氯化钴诱导PC12细胞凋亡的分子机制

目的确定氯化钴(CoCl2)诱导PC12细胞凋亡的分子机制。方法500μmolLCoCl2诱导PC12细胞24h后,检测活性氧(ROS)生成量的变化以及抗氧化剂N乙酰半胱氨酸(NAC)、二硫代苏糖醇(DTT)对细胞存活率和ROS生成量的影响;琼脂糖凝胶电泳检测NAC、DTT对CoCl2诱导PC12细胞DNA片段化的影响;利用RTPCR法检测凋亡相关基因bclxl和bax在PC12细胞调亡过程中的表达及NAC、DTT对基因表达的影响;化学发光法检测NAC、DTT对Caspase3表达的作用。结果在CoCl2诱导PC12细胞凋亡中,ROS生成量明显上升,为正常时的2.92倍;NAC、DTT可提高细胞存活率,由53.1%上升为94.8%和92.3%(P<0.01),并有效抑制ROS的生成,为正常时的24.2%和82.1%(P<0.01);同时抑制DNA片段化的发生。bclxl在细胞凋亡过程中表达明显下降,bax表达无明显变化;NAC和DTT可使bclxl的表达明显上升。Caspase3在细胞凋亡中被激活,NAC、DTT可抑制Caspase3的表达(P<0.01)。结论ROS介导了CoCl2诱导的PC12细胞凋亡,这一过程与抑制bclxl表达,激活Caspase3有关。     

复方盐酸二甲双胍片在人体内药物动力学和生物等效性研究

目的 建立人血浆中盐酸二甲双胍的反相离子对高效液相色谱和格列本脲的液相色谱-质谱测定方法,研究复方盐酸二甲双胍片(盐酸二甲双胍250mg/格列本脲1.25mg×2片)相对于联合使用的盐酸二甲双胍片(500mg)和格列本脲片(2.5mg)在男性健康志愿者体内的药物动力学行为,评价其生物利用度和生物等效性。方法 采用双交叉随机实验设计:20名受试者交叉口服复方盐酸二甲双胍片2片或口服盐酸二甲双胍片与格列本脲片各1片,服药后于0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、5.0、6.0、8.0、12、24、36h分别取血,分离血浆,分别依法测定盐酸二甲双胍和格列本脲的血药浓度。结果 测得口服复方盐酸二甲双胍片或联合使用盐酸二甲双胍片与格列本脲片后,盐酸二甲双胍的达峰时间分别为(2.0±0.7)h和(2.1±0.9)h,峰浓度分别为(1402.4±349.2)μg·L^-1和(1329.7±315.4)μg·L^-1,消除半衰期分别为(3.84±0.61)h和(4.26±0.96)h,AUC_0-24分别为(7292.7±1967.5)μg·L^-1和(7416.2±1843.9)μg·h·L^-1；格列本脲的达峰时间分别为(3.1±0.9)h 和(3.0±0.8)h，峰浓度(71.7±22.7)μg·L^-1和(70.3±20.7)μg·L^-1,消除半衰期分别为(5.05±2.01)h 和(4.78±1.64)h，AUC_0-24分别为(367.6±168.7)μg·L^-1和(352.6±144.7)μg·h·L^-1；以联合服用等剂量的盐酸二甲双胍片与格列本脲片为参比，以AUC_0-24计算得复方盐酸二甲双胍片之盐酸二甲双胍和格列本脲的相对生物利用度，分别为101.1%±28.5%和123.7%±82.9%。结论 建立的分析方法准确灵敏，测得数据可靠。统计学分析表明复方盐酸二甲双胍片与联合使用盐酸二甲双胍片和格列本脲片显生物等效。     

新疆芍药化学成分的研究

目的 :研究新疆芍药的化学成分。方法 :用柱色谱分离 ,利用化合物的理化性质及波谱方法鉴定。结果 :分离并鉴定了芍药苷 (paeoniflorinⅠ )、白芍苷 (albiflorinⅡ )、芍药新苷 (lactiflorinⅢ )、胡萝卜苷 (daucosterolⅣ )和蔗糖 (sucroseⅤ )等 5个成分。结论 :这些化合物均为首次从该植物中分离得到。另芍药新苷化学结构曾 2次被修正 ,本研究分析后确认了其中的 1个结论。     

