人受体活性修饰蛋白1基因修饰的骨髓间充质干细胞移植对兔血管成形术后新生内膜的影响

目的: 探讨人受体活性修饰蛋白1( hRAMP1 )基因修饰的骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对动脉粥样硬化模型兔颈动脉球囊成形术后新生内膜增殖的影响。方法: 密度梯度离心法加贴壁培养法获得MSCs,并以携带 hRAMP1 的腺病毒转染MSCs获得 hRAMP1 基因修饰的MSCs(hRAMP1-MSCs)。建立动脉粥样硬化狭窄并球囊损伤血管成形术的兔模型,随机分为hRAMP1-MSCs组、MSCs组和对照组,模型建立成功后经耳缘静脉分别注射携带pAd2-EGFP-hRAMP1或pAd2-EGFP的MSCs和PBS,于细胞移植后7 d、14 d和28 d分别处死动物取材, 观察MSCs归巢、血管内皮化程度及内膜增生程度,同时检测血清血管内皮生长因子(VEGF)水平和血管局部内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)表达。结果: 细胞移植后不同时点hRAMP1-MSCs组和MSCs组损伤血管增生内膜均有CD31和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)分布,但以 hRAMP1-MSCs组内皮化程度明显,MSCs组次之,两者与对照组比较均有显著差异(P<0.05);细胞移植后不同时点hRAMP1-MSCs组和MSCs组内膜增生面积及再狭窄率均低于对照组(P<0.05),尤以hRAMP1-MSCs组降低明显;细胞移植后不同时点hRAMP1-MSCs组和MSCs组血清VEGF水平和血管eNOS表达较对照组增加(P<0.05),而 hRAMP1-MSCs组又明显高于MSCs组(P<0.05);损伤血管新生内膜增殖细胞核抗原(PCNA)阳性表达在hRAMP1-MSCs组最少,对照组最多。结论: hRAMP1 基因修饰的MSCs能更有效促进损伤内膜快速内皮化,重组 hRAMP1 腺病毒载体不影响MSCs向内皮细胞分化潜能。基因联合干细胞治疗能更好地促进损伤动脉快速内皮化,降低血管成形术后再狭窄。     

Nrf2参与MSCs调节大鼠梗死心肌氧化应激作用的实验研究

目的 探讨间充质干细胞（MSCs）移植对梗死心肌组织氧化应激反应的调节作用及其机制.方法 建立心肌梗死大鼠模型,利用随机数字表进行随机化分组,分为对照组（n=20）、MSC移植组（n=20）和MSC移植＋HO-1抑制剂组（n=20）.以密度梯度离心并贴壁培养获得骨髓源MSCs,于心肌梗死模型建立后经心肌局部多点注射MSCs悬液;细胞移植后不同时间点以测定血浆以及心肌梗死和梗死交界区组织超氧化物歧化酶（SOD）、还原型谷酰甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）水平;Western Blot检测Nrf2和HO-1蛋白表达的变化.结果 细胞移植后8 h,3组大鼠梗死组织中SOD、GSH表达量开始下降,72 h时达到最低,以后逐渐开始回升,至两周时恢复接近心肌梗死前水平;同时,细胞移植后梗死组织中脂质氧化终产物MDA水平开始增高,3组均在72 h达到高峰（P〈0.05）,以后开始下降,至2周时降至梗死前水平.细胞移植后各时间点,与对照组比较,MSC移植组SOD和GSH含量下降幅度减小、恢复较快（P〈0.05）,且MDA含量减少（P〈0.05）.对照组梗死心肌组织中Nrf2及HO-1蛋白表达轻微升高,72 h时最显著;而MSC移植组中Nrf2和HO-1蛋白表达显著增高,且升高时间提前至细胞移植后24～72 h,且与对照组比较,细胞移植后24 h和72 h,Nrf2和HO-1表达水平均高于对照组（P〈0.05）;MSC移植＋HO-1抑制剂组与对照组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）.结论 心肌梗死后移植MSCs可能通过促进局部Nrf2及其下游抗氧化酶靶基因HO-1蛋白表达而调节梗死心肌的氧化应激反应,进而减轻氧化应激诱导的心肌损伤.     

