重组Rab8截短体蛋白的原核表达、纯化和抗体制备

目的 获得Rab8纯化蛋白,制备多克隆抗体,为深入研究Rab8在病毒感染宿主细胞过程中的作用奠定基础.方法 首先从HepG2细胞中克隆Rab基因,然后从Rab8质粒中亚克隆Rab8 C端编码122个氨基酸的基因片段,构建Rab8与6His的融合蛋白原核表达质粒.原核表达与蛋白纯化后,免疫动物,制备Rab8多克隆抗体.采用ELISA法检测其效价.Western检验抗体特异性,间接免疫荧光染色法验证其免疫组化特性.结果 克隆了人Rab8编码基因,构建了表达Rab8 C端编码122个氨基酸的原核表达质粒pQE31-Rab8-122,经过大肠杆菌表达、镍亲和层析柱纯化,获得相对分子量约15 000的融合蛋白,免疫Balb/c小鼠后收获抗血清.ELISA显示抗体效价达1/20 000.Western blot和免疫荧光染色结果显示此多克隆抗体能够与原核表达的Rab8蛋白发生特异性反应,并能够识别HepG2细胞中内源性Rab8蛋白.结论 本研究获得原核表达的Rab8纯化蛋白,成功的制备了Rab8多克隆抗体,为进一步研究Rab8参与病毒感染宿主细胞提供了重要的实验材料.     

生长抑制因子1基因核定位序列-绿荧光蛋白融合表达载体的构建及表达

目的构建p33^ING1b核定位序列（nuclear locating sequence，NLS）-绿荧光蛋白融合表达载体，将其转染到人胚肺纤维母细胞系MRC-5，建立稳定表达该融合蛋白的细胞模型。方法应用逆转录PCR获得p33^ING1b的NLS序列，然后将NLS序列插入绿荧光蛋白融合表达载体pEGFP-C1的多克隆位点，构建pEGFP-C1-NLS-绿荧光蛋白融合表达载体，再用此载体转染MRC-5细胞系，观察活细胞绿荧光蛋白的亚细胞定位。结果成功构建了pEGFP-C1-NLS-绿荧光蛋白融合表达载体，由该载体表达的绿荧光蛋白-NLS肽段融合蛋白产生的绿色荧光信号全部定位于胞核部位，而空载体转染的细胞表达的绿色荧光蛋白，绿色荧光信号定位于细胞浆中。结论在活细胞内，生理情况下p33^ING1b完全定位于细胞核，并且在其亚细胞定位的转运过程中，NLS肽段起着决定性作用。     

Field evaluation of the efficacy and safety of emodepside/praziquantel spot-on solution against naturally acquired nematode and cestode infections in domestic cats

Two controlled, blinded and randomized multi-site clinical field studies evaluated the efficacy and safety of emodepside/praziquantel spot-on in the treatment of gastrointestinal nematode and cestode infections in cats. In a study conducted in Europe, faecal egg count reductions of >98% for all nematode eggs and eggs of Toxocara cati, respectively, were observed in cats treated with emodepside/praziquantel spot-on (Profender, Bayer AG, Leverkusen, Germany). For a positive-control product containing selamectin (Stronghold) reductions of >95% were observed. A 100% reduction of faecal eggs and proglottids was observed in cats treated with emodepside/praziquantel spot-on that were infected with cestodes. In a study conducted in North America, cats were treated with either emodepside/praziquantel spot-on plus a placebo tablet or a combination of two control products containing, respectively, selamectin (Revolution) and epsiprantel (Cestex). Faecal egg count reduction for eggs of T. cati was >99% for both treatments. For faecal eggs and proglottids of Dipylidium caninum reductions of >99 and >97% were recorded for cats treated with emodepside/praziquantel spot-on and the control group, respectively. No adverse reactions were observed in the European study, and only mild ones of short duration in a few cats from both treatment groups of the North American study. The two studies demonstrated that emodepside/praziquantel spot-on is highly efficacious and safe under field conditions.     

