腺病毒载体介导hRAMP1调节兔颈动脉球囊损伤后炎症细胞因子表达对增生内膜的影响

目的探讨腺病毒载体介导人受体活性修饰蛋白-1(receptor activity modifying protein-1,hRAMP1)基因对兔颈动脉粥样硬化并球囊成形术后炎性细胞因子表达的影响。方法建立兔动脉粥样硬化狭窄模型并行球囊损伤血管(简称血管成形术),随机抽样分为RAMP1组(n=18)和对照组(n=18),经球囊局部注射携带hRAMP1基因腺病毒载体(pAd2-GFP-RAMP1)或PBS,于注射后7、14 d和28 d,应用ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和C-反应蛋白(CRP)表达水平;Western blot检测局部hRAMP1目的基因表达;免疫组织化学染色测定血管局部TNF-α表达,HE染色检测血管形态学。结果血管成形术后不同时间点TNF-α表达增加[7 d:(74.13±4.99),14 d:(93.40±6.69),28 d:(67.46±6.57)],外源hRAMP1注射后TNF-α表达下降[7 d:(64.95±6.77),14 d:(75.29±4.73),28 d:(45.08±5.00),P<0.05],病毒注射后7 d和14 d RAMP1组CRP水平[7 d:(29.27±1.57),14 d:(9.68±1.60)]与对照组比较[7 d:(43.96±7.88),14 d:(13.51±1.68)]显著下降(P<0.05),28 d 2组间无差异性;腺病毒注射后28 d损伤血管局部仍检测到hRAMP1蛋白表达,同时RAMP1组局部TNF-α表达与对照组比较明显下降,HE染色显示:RAMP1组新生内膜面积[7 d:(0.07±0.18),14 d:(0.15±0.05),28 d:(0.35±0.05)]与对照组[7 d:(0.14±0.02),14 d:(0.39±0.09),28 d:(0.56±0.05]比较明显降低(P<0.05)。结论外源hRAMP1基因调节兔动脉粥样硬化并血管成形术后CRP和TNF-α的表达,抑制血管成形术后再狭窄。     

以吞咽困难就诊的混合性结缔组织病误诊1例

患者,女,51岁,因进行性吞咽困难6个多月,加重伴呕吐20多天于2014年2月21日入院。6个多月前无明显诱因出现吞咽困难,伴四肢乏力,外院诊断反流性食管炎,治疗无好转。20多天前症状加重,伴头昏、头痛、胸骨后烧灼样疼痛、呕吐,阵发性咳嗽、咳痰,四肢关节肌肉多处疼痛。6个多月来体重下降10多公斤。入院体格检查：体温37℃,脉搏84次/ min,呼吸20次/ min,血压120/68 mmHg。神志清楚,表情淡漠。双肺闻及细湿啰音。肺动脉瓣听诊区闻及Ⅱ级收缩期吹风样杂音,胸骨左缘3～4肋间闻及心包摩擦音。上腹压痛,无肌紧张及反跳痛。双手肿胀,双下肢轻度凹陷性水肿,其余无异常。辅助检查：胸部 CT 提示间质性肺部病变,少量胸腔积液或胸膜增厚,纵隔、右肺门及双侧腋窝淋巴结增多。肝功能：门冬氨酸氨基转移酶39 U/ L,谷氨酰转肽酶88 U/ L,白蛋白28.80 g/ L。心肌酶谱：肌酸激酶192 U/ L,乳酸脱氢酶276 U/ L。初步诊断吞咽困难原因：食管癌待排,社区获得性肺炎。入院后予抗感染、补液支持等治疗。2月22日患者出现发热,体温波动在37.9～39.6℃。2月23日出现活动后气促、呼吸困难,颈静脉充盈,双肺闻及大量湿啰音,双下肢水肿加重,B型脑钠肽前体939.10 pg/ mL,按心功能衰竭处理后好转。进一步检查：上消化道造影提示慢性胃炎、胃小弯溃疡。心脏彩超提示左心房及心室增大,心包少量积液,卵圆孔未闭,心房水平左向右分流,左、右室弛张功能降低。血沉45 mm/ h,C 反应蛋白33.23 mg/ L。抗核抗体谱：抗核抗体（ ANA）滴度1∶1000强阳性,抗核糖核蛋白（ U1RNP）抗体（﹢﹢﹢）,抗 Sm 抗体、抗 SSA 抗体、抗SSB 抗体、抗组蛋白抗体、类风湿因子、抗环瓜氨酸肽抗体等阴性。补体 C30.70 g/ L,补体 C40.05 g/ L。诊断为混合性结缔组织病（ MCTD）。2月25日患者开始口服强的松50 mg/ d。2月26日症状逐渐好转,3月3日出院。     

