rhBMP-2诱导颅神经嵴细胞向神经元分化的体外研究

目的；观察重组人骨形成蛋白2（rhBMP-2）对颅神经嵴细胞的诱导发化作用。方法：分别用不含rhBMP-2的无血清培养液和含有不同浓度rhBMP-2的培养液对颅神经嵴细胞进行培养。10d后，观察两组细胞的形态学差别，用胶质纤维酸性蛋白（GFAP），神经纤维细丝蛋白（NF），颅神经嵴细胞的特异性抗体P75等抗体进行免疫组化染色，鉴定细胞的分化状态，并计算NF阳性细胞数的百分比及进行统计分析。结果：在含有rhBMP-2的培养液中，颅神经嵴细胞的形态由成纤维细胞样向神经元样的表型进行转变，可见较长的细胞突起出现。NF染色结果阳性，而GFAP，P75染色结果阴性。50ng/mL组中，NF的阳性细胞数比其它浓度组明显增多，并有显著性差异（P＜0．05）。结论：rhBMP-2可以诱导颅神经嵴细胞向神经元进行分化，50ng/mL是其中最有效的诱导浓度。     

Dual action of n-alcohols on neuronal nicotinic acetylcholine receptors

Alcohol is known to modulate the activity of a variety of neuroreceptors and ion channels. Recently, neuronal nicotinic acetylcholine receptors (nnAChRs) have become a specific focus of study because not only are they potently modulated by alcohol but also they regulate the release of various transmitters, including gamma-aminobutyric acid (GABA) and dopamine, which play an important role in the behavioral effects of ethanol. Whereas the potency of normal alcohols (n-alcohols) to potentiate GABA(A) receptors and to inhibit N-methyl-D-aspartate receptors increases with carbon chain length, we have found that n-alcohols, depending on the carbon chain length, exert a dual action, potentiation and inhibition, on nnAChRs in primary cultured rat cortical neurons. The mechanism of dual action of n-alcohols on nnAChRs was further analyzed using human embryonic kidney cells expressing the alpha 4 beta 2 subunits. Shorter chain alcohols from methanol to n-propanol potentiated acetylcholine (ACh)-induced currents, whereas longer chain alcohols from n-pentanol to n-dodecanol inhibited the currents. n-Butanol either potentiated or inhibited the currents depending on the concentrations of ACh and butanol. The parameters for both potentiation (log EC(200)) and inhibition (log IC(50)) were linearly related to carbon number, albeit with different slopes. The slope for potentiation was -0.299, indicating a change in free energy change (Delta Delta G) of 405 cal/mol/methylene group, whereas the slope for inhibition was -0.584, indicating a Delta Delta G of 792 cal/mol. These results suggest that potentiating and inhibitory actions are exerted through two different binding sites. Ethanol decreased the potency of n-octanol to inhibit ACh currents, possibly resulting from an allosteric mechanism.     

War Wounds — Changing Concepts

The accepted standard treatment of war wounds through the last century has been debridement and delayed primary closure. However, recently, there has been a renewed Interest In primary closure of these wounds. 1481 war wounds were managed by the authors and out of 789 soft tissue injuries, 389 (47%) were closed primarily (group 1) after meticulous debridement and 220 (28%) underwent delayed primary closure (group 2). The infection rate in group 1 was 4.87% compared to 6.36% in group 2. The average hospital stay in group 1 was 15 days, significantly shorter by 10 days than in group 2. In the war zone both time and resources are at a premium and primary closure of selected wounds offers a better alternative to delayed primary closure.Key Words: Debridement, Delayed primary closure, Primary closure, War Wounds     