高龄急性冠脉综合症患者急诊介入治疗对临床预后的影响

目的研究高龄老年急性冠脉综合征患者（ACS）行急诊经皮冠状动脉介入治疗（PCI）的安全性和有效性。方法高龄老年（≥80岁）ACS患者37例,分为PCI组（n=16）和对照组（n=21）,比较两组患者基本临床情况和住院期间及随访30d时主要不良心脑血管事件（MACCEs）的发生率。结果两组患者基线特征无差异;冠状动脉造影结果显示PCI组患者完全闭塞病变占50％以上,几乎所有患者均成功植入支架治疗。住院期间,PCI组和对照组患者MACCEs发生率分别为37．50％和28．57％（P=0．682）,主要为死亡、心力衰竭和非致命性出血;随访30d时,PCI组和对照组MACCEs发生率分别为15．79％和13．33％（P=0．578）,主要包括死亡和因心力衰竭或上消化道出血而再住院。结论≥80岁的高龄ACS患者行PCI治疗是安全有效的,且并不增~IMACCEs发生率;同时支架选择宜个体化。     

不同剂量阿托伐他汀短期治疗对急性冠脉综合征患者血清hs—CRP和MMP-9水平的影响

目的探讨应用不同剂量阿托伐他汀短期治疗对急性冠脉综合征患者血清高敏C反应蛋白（hs—CRP）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）水平的影响。方法选择确诊的急性冠脉综合征患者63例,随机分为A组（22例,阿托伐他汀10mg／d）、B组（20例,阿托伐他汀20mg／d）和C组（21例,阿托伐他汀80mg／d）,均于确诊后24小时内开始给药,其余用药按常规进行。所有患者均于服用阿托伐他汀前及服药后24小时、3天、7天采集静脉血,ELISA法测定血清hs—CRP和MMP-9水平。结果3组患者的临床基础资料比较无显著性差异;与治疗前比较服用阿托伐他汀3天后,C组血清hs—CRP和MMP-9水平明显减低（P〈0．05）,而A、B两组虽有下降趋势,但差异无统计学意义;7天后,3组患者血清hs—CRP和MMP-9水平均明显降低（P〈0．05）;C组患者血清hs—CRP和MMP-9水平明显低于A组和B组（P〈0．05）;3组均未发现阿托伐他汀相关不良反应。结论急性冠脉综合征患者短期给予大剂量阿托伐他汀治疗可发挥其强大的抗炎作用,明显降低血浆hs—CRP和MMP-9水平。     

慢病毒介导的降钙素基因相关肽转染对大鼠骨髓间充质干细胞内皮分化的影响

 目的：研究慢病毒介导的降钙素基因相关肽（calcitonin gene-related peptide,CGRP）基因转染对大鼠骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）内皮分化功能的影响。方法：用密度梯度离心结合贴壁法培养大鼠骨髓MSCs,携带CGRP的慢病毒载体转染MSCs,未转染MSCs作为对照,应用ELISA法检测CGRP蛋白表达;实验分为转染Lenti-CGRP的MSCs（CGRP）组、转染Lenti-CGRP的MSCs+CGRP受体拮抗剂（CGRP8-37）组（CGRP +CGRP8-37）及未经转染的对照组。应用免疫细胞化学检测细胞CD31和Ⅷ因子相关抗原的表达以鉴定其分化能力;细胞计数法观察转染CGRP后MSCs增殖的影响;Matrigel实验观察转染CGRP对MSCs形成管腔样结构能力的影响。结果：MSCs转染CGRP基因经诱导分化后的CD31和Ⅷ因子相关抗原阳性细胞数量增多,与对照组相比有显著差异(P<0.05);转染CGRP组细胞数量增长较快,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);Matrigel实验显示转染CGRP组细胞微血管新生明显,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。而CGRP+CGRP8-37组上述作用明显被抑制。结论: 转染CGRP基因能促进MSCs向内皮分化,并能促进内皮细胞增殖,在一定的条件下,可促进微血管新生。     

多发性大动脉炎17例临床分析

多发性大动脉炎是主动脉及其主要分支的慢性非特异性炎症性疾病，临床表现复杂多样，临床误诊和漏诊率较高，是本病目前突出的问题。我院自2002年引进数字减影装置后，5例经数字减影血管造影检查明确诊断并分型，现就近10年我院收治的多发性大动脉炎17例患者进行回顾性临床分析，并报告如下。     

不同血液净化方法对鱼胆中毒的疗效比较

目的研究不同血液净化方法对鱼胆中毒的治疗价值。方法回顾分析65例鱼胆中毒的临床资料。在常规治疗的基础之上,采用血液透析（hemodialysis,HD）治疗28例,透析时间3~6h血液灌流（hemoperfusion,HP）-HD序贯性血液净化治疗20例,先HP灌流2h,随后立即进行HD透析4—6h;HP治疗17例,灌流时间2h。结果HP-HD组、HD组、HP组的有效率分别为90．0％、60．7％、47．1％,病死率分别为5．0％、32．1％、41．1％,净化次数分别为5．0±1．0次、8．6±2．1次、9．0±2．5次,少尿持续时间分别为6．0±1．7d、8．8±2．1d、9．4±2．8d,肝功能恢复正常时间分别为13．5±3．1d、18．9±4．0d、19．3±4．7d（HP—HD组与HD、HP组比较P〈0．05,HD组与HP组比较P〉0．05）,肾功能恢复正常时间分别为16．2±3．4d、20．6±4．3d、25．8±5．6d（HP—HD组与HD、HP组各组间比较P〈0．05）。结论HP—HD序贯性血液净化是治疗鱼胆中毒的最有效方法之一。     