腺病毒介导的受体活性修饰蛋白-1基因对兔心肌梗死后炎症因子及心肌纤维化的影响

目的 观察腺病毒介导的受体活性修饰蛋白-1 (RAMP1)基因对心肌梗死后心肌纤维化的影响及其作用机制. 方法 建立兔心肌梗死模型,随机分为RAMP1转染组、空载病毒载体组(空载病毒组)和PBS组;模型建立后40 min经局部注射带绿色荧光蛋白报告基因的RAMP1重组腺病毒载体(pAd2-EGFP-RAMP1)和空病毒载体及PBS到心肌梗死交界区,病毒注射后7d、14 d和28 d处死动物取心脏标本,应用Western blot检测心肌组织局部NF-κB表达,Masson染色检测心肌梗死边缘区胶原含量.应用ELISA法测定心肌梗死模型建立前及病毒注射后血清TNF-a浓度,心脏超声心动图检测病毒注射后28 d心功能. 结果 病毒注射后7d,RAMP1转染组局部心肌组织RAMP1表达量为(67.33±3.97)％,较空载病毒组(20.59±3.26)％和PBS组(23.80±5.08)％明显增加(P＜0.05).病毒注射后7d,与空载病毒组(62.60±6.18)％和PBS组(62.95±5.17)％比较,RAMP1转染组心肌局部NF-κB表达下降(26.54±5.13)％(P＜0.05).与空载病毒组和PBS组比较,RAMP1转染组不同时间点血清TNF-a表达减少[7d:(136.74±5.42)μg/L比(196.97±14.17)μg/L,(203.67±13.90)μg/L;14 d:(154.51±13.61) μg/L比(112.22±6.74)μg/L,(160.46±14.27)μg/L;28 d:(51.10±5.62)μg/L比(95.55±9.94)μg/L,(98.96±12.68)μg/L,均P＜0.05].梗死边缘交界区心肌胶原纤维含量,与空载病毒组和PBS组比较,RAMP1转染组14 d和28 d心肌胶原纤维含量降低[14 d:(7.10±0.98)％比(19.52±2.32)％,(17.91±0.96)％;28 d:(17.04±2.44)比(34.10±5.59)％,(33.98±4.33)％,均P＜0.01].梗死后28d RAMP1转染组梗死面积(26.54±5.13)％较EGFP组(32.20±3.73)％和C组(35.58±2.65)％缩小(P＜0.01),心功能改善也优于空载病毒组和PBS组(P＜0.01). 结论 外源性RAMP1基因转染可能通过抑制局部NF-κB活性,下调炎性细胞因子TNF-a等表达,部分阻断了梗死后促纤维化发生的环节,从而在一定程度上减轻梗死交界区胶原纤维过度沉积,改善梗死后心功能.     

缺氧预处理间充质干细胞对兔颈动脉球囊损伤后血管内皮生长因子水平及再内皮化的影响

目的探讨外周血间充质干细胞(MSCs)移植对动脉粥样硬化模型兔颈动脉球囊损伤后外周血血管内皮生长因子(VEGF)水平及再内皮化的影响。方法新西兰雄性大白兔72只,随机分为缺氧预处理MSCs移植组(处理组)、非处理MSCs移植组(非处理组)及对照组,每组24只。术后1、2、4周采集外周血检测VEGF水平;术后1、4周留取血管标本免疫组织化学染色,进行归巢MSCs分析、再内皮化程度分析。结果与对照组比较,处理组和非处理组兔1、2、4周VEGF水平明显升高;与非处理组比较,处理组兔1、2周VEGF水平明显升高。与移植后1周时比较,处理组和非处理组兔2周时VEGF水平明显降低。移植后4周时内皮化程度分析显示,处理组和非处理组均明显优于对照组,其中处理组又明显优于非处理组(P<0.05)。结论 MSCs移植能够显著提高兔外周血VEGF水平,加速损伤血管再内皮化;移植经缺氧预处理的MSCs可增强上述作用,可能与缺氧应激诱导MSCs分泌VEGF等细胞因子功能增强有关。     