DERMAL NEUROVASCULAR DYSFUNCTION IN TYPE 2 DIABETES

The present article summarizes recent observations obtained in our laboratory which clearly indicate that sex steroids exert relevant effects on the peripheral nervous system. In particular, the following important points have emerged: (1) Steroids exert stimulatory actions on the synthesis of the proteins proper of the peripheral myelin (e.g., glycoprotein Po and peripheral myelin protein 22) in vivo and on the Schwann cells in culture; (2) in many cases the actions of hormonal steroids are not due to their native molecular forms but rather to their metabolites (e.g., dihydroprogesterone and tetrahydroprogesterone in the case of progesterone; dihydrotestosterone and 5 alpha-androstane-3 alpha,17 beta -diol in the case of testosterone); (3) the mechanism of action of the various steroidal molecules may involve both classical (progesterone and androgen receptors) and nonclassical steroid receptors (GABA, receptor); and finally, (4) the stimulatory action of steroid hormones on the proteins of the peripheral myelin might have clinical significance in cases in which the rebuilding of myelin is needed (e.g., aging, peripheral injury, demyelinating diseases, and diabetic neuropathy).     

左旋精氨酸与褪黑激素对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的:诱导型一氧化氮合酶来源的一氧化氮与内皮型一氧化氮合酶来源的一氧化氮的平衡对维持血流动力学稳定及内环境动态平衡有重要作用.观察左旋精氨酸与褪黑激素对肾脏缺血再灌注损伤中诱导型一氧化氮合酶与内皮型一氧化氮合酶的影响.方法:实验于2006-07/2007-03在中山大学医学院动物实验中心完成.①实验分组:健康雄性清洁级SD大鼠60只,体质量170～210 g,随机数字表法分为缺血再灌注组、左旋精氨酸治疗组、褪黑激素治疗组、联合治疗组,每组15只.②实验方法:建立大鼠肾脏缺血再灌注损伤模型,术前1 h各组大鼠腹腔内注射生理盐水及相应药物,每隔24 h重复注射1次,连续5d.③实验评估:观察各组术前及术后1,3,5 d血肌酐、诱导型一氧化氮合酶和内皮型一氧化氮合酶的变化规律及肾脏病理组织学的改变,并采用Paller法对术后第3天肾小管进行评分.结果:纳入大鼠60只,均进入结果分析.①血肌酐的表达:术后第1天联合治疗组水平显著低于缺血再灌注组(P＜0.05);术后第3,5天左旋精氨酸治疗组、褪黑激素治疗组与联合治疗组显著低于缺血再灌注组(P＜0.05).②内皮型一氧化氮合酶的表达:术后第3天缺血再灌注组比术前降低(P＜0.05);术后第3天和第5天左旋精氨酸治疗组、联合治疗组高于缺血再灌注组(P＜0.05).③诱导型一氧化氮合酶的表达:术后第1天缺血再灌注组与术前相比升高,第3天达到高峰,第5天仍高于术前(P＜0.05);褪黑激素治疗组、联合治疗组术后第3天与第5天明显低于缺血再灌注组(P＜0.05).④血肌酐水平与诱导型一氧化氮合酶的表达呈正相关,r=0.57,P＜0.01,与内皮型一氧化氮合酶/诱导型一氧化氮合酶呈负相关,r=-0.61,P＜0.01.⑤肾小管损伤Palller法评分:依次为联合治疗组＜褪黑激素治疗组＜左旋精氨酸治疗组＜缺血再灌注组.结论:通过调高内皮型一氧化氮合酶的表达、抑制诱导型一氧化氮合酶的表达可以减轻肾脏缺血再灌注损伤,联合应用左型精氨酸与褪黑激素即通过以上途径更有效的起到对肾脏缺血再灌注损伤的保护作用.     