四川省蚋亚属一新种（双翅目：蚋科）

本文记述四川省峨眉山蚋属Simulium蚋亚属Simulium一新种，以中国科学院院士胡经甫命名为经甫蚋S．（S．）jinfful sp．nov．该蚋与S．（S．）himalayense Purl，1930，S．（S．）taiwanicum Takaoka，1979．S．（S．）shanxlense Cai and An，2003，S．（S．）immortalls Cai and An，2003，S．（S．）chamlongi Takaoka and Suzuki，1984相似，但是，雌虫的生殖叉突具内突和外突，肛上板椭圆形，前腿基节、转节、股节棕黄色；生殖腹板板体短，其长约为顶端宽度的0．8倍，与上述蚋种明显不同。模式标本保存在北京军事医学科学院医学昆虫标本馆。     

A second locus (GLC3B) for primary congenital glaucoma (Buphthalmos) maps to the 1p36 region

Primary congenital glaucoma (gene symbol: GLC3) is an ocular disorder that occurs for 0.01-0.04% of blind people. In the majority of familial cases reported so far, this condition is inherited as an autosomal recessive trait. We have recently used a group of 17 GLC3 families with a minimum of two affected offspring and consanguinity in most of the parental generation and mapped the first GLC3 locus (GLC3A) to the 2p21 region. Six families did not show any linkage to the GLC3A locus and thus provided evidence for genetic heterogeneity of this disorder. A total of eight families unlinked to the 2p21 region were used to search for the chromosomal location of the second GLC3 locus. Herein, we describe mapping of a new locus (designated GLC3B) for primary congenital glaucoma to the short arm of chromosome 1 (1p36.2-36.1) that is situated centromeric to the neuroblastoma and Charcot-Marie-Tooth type 2A (CMT2A) loci. A total of 17 DNA markers were genotyped from this region of chromosome 1. Four families showed no recombination with the two markers D1S2834 and D1S402 with a maximum lod score of 4.510 and 4.157 respectively. Pairwise and multipoint linkage analysis and inspection of the haplotypes revealed that the remaining four families are not linked to this part of chromosome 1, thus providing further evidence that at least one more locus for the autosomal recessive form of GLC3 must exist in the genome. Based on the recombination events, the overall linkage map of this region is: tel-D1S1192-D1S1635-D1S1193 - (D1S1597/-D1S489/D1S228)- [GLC3B/D1S2834/D1S402] - (D1S1176/D1S507/D1S407) - D1S2728-(MFAP2/D1S170) - D1S1368 - D1S436- D1S1592-cen.      

评“McCall观察方法”——对一种色谱系统分配效果观察方法的商榷

本文通过理论分析和文献数据的分析,对McCall提出的色谱系统分配效果的观察方法提出了不同的看法,认为McCall方法中的所谓logK并不是常数。McCall的方法无论在理论上和实践上都是不妥的。     

美国医保支付制度改革对我国康复护理服务的启示

梳理了美国医保支付制度改革进程,总结了捆绑支付模式内涵及其对康复护理服务的影响。结合我国国情,借鉴美国医保支付制度改革经验,认为我国应建立基于价值评价的康复护理服务医保支付制度,充分发挥医保基金的引导和保障作用,健全多元化的复合型医保支付体系,创建“以人民的健康为中心”的连续型医疗服务保障体系。     