Toll样受体4激活Wnt/β-catenin信号通路促进骨髓间充质干细胞增殖

目的探讨Toll样受体(TLR)4激活后调控Wnt/β-catenin信号通路促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)的增殖及其相关机制。方法体外培养BMSCs,应用流式细胞术鉴定BMSCs,用脂多糖(LPS)剌激BMSCs,应用CCK-8法检测BMSCs的增殖能力;采用Western印迹检测大鼠BMSCs中TLR4蛋白表达;实验分为对照组、LPS组、TLR4阻断剂+LPS组、Wnt通路经典抑制剂(DKK-1)+LPS组。应用实时荧光定量PCR法检测BMSCs中β-catenin、c-myc及细胞周期蛋白(cyclin)D1 mRNA表达,应用Western印迹检测蛋白表达。结果与对照组相比,LPS组BMSCs的细胞增殖能力明显增强,TLR4呈高表达(均P<0.01);LPS组β-catenin、c-myc和cyclin D1表达显著增加(P<0.01)。与LPS组相比,加入TLR4阻断剂后,β-catenin、c-myc和cyclin D1表达显著下调(P<0.05,P<0.01),加入DDK-1后,β-catenin、c-myc和cyclin D1表达显著降低(均P<0.01)。结论 TLR4促进BMSCs的增殖,其机制可能与调节Wnt/β-catenin信号通路有关。     

hRAMP1基因修饰BMSCs对心脏的保护作用及其机制

目的探讨人受体活性修饰蛋白(hRAMP)1基因修饰骨髓间充质干细胞(BMSCs)对心功能的影响及其机制。方法分离和培养兔BMSCs,流式检测细胞表面标记鉴定,建立兔心肌梗死再灌注模型,随机分为3组:Ad-EGFP-hRAMP1-BMSCs(hRAMP1-BMSCs组),Ad-EGFP-BMSCs(BMSCs组)和对照组,检测血管腔面CD31表达情况及血管内皮生长因子(VEGF)和核因子(NF)-κB表达水平,并比较超声心动图指标。结果骨髓细胞分离24 h后开始贴壁,后呈鱼群状、漩涡状排列生长,经传代后细胞逐渐呈长梭形,呈现成纤维细胞样外观。CD29阳性率95.79%,CD45阳性率12.49%和CD90阳性率98.58%。BMSCs移植后损伤侧血管腔面可见被EGFP标记呈绿色荧光的BMSCs,而对侧(未损伤血管)未检测到EGFP荧光信号。经TRITC标记的CD31在BMSCs表达处发出红色荧光,阳性转染组出现CD31和EGFP表达。细胞移植后28 d,BMSCs组及hRAMP1-BMSCs组VEGF表达显著高于对照组,NF-κB水平显著低于对照组(均P0.01);hRAMP1-BMSCs组VEGF表达显著高于BMSCs组,NF-κB水平显著低于BMSCs组(均P0.01)。hRAMP1-BMSCs组LVDd和LVDs均明显降低,LVFS和LVEF均明显增加(均P0.01)。结论 hRAMP1修饰BMSCs具有延缓及改善左室重构作用;其机制是通过hRAMP1修饰BMSCs可分化为血管内皮细胞,参与血管生成。     

参麦注射液对内毒素诱导心肌细胞凋亡的抑制作用及机制

目的 探讨参麦注射液对内毒素诱导心肌细胞凋亡的影响。方法 原代培养乳鼠心肌细胞,分为对照组,内毒素（LPS）处理组,参麦注射液（SMI）+内毒素（LPS）处理组。MTT法检测心肌细胞存活率;流式细胞仪检测心肌细胞凋亡;RT - PCR检测心肌细胞Wnt2、β - catenin mRNA的表达;Western blot 检测心肌细胞内Wnt2、β - catenin蛋白表达。结果 0.8 g/L 与1 g/L SMI组心肌细胞存活率高于LPS组;0.8 g/L 与1 g/L SMI组心肌细胞凋亡率低于LPS组。SMI + LPS组中Wnt2、β - catenin mRNA的表达随SMI剂量的增加而降低,0.8 g/L SMI组中β - catenin mRNA表达低于LPS组,1g/L SMI组中Wnt2、β - catenin mRNA表达低于LPS组; SMI + LPS组中Wnt2、β - catenin蛋白的表达随SMI剂量的增加而降低,0.8 g/L SMI组中β - catenin蛋白表达低于LPS组,1g/L SMI组中Wnt2、β - catenin蛋白表达低于LPS组,差异有统计学意义(P ＜0.05)。结论 参麦注射液对内毒素诱导的乳鼠心肌细胞凋亡具有明显的抑制作用,其机制可能与抑制Wnt2、β - catenin的表达有关。