pcDNA3．1-VEGF165质粒转染骨髓基质干细胞后血管内皮生长因子的表达

目的:检测pcDNA3.1-VEGF165载体转染对兔骨髓基质干细胞血管内皮生长因子表达的影响。方法:实验于2005-07/2006-01在山东省青岛市市立医院中心试验室完成。①pcDNA3.1-VEGF165质粒由华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科杨述华教授惠赠。②选取1月龄新西兰大白兔1只,无菌条件下取胫骨和股骨,进行骨髓基质干细胞的分离与培养。③转染前24h计数细胞,每孔5×105细胞接种于6孔板,待骨髓基质干细胞达到80%～90%融合时准备转染,设立未转染组、空载体组和载体组。未转染组无特殊处理,空载体组转染pcDNA3.1载体,载体组转染pcDNA3.1-VEGF165。④转染后72h,反转录聚合酶链反应检测各组骨髓基质干细胞中血管内皮生长因子165mRNA的表达;酶联免疫吸附法检测各组骨髓基质干细胞中血管内皮生长因子165蛋白的含量。结果:①骨髓基质细胞分离培养形态观察:初始分离的骨髓细胞呈圆形,大小不一;24h后有少量细胞贴壁;48h后贴壁细胞部分为成纤维样细胞;72h贴壁的成纤维样细胞数不断增加;96h后贴壁生长的细胞主要为梭形的成纤维样细胞;分瓶后细胞形成克隆;传代后细胞贴壁生长,分裂相增多,并不断增殖分化形成均一的梭形细胞。②转染72h后各组细胞血管内皮生长因子165mRNA的表达情况:反转录聚合酶链反应检测到载体组在576bp处有明显条带,空载体组和未转染组均未见血管内皮生长因子165表达。③转染72h后各组细胞血管内皮生长因子165蛋白含量检测结果:酶联免疫吸附结果显示,载体组转染pcDNA3.1-VEGF165载体的骨髓基质细胞培养上清液中血管内皮生长因子165蛋白浓度为(170.1±14.3)ng/L,而空载体组与未转染组均未检测到血管内皮生长因子165蛋白表达,差异有显著性意义(t均=42.206,P=0.000)。结论:应用pcDNA3.1-VEGF165载体转染,可使兔骨髓基质干细胞获得外源性血管内皮生长因子165基因和蛋白的表达。     

外括约肌主动收缩放松训练改善肛门失禁患者的肛门节制

目的:观察肛门失禁患者进行外括约肌主动收缩和放松的生物反馈训练后肛门节制功能的变化,分析外括约肌主动收缩训练改善肛门节制的可能机制。方法:于1998-10/1999-05在解放军总医院小儿外科采用CTD-SYNECTICS公司生产的直肠测压仪对27例正常儿童和另12例失禁患儿进行括约肌主动收缩状态下压力的测定,得到外括约肌收缩压力增加值。2004-10/2006-05在解放军总医院小儿外科采用生物反馈训练仪(CTD-SYNECTICS公司生产,通过可视动画形式和可听的声音高低信号形式将直肠肛门动力情况反映出来,通过指导者的语言讲解,配合正确的动画曲线和声音信号的指导训练,纠正异常的直肠肛门动力。)对13例不同年龄段的失禁患者进行括约肌主动收缩和放松的生物反馈训练。其中儿童7例,成人6例。每次外括约肌持续收缩的时间根据患者的耐受程度一般为5～10s,放松10s,完成6～8次上述收缩和放松动作后休息10min。儿童每次持续1～1.5h,成人1.5～2h,平均训练6次。记录首末次训练外括约肌收缩电位平均值的变化;直肠测压获得的距离肛门缘3,2,1cm层面8个方向外括约肌收缩压力的增加值。结果:全部参与实验的正常儿童27例、肛门失禁患儿12例和接受生物反馈训练的失禁患者13例均进入结果分析。①接受生物反馈训练的肛门失禁患者中10例末次训练外括约肌收缩电位的平均值显著大于首次训练(P<0.05),治疗有效率为76.92%(10/13)。②肛门失禁患者生物反馈训练前肛门外观呈开口状态,黏膜轻度外翻;10例经生物反馈训练治疗有效者肛门外观呈关闭状态,黏膜外翻消失。③正常儿童肛门外括约肌收缩状态下,距离肛门缘3,2,1cm层面,各方向括约肌收缩压力增加值分别为,后(6.133±7.263),(9.358±6.652),(9.412±6.628)kPa;右后:(2.611±2.609),(7.131±5.583),(7.116±6.355)kPa;右:(4.000±5.430),(8.810±6.271),(9.343±6.267)kPa;右前:(3.111±7.812),(7.264±7.441),(10.860±7.575)kPa;前:(2.467±6.559),(5.674±7.080),(11.600±8.099)kPa;左前:(2.289±5.876),(5.837±6.865),(12.390±9.169)kPa;左:(3.422±6.710),(7.161±6.313),(11.906±7.782)kPa;左后:(4.678±7.482),(8.252±6.537),(10.227±6.836)kPa,失禁患儿既不存在这种收缩压力增加值的显著梯度变化,也不存在压力增加值的方向变化。结论:正常儿童由近端向远端存在外括约肌主动收缩时存在压力显著增大的梯度变化,且存在外括约肌后方高压向前方高压的转变,形成对直肠肛门的直接方向压迫作用;失禁患儿无上述变化,可能是形成肛门失禁的机制之一。外括约肌主动收缩放松的生物反馈训练能加强外括约肌的收缩电位,有助于形成外括约肌压力纵向梯度变化及对直肠肛门的直接反向压迫机制。     