恶性肿瘤患者术后硬膜外自控镇痛对IL-2和IL-6的影响

目的:研究恶性肿瘤患者术后硬膜外自控镇痛对血清白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)的影响.方法:选择拟行妇科恶性肿瘤根治术的患者30例,分为2组(每组n=15):丁丙诺啡组(B组)与芬太尼组(F组).术毕均行硬膜外自控镇痛(PCEA),镇痛时间为48h.两组分别于术前2h,术后2h、1d、3d和5d各记录一次.并采集外周静脉血,采用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测血清中IL-2、IL-6水平.评估术后病人镇痛4个时点的视觉模拟评分(VAS),记录病人有无不良反应.结果:两组术后硬膜外自控镇痛各观察时点的IL-2水平与术前相比无明显变化(P>0.05),组间各观察时点比较无统计学差异(P>0.05);两组IL-6水平术后2h与术前相比显著升高(P<0.01),术后1d和3d与术后2h相比逐渐下降(P<0.01),仍高于术前水平(P<0.05),术后第5d基本恢复至术前水平(P>0.05),两组间相应时点比较差异无统计学意义(P>0.05).硬膜外自控镇痛可有较好的镇痛效果,不良反应少.结论:恶性肿瘤患者术后硬膜外自控镇痛可有效消除术后疼痛,对术后患者血清中IL-2水平无明显影响,能抑制IL-6水平的明显升高.提示丁丙诺啡与芬太尼用于妇科恶性肿瘤患者术后镇痛,在一定程度上维持体内细胞因子及内环境的稳定,能减轻机体应激反应,减轻术后免疫功能抑制,利于患者术后康复.     

NY-ESO-1致敏树突状细胞诱导的CTL对肝癌细胞株的特异性杀伤作用

目的：探讨肿瘤睾丸抗原NYESO1（New Yorkesophageal1）致敏树突状细胞体外诱导特异性CTL对肝癌细胞株的杀伤作用。方法：重组质粒pGEXESO1经原核诱导表达并纯化GSTESO1融合蛋白肽。重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（rhGMCSF）和白细胞介素4（rhIL4）诱导培养人外周血来源的树突状细胞（dendritic cells, DCs）,经GSTESO1融合蛋白肽致敏后诱导特异性CTL增殖。以此CTL为效应细胞,分别以NYESO1阳性表达的肝癌细胞株HepG2和不表达NYESO1的肝癌细胞株H2P为靶细胞,MTT法检测CTL对肝癌细胞株的杀伤作用。结果：重组质粒pGEXESO1经IPTG诱导,在大肠杆菌中表达相对分子质量约36 000的GSTESO1融合蛋白肽,纯化后的质量浓度为50 μg/ml;经rhGMCSF和rhIL4联合诱导成功培养人外周血DCs,其表型分子HLADR为91.4%、CD86为70.5%、CD83为71.2%、CD80为55.3%。NYESO1致敏的DCs能明显诱导CTL增殖,此CTL对肝癌细胞株HepG2的杀伤率显著高于GST刺激组、未致敏DC组和无DC刺激组(均P<0.05),效靶比为50∶1时杀伤效应达到最高峰\[(53.23±3.78)%,P<0.01\];相同条件下CTL对H2P细胞无特异性杀伤作用。结论： NYESO1抗原致敏的DCs在体外可诱导同种CTL产生和增殖,后者对NYESO1阳性肝癌细胞株具有特异性杀伤效应,该方法为肝癌免疫治疗提供了一条新思路。     

针刺与硬膜外腔复合麻醉用于胆囊切除术的临床研究

81例胆囊切除术分为 3组 : 组针刺与单纯硬膜外低浓度局麻药复合麻醉 ; 组单纯硬膜外低浓度局麻药麻醉 ; 组硬膜外常规浓度局麻药麻醉。临床观察麻醉效果 , 、 组进行同位素放射免疫测定进行比较研究 ,其结果显示针刺与硬膜外复合麻醉既减少麻醉药用量又对机体有调整作用 ,对手术刺激反应具有保护性抑制作用 ,使循环系统更稳定。     

