷酸的血药浓度;用DAS2．0软件进行数据处理,分析氯吡格雷酸人体药代动力学特征,来间接反应氯吡格雷的药代特征及生物等效性。结果：氯吡格雷的代谢物氯吡格雷酸的受试制剂与参比制剂的Cmax分别为（1351．1±654．9）、（1184．6±607．7）ng／mL,AUC0-24h分别为（2642．0±1093．8）、（2780．6±1283．1）ng·h·mL-1,AUC0-∞分别为（2867．8±1238．9）、（3003．3±1291．2）ng·h·mL-1,t1／2分别为（3．81±2．54）、（4．62±2．88）h,tmax分别为（0．80±0．32）、（0．95±0．63）h,受试制剂对参比制剂的相对生物利用度为（101．4±34．8）％。结论：本检测方法具有准确、灵敏、快速、简便等特点,适合人血浆中氯吡格雷酸浓度测定。AUC和Cmax经对数转换后进行多因素方差分析及双单侧t检验,tmax经非参数检验,结果显示两种制剂生物等效。     

妊娠期糖尿病患者血浆FM，D-Dimer 和FIB 检测评价不同治疗方案对凝血功能及不良妊娠结局的影响

目的 探讨纤维蛋白单体（FM）、D- 二聚体（D-Dimer）以及纤维蛋白原定量（FIB）等凝血指标与妊娠期糖尿病(GDM) 患者不同治疗方案和不良妊娠结局的关系。方法 选取2021 年6 月～ 2022 年1 月在解放军总医院产科门诊就诊的正常孕晚期女性为正常妊娠组（n=40）和GDM 患者（n=74）,其中50 例通过饮食和运动控制血糖（GDM非药物组）,24 例使用胰岛素控制血糖（GDM 胰岛素组）。采用单因素方差分析和Kruskal-Wallis H 检验比较三组患者研究指标的差异,采用LSD-t 检验和Bonferroni 校正进行两两比较;并观察不良妊娠结局患者凝血特征。结果 正常妊娠组、GDM 非药物组和GDM 胰岛素组患者凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）和凝血酶时间（TT）比较差异均无统计学意义（F=1.051,H=4.368,F=0.021,均P>0.05）;FIB（4.24±0.66 g/L,4.57±0.71 g/L,4.22±0.58 g/L）, D-Dimer[0.32(0.30,0.45）mg/L,0.49（0.32,0.73）mg/L, 0.34（0.21,0.45）mg/L],FM [3.44(2.82,5.08）mg/L,4.53（3.44,12.99）mg/L,4.61（4.10,6.23）mg/L] 比较,差异均有统计学意义(F=3.847,H=9.194,8.968,均P<0.05)。两两比较显示,正常妊娠组FIB 和FM 水平低于GDM 非药物组（t=2.429, U=2.627 , 均P<0.05）,GDM 胰岛素组FIB 和 D-Dimer 水平低于GDM 非药物组（t=2.102,U=2.665,均P<0.05）,差异均有统计学意义。正常妊娠组、GDM 非药物组和GDM 胰岛素组患者FM 正常率（FM ≤ 6.0 mg/L）分别为80.00%,60.00% 和78.30%;高血栓发生风险率（FM ≥ 35 mg/L）分别为7.50%,12.00% 和4.17%; D-Dimer 正常率（D-Dimer<0.23 mg/L）分别为12.50%,6.00%和20.83%。临床结局方面,出现不良妊娠结局患者FM 和 D-Dimer 均高于血栓风险界值。结论 FM, D-Dimer 和FIB联合使用可有效反映GDM 患者不同治疗方案下凝血功能的差异,具备预测不良妊娠事件的潜力,且FM 作为孕期血栓风险标志物的临床价值优于 D-Dimer。