西山医院脊髓损伤功能量表内容介绍

目的:介绍一套新的脊髓损伤功能评价量表。方法:综合目前使用的各种常用脊髓功能量表,结合实际工作经验及脊髓损伤患者神经功能改善特点,制定了西山医院脊髓损伤功能量表。结果:西山医院脊髓损伤功能量表共分9大项16小项,采用4分制,正常为3分,最差为0分。总分0～48分,0～16分为重度残障,17～32分为中度残障;33～47分为轻度残障,48分正常。量表包括上肢运动功能(饮食、梳洗、书写)、下肢运动功能(站立、行走)、躯干运动功能(坐、翻身)、全身运动功能(床椅转移、穿脱衣服、洗澡)、括约肌功能(膀胱功能、直肠功能)、肌张力、泌汗、皮肤营养、疼痛、性功能。结论:西山医院脊髓损伤功能量表是一套专门应用于脊髓损伤患者功能评价量表。该量表能全面、精确评定患者功能,简便实用、费时短。应用这份功能量表,既能客观反映患者的功能变化,随访时又不增加患者负担,同时也能减轻医务工作者的负担。     

海军陆战队员高温强训中注射丹参液前后血液流变学与凝血功能的变化

目的:观察高温高湿环境下负荷30kg野外强训时,注射丹参液前后海军陆战队员血液流变学和凝血系统的变化。方法:于2005-08在南海海面和某岛屿上选择男性解放军海军陆战队员112名,经医院全面检查身体合格,18～32岁,军龄1～14年。成建制的随机抽取55名作为训练组,负重30kg参加高温高湿环境下各种强训,另外57名陆勤人员作为对照组。训练组注射丹参液前后高温强训各8h,训练末各取1次血标本,检查两组队员凝血功能5项指标及血液流变学14项指标。结果:112名海军陆战队员均进入结果分析。①未注射丹参液前训练组全血低切黏度、全血中切黏度、全血高切黏度、血浆黏度、红细胞比积、红细胞沉降率、全血低切还原黏度、全血中切还原黏度、全血高切还原黏度、血沉方程K值、红细胞聚集指数、红细胞刚性指数、红细胞变性指数、红细胞电泳指数均高于对照组[训练组:(9.4±0.3)mPa.s,(5.6±0.4)mPa.s,(4.7±0.3)mPa.s,(1.5±0.2)mPa.s,(47.4±3.1)%,(7.3±1.1)mm/h,(19.4±3.8)mPa,s,(9.7±1.5)mPa.s,(8.0±1.5)mPa.s,(61.4±10.5),(2.7±0.2),(5.5±1.0),(0.8±0.1),(6.4±1.3);对照组:(8.1±0.5)mPa.s,(4.7±0.3)mPa.s,(4.1±0.3)mPa.s,(1.3±0.2)mPa.s,(44.8±3.3)%,(8.5±1.4)mm/h,(15.5±2.4)mPa.s,(8.2±1.5)mPa.s,(7.4±1.6)mPa.s,(51.8±9.7),(2.4±0.4),(4.5±0.8),(0.7±0.3),(5.3±1.1),P<0.05,P<0.01]。