2015—2020年南通市中小学生食源性疾病特征分析

目的 分析南通市中小学生食源性疾病流行病学特征,为有效防控中小学生食源性疾病提供科学依据。方法 收集2015—2020年南通市哨点医院就诊的中小学生食源性疾病病例信息,并采集病例粪便标本进行病原体检测,运用χ²检验比较不同学段中小学生食源性疾病病例的分布。结果 共监测中小学生食源性疾病病例1 432例。不同可疑暴露食品的分类和进食场所的病例数有统计学差异（χ²= 73.421;χ² = 66.857,P均＜0.001）,可疑暴露食品主要为肉与肉制品（28.21%）和水产动物及其制品（17.86%）,可疑进食场所主要为家庭（57.60%）和学校食堂（12.69%）。疑似食源性疾病暴发事件主要发生在学校食堂。共采集标本214份,检出病原体22份,总体检出率为10.28%,阳性病原体以诺如病毒（3.74%）和副溶血性弧菌（3.27%）为主。结论 需面向家庭、学校和学生开展有针对性的食品安全知识宣传,加强中小学生食源性疾病的重点食品和场所的食品安全监测和监管,最大限度地减少中小学生食源性疾病的发生。     

益糖康通过抑制AGE/RAGE信号通路改善骨骼肌细胞凋亡的机制

目的：研究益糖康通过抑制糖基化终末产物(AGE)/糖基化终末产物受体(RAGE)信号通路纠正骨骼肌细胞过度凋亡进而改善胰岛素抵抗(IR)的作用机制。方法：(1)体外实验,制备益糖康含药血清,将C2C12细胞设置空白组、模型组、益糖康含药血清高、中、低剂量(40、20、10 g·kg^-1)组、RAGE抑制剂组,除空白组外,用棕榈酸诱导C2C12 IR模型细胞,然后分别采取相应的干预方式后检测各组细胞的活性及葡萄糖消耗量水平,用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测重要凋亡蛋白[B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、p53、胱天蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-9]的mRNA及蛋白表达水平。(2)体内实验,将96只符合研究标准的Wistar大鼠设置空白组、对照组、益糖康高、中、低剂量组(40、20、10 g·kg^-1)、吡格列酮(1.35 mg·kg^-1)组,运用高糖高脂糖尿病模型诱导饲料联合...     

基于GSK-3β/CREB信号通路探讨加味肾气丸减轻糖尿病小鼠肾间质纤维化的作用机制

目的 观察加味肾气丸对糖尿病肾病小鼠肾功能及纤维化的影响,并基于糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）/环磷腺苷效应原件（CREB）信号通路探讨其可能的作用机制。方法 雄性db/db小鼠50只,db/m小鼠10只。50只db/db小鼠按体质量随机分为模型组、厄贝沙坦组、加味肾气丸低、中、高剂量组。db/m小鼠10只为正常组。加味肾气丸低、中、高剂量组中药颗粒剂混悬液灌胃,厄贝沙坦组给予厄贝沙坦混悬液灌胃,正常组及模型组予等体积蒸馏水灌胃,连续干预12周。分别记录治疗前后小鼠的血糖和尿白蛋白肌酐比（UACR）及小鼠肾脏中GSK-3β、CREB、转化生长因子-β₁（TGF-β₁）、钙黏蛋白E（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、纤维粘连蛋白（FN）、纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）、Ⅳ型胶原蛋白（Col Ⅳ）蛋白的表达水平,并观测小鼠肾脏的病理损伤程度。结果 与正常组比较,模型组小鼠血糖、UACR水平及肾脏中GSK-3β、TGF-β₁、E-cadherin、Vimentin、FN、PAI-1、Col Ⅳ蛋白的表达水平明显升高（P<0.05）,CREB蛋白表达水平明显下降（P<0.05）,小鼠肾脏病理损伤严重;与模型组比较,肾气丸低、中、高剂量组和厄贝沙坦组小鼠血糖、UACR水平及肾脏中GSK-3β、TGF-β₁、E-cadherin、Vimentin、FN、PAI-1、Col Ⅳ蛋白的表达水平均有不同程度下降（P<0.05）,CREB蛋白表达水平升高（P<0.05）,小鼠肾脏病理损伤有不同程度的减轻。结论 肾气丸可有效降低血糖、改善肾功能和纤维化,其作用机制与其抑制GSK-3β/CREB信号通路有关。