骨髓间充质干细胞移植对损伤血管的内皮修复作用

目的探讨兔颈动脉粥样硬化狭窄血管成形术后,骨髓间充质干细胞(BMSC)移植对损伤血管内皮修复的影响及可能机制。方法制作兔颈动脉粥样硬化狭窄模型48只,随机分成BMSC移植组(n=24)和对照组(n=24)。体外培养兔BMSC,流式细胞仪鉴定BMSC表面标志,DAPI标记后备用。球囊损伤颈动脉的即刻,BMSC移植组以107/kg的细胞数经颈外动脉移植到损伤动脉局部,对照组注射等量的PBS液。术前及细胞移植后3、7、14及28天采集外周血用ELISA法测定血管内皮生长因子水平。移植后7天取材观察DAPI标记BMSC的归巢。移植后14天免疫组织化学染色检测损伤血管组织的血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)的表达;移植后28天HE染色后测定损伤血管新生内膜面积、新生内膜面积/中膜面积及再狭窄率。结果 BMSC移植组在移植后各时间点血管内皮生长因子水平均显著高于对照组(P<0.01)。移植后7天BMSC移植组损伤血管的内膜表面见DAPI标记的BMSC。移植后14天血管内膜有CD31的连续性表达,对照组没有表达。与对照组比较,移植后28天BMSC移植组血管新生内膜面积(0.092±0.009比0.189±0.007,P<...     

腺病毒介导hRAMP1基因转染血管平滑肌细胞的增殖和凋亡

背景：外源性受体活性修饰蛋白1基因转染可能对血管平滑肌细胞增殖调控具有重要的作用。目的：探讨腺病毒载体介导人受体活性修饰蛋白1基因对体外培养的兔血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响。方法：分离培养获得兔主动脉血管平滑肌细胞,分别以携带人受体活性修饰蛋白1基因的腺病毒和空腺病毒转染后,分成人受体活性修饰蛋白1组、空病毒组和对照组。结果与结论：腺病毒转染细胞后随时间延长,报告基因绿色荧光蛋白表达逐渐增加,72h表达最强,感染率达80%,96h时仍有绿色荧光蛋白表达。人受体活性修饰蛋白1组的受体活性修饰蛋白1蛋白表达增加,血管平滑肌细胞凋亡率增加,细胞增殖明显抑制,与空病毒组和对照组比较差异有显著性意义（P〈0.05）。提示人受体活性修饰蛋白1基因感染血管平滑肌细胞后明显抑制血管平滑肌细胞增殖,促进细胞凋亡。     

腺病毒介导hRAMP1基因转染血管平滑肌细胞的增殖和凋亡

背景:外源性受体活性修饰蛋白1基因转染可能对血管平滑肌细胞增殖调控具有重要的作用。目的:探讨腺病毒载体介导人受体活性修饰蛋白1基因对体外培养的兔血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响。方法:分离培养获得兔主动脉血管平滑肌细胞,分别以携带人受体活性修饰蛋白1基因的腺病毒和空腺病毒转染后,分成人受体活性修饰蛋白1组、空病毒组和对照组。结果与结论:腺病毒转染细胞后随时间延长,报告基因绿色荧光蛋白表达逐渐增加,72h表达最强,感染率达80%,96h时仍有绿色荧光蛋白表达。人受体活性修饰蛋白1组的受体活性修饰蛋白1蛋白表达增加,血管平滑肌细胞凋亡率增加,细胞增殖明显抑制,与空病毒组和对照组比较差异有显著性意义(P<0.05)。提示人受体活性修饰蛋白1基因感染血管平滑肌细胞后明显抑制血管平滑肌细胞增殖,促进细胞凋亡。     