注射丹参液后训练组全血低切黏度、红细胞比积高于对照组[(8.7±0.3)mPa.s,(46.5±3.1)%;(8.1±0.5)mPa.s,(44.8±3.3)%,P<0.05]。②注射丹参液前训练组凝血酶原时间、部分活化凝血酶原时间、纤维蛋白原、D-二聚体、血清纤维蛋白降解产物、血小板与对照组相比,差异显著[训练组:(10.2±0.2)s,(23.9±1.1)s,(3.8±0.2)g/L,(309.6±13.3)mg/L,(7.7±0.4)mg/L,(270.1±14.2)×109L-1;对照组:(11.6±0.3)s,(28.4±1.4)s,(2.9±0.4)g/L,(241.5±13.7)mg/L,(5.9±1.2)mg/L,(174.5±22.0)×109L-1,P<0.01]。注射丹参液后训练组血小板、D-二聚体、纤维蛋白降解产物高于对照组[训练组:(236.2±11.2)×109L-1,(279.3±13.8)mg/L,(8.2±0.6)mg/L;对照组:(174.5±22.0)×109L-1,(241.5±13.7)mg/L,(5.9±1.2)mg/L,P<0.05,P<0.01],凝血酶原时间、部分凝血活酶时间、纤维蛋白原与对照组相比无差异。结论:注射丹参液可增强红细胞的柔软性,改善红细胞变形和聚集能力,降低纤维蛋白原含量,防止血液高黏发生。     

彩色超声多普勒引导器官移植术患者颈内静脉穿刺及对并发症的监控效应

目的:为提高器官移植术患者颈内静脉穿刺置管的成功率及其安全性,减少并发症,应用彩色多普勒超声引导颈内静脉穿刺置管,并与采用传统的体表标志法穿刺者进行对比观察。方法:选择2004-11/2007-04南京医科大学附属无锡第一医院收治,预计穿刺较困难的肝移植及肾移植手术患者70例,根据患者意愿分为彩超定位组和对照组各35例。彩超定位组应用HDI5000型彩色多普勒超声显像仪进行实时立体定位,引导行颈内静脉穿刺置管并定期监控;对照组采用传统的体表标志法定位行颈内静脉穿刺置管。记录穿刺置管时间、成功率和并发症,穿刺置管成功后定期监控置入导管所在血管的血流情况、有无血栓形成或栓塞及飘浮导管的位置是否合适等。结果:70例均进入结果分析。①彩超定位组穿刺置管操作时间少于对照组(P<0.001)。②彩超定位组46次穿刺操作均一次成功,43次经颈内静脉单壁直接穿入,3例次穿过双壁,经稍退针后成功穿入,无一例次发生误穿动脉或其他并发症;对照组45次穿刺中,一次直接成功者20例次,6例次曾误穿入动脉。③21例肝移植患者均成功置入飘浮导管全程行有创心功能监测,术后监测发现4例有早期血栓形成。结论:①将彩色多普勒超声技术用于器官移植术患者颈内静脉穿刺时进行立体定位,引导穿刺置管,可明显提高穿刺置管的成功率和安全性。②通过术后定期监控,可了解导管位置是否保持准确及有无血栓形成等并发症发生。