全反式维甲酸治疗大鼠C6脑胶质瘤的实验研究

[目的]探讨全反式维甲酸治疗大鼠C6脑胶质瘤的疗效及其机制。[方法]建立大鼠C6脑胶质瘤模型,腹腔注射全反式维甲酸后,MRI检测胶质瘤的体积变化,免疫组化检测胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达并观察生存期。[结果]治疗组较对照组肿瘤体积明显减小（P〈0.05）;生存期延长（P〈0.05）;GFAP表达增加（P〈0.05）。GFAP的表达同肿瘤体积呈负相关（P〈0.05）。[结论]全反式维甲酸治疗可延长荷瘤鼠生存期,其机制与上调GFAP的表达有关。     

The occurrence of hepatocellular carcinoma in different risk stratifications of clinically noncirrhotic nonalcoholic fatty liver disease

Nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD) may be a cause of hepatocellular carcinoma (HCC), but its high prevalence challenges current surveillance strategies. We aimed to evaluate HCC incidences in different risk stratifications for noncirrhotic NAFLD. Using Taiwan's National Health Insurance Research Database, we located 31,571 patients with NAFLD between the years 1998 and 2012. After excluding other causes of hepatitis, underlying cirrhosis or malignancy, 18,080 patients were recruited for final analysis. Cumulative incidences of HCC were analyzed after adjusting for competing mortality. With a median follow‐up duration of 6.32 years in the study cohort, the 10‐year cumulative incidence of HCC was 2.73% [95% confidence interval (CI): 1.69–3.76%]. Hepatoprotectant was used as a surrogate marker for elevated serum alanine transaminase (ALT). After adjusting for age, gender, hypertension, hypercholesterolemia, diabetes mellitus, gout, statin use, metformin use and aspirin use, elevated ALT was independently associated with an increased HCC risk [hazard ratio (HR) 6.80, 95% CI: 3.00–15.42; p < 0.001]. Multivariate stratified analysis verified this association in all subgroups (HR> 1.0). Moreover, increased age (HR 1.08 per year, 95% CI: 1.05–1.11) and statin use (HR 0.29, 95% CI: 0.12–0.68) were also identified as independent risk factors. The 10‐year cumulative HCC incidence was highest in older (age >55 years) patients with ALT elevation (12.41%, 95% CI: 5.99–18.83%), but lowest in younger patients without ALT elevation (0.36%, 95% CI: 0–1.08%). The incidence of HCC was relatively low in patients with clinically noncirrhotic NAFLD, however, HCC risk was significantly increased in older patients experiencing an elevated serum ALT.     

磷脂酶C-γ1在高温诱导热休克蛋白70表达中的作用

目的:研究磷脂酶 C -γ1(phospholipaseC -γ1,PLC- γ1)对高温诱导成纤维细胞热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP 70)表达的影响。方法:以基因敲除方法建立的缺失 plcg1 基因(plcg1 / )及野生型(plcg1+/+ )小鼠胚胎成纤维细胞为模型,Western 免疫印迹 增强化学发光法检测它们在高温诱导时的HSP 70表达,并以酶联免疫吸附( ELISA)法做半定量分析,MTT法对比分析两种细胞的热耐受力。结果:两种细胞经43℃与45℃高温诱导 30 min,都能引起HSP 70合成,但plcg1 / 细胞HSP 70表达水平显著低于 plcg1+/+ 细胞,P<0 01;较低温度(41℃)不能诱导 plcg1 / 细胞 HSP 70 表达,却能引起 plcg1+/+ 细胞 HSP - 70 表达,且 pl cg1 / 细胞的热耐力亦明显低于 plcg1+/+ 细胞。结论:PLC- γ1 参与了热诱导成纤维细胞 HSP70表达的信号转导。     

麝香不同成熟阶段化学成分变化规律

目的 探索不同成熟阶段麝香中化学成分变化规律.方法 通过"活麝取香"法采集不同成熟阶段麝香,测定含水量,并通过GC-MS分析其主要成分含量变化规律.结果 6月底麝香平均含水量为55.921％,高于10月底的36.029％(P＜0.05).从6月到8月和10月,麝香中成分种类呈先升后降的变化趋势.6月底麝香中检测到55种...