骨髓间充质干细胞移植对心肌梗死后心脏功能及损伤血管再狭窄的影响

目的 观察骨髓间充质干细胞(MSC)移植改善心肌梗死后心功能的变化,及其治疗的安全性.方法 建立兔右侧颈动脉粥样硬化狭窄和心肌梗死早期再灌注模型并行右侧颈动脉球囊损伤,建模后分为MSC移植组和对照组,经耳缘静脉注射MSC或等体积的磷酸盐缓冲液.移植后1周观察MSC的归巢;2周时免疫组织化学染色检测血管和心肌组织中血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)的表达;移植后4周颈动脉造影检测血管狭窄程度,HE染色测定新生内膜面积及血管狭窄率,并同步测定心脏功能和心肌梗死面积、计数梗死心肌周围毛细血管密度.以及移植后对球囊损伤血管再狭窄产生的影响.结果 细胞移植后1周在梗死的心肌组织和损伤血管内膜均有4′,6-联脒-2-苯基吲哚二盐酸盐(DAPI)标记的MSC归巢.移植后2周MSC移植组的损伤血管内膜见CD31连续性表达,而对照组无表达.与对照组比较(50.5±3.6)%,MSC移植组血管组织增殖细胞核抗原的表达明显降低[(23.4±2.8)%,P＜0.05].4周时损伤血管的新生内膜面积(0.092±0.009比0.189±0.007,P＜0.05)及血管再狭窄率在MSC移植组[(41.7±3.7)%]明显小于对照组[(61.3±1.6)%,P＜0.05].与对照组比较,4周时MSC移植组的心功能有所改善,心肌梗死面积缩小[(21.7±2.2)%比(34.3±1.8)%,P＜0.05],梗死心肌周围新生毛细血管密度明显增加[(33.6±2.0)%比(20.8±2.6)%,P＜0.05].结论 MSC移植在改善梗死心脏功能的同时,对促进损伤血管的再内皮化和减轻新生内膜的增殖可能产生有益作用,从而有助于减轻损伤血管的再狭窄.

Abstract：

Objective Although earlier studies have shown that the transplantation of mesenchymal stem cells (MSCs) might improve cardiac functions after myocardial infraction, its role on vascular restenosis after percutaneous coronary intervention (PCI) remains controversial.The aim of this study was to investigate the effects of MSCs on the restenosis of injured artery following balloon angioplasty in a rabbit model with both myocardial infarction reperfusion and atherosclerotic stenosis cardotid artery by balloon injury.Methods After the animal model was established for myocardial infraction reperfusion and atherosclerotic stenosis cardotid artery by balloon injury, the rabbits received an intravenous transplantation of MSCs.And an equal volume of phosphate buffered solution was administered for the control group.The animal vascular tissue and myocardium tissue were excised at different time points post-transplantation and used to detect the homing of MSCs and the expressions of playlet-endothelial cell adhesion molecule-1 (CD31) and proliferating cell nuclear antigen (PCNA) by immunohistochemical staining.Four weeks later, vascular restenosis was analyzed by angiography of bilateral carotid arteries and the vascular tissues were used for histological studies.Results At one week post-transplantation, the 4', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)-labeled MSCs could be detected in myocardial infarction and injured intima.And the intimal expression of CD31 was observed at 2 weeks in the MSCs transplantation group.Yet the expression of PCNA was significantly lower in the MSCs transplantation group than that in the control group (50.5% ± 3.6% vs 23.4% ±2.8%, P ＜0.05).At 4 week post-transplantation, the neointimal area of injured vessels and the vascular restenosis were significantly lower in the MSCs transplantation group than those in the control group (0.092±0.009 vs0.189 ±0.007, P＜0.05;41.7 ±3.7 vs 61.3 ±1.6, P＜0.05).Furthermore the MSCs transplantation group demonstrated improved cardiac functions, reduced myocardial infarct size (21.7% ±2.2% vs 34.3% ± 1.8%, P ＜ 0.05) and significantly increased capillary density around infarction foci (33.6% ±2.1% vs 20.8% ±2.6%, P ＜0.05 ) versus the control group.Conclusion The transplantation of MSCs plays significant roles in cardiac repairing in terms of improved cardiac functions, accelerated repair of injured vessels, suppression of neointimal hyperplasia and reduced restenosis of injured vessels.     

ST段抬高非冠心病分析

ST段抬高心电图改变以心肌梗死及不稳定心绞痛临床上最多见,而其他导致的ST段抬高的疾病,如以胸痛为主要症状就诊易与冠心病混淆,如何在临床工作中诊断与鉴别非常重要。现就我院心内科及急诊救治的25例ST段抬高非冠性病患者分析如下。     

院内急危重症转运途中意外死亡研究

院内转运各类急危重患者是急诊工作重要的组成部分,如何避免转运及不合理的治疗给患者带来伤害,减少不良事件的发生,值得广大医务人员重视.现就遵义医学院附属医院院内转运过程中出现心搏呼吸骤停抢救无效死亡的63例患者情况总结分析如下.