胆汁淤积的治疗

正胆汁淤积是指肝内外各种原因造成胆汁形成、分泌或排泄障碍,胆汁流减少所导致的一种临床综合征,以瘙痒、乏力、黄疸、血清碱性磷酸酶(ALP)和谷氨酰转肽酶(GGT)升高为特征。胆汁淤积可分为肝内胆汁淤积和肝外胆汁淤积,其中肝内胆汁淤积又可分为肝细胞性胆汁淤积、胆管性胆汁淤积及混合性胆汁淤积。其原因少部分为先天性遗传异     

转基因细胞模型L02/HBx的构建及HBx对细胞周期的影响

目的:构建L02/HBx转基因细胞模型并研究HBx对肝细胞周期的影响.方法:运用脂质体转染和G418筛选获得L02/ HBx阳性克隆,并分别用RT-PCR和Western blot鉴定HBx mRNA与蛋白的表达.进一步用四唑蓝(MTT)比色试验、流式细胞仪检测L02/HBx的增殖、凋亡和细胞周期.结果:RT-PCR和Western blot分别检测到L02/ HBx细胞中HBx mRNA和蛋白的表达.MTT比色试验显示L02/HBx生长速度加快,流式细胞仪检测发现L02/HBx凋亡率低(0.09%±0.13% vs 3.74%±1.29%,P<0.05),G1期细胞比例减少(61.35%±0.82% vs 67.80±6.84%,P<0.05),S期细胞比例相应增加(36.59%±2.54% vs 22.37%±2.17%,P<0.05).经阿霉素(ADM)培养后,L02/HBx的凋亡率显著增加(34.91%±5.85% vs 0.09%±0.13%,P<0.05),G1期细胞比例明显增加但低于对照组(82.81%±6.48% vs 61.35%±0.82%,P<0.05;82.81%±6.48% vs 87.19%±1.92%,P<0.05),S期细胞比例降低但较对照组高(13.84%±6.16% vs 36.59%±2.54%,P<0.05;13.84%±6.16% vs 2.22%±1.26%,P<0.05).结论:L02/HBx构建成功,HBx能促进细胞周期进程,加快细胞的生长并抑制细胞的凋亡;转染HBx基因的肝细胞凋亡更易受凋亡因子所触发,表明HBx可能会增加正常肝细胞对诱导凋亡因素的敏感性.     

The Effects of HBx Gene on the Expression of DNA Repair Enzymes hOGG1 and hMYHα mRNA in HepG2 Cells

To observe the alteration in the expression of DNA repair enzymes hOGG1 and hMYHa and the change in 8-OHdG levels in the HBx gene-transfected cells HepG2/HBx and to explore the mechanisms of the HBV-associated hepatocellular carcinoma, the gene-transfected cells HepG2/HBx which stably expressed HBx was established, and the effect of HBx on the cell cycle and proliferation of HepG2 was examined. By using the β-actin as the interior control, real-time polymerase chain reaction （Real-time qPCR） was employed to quantitatively detect the expression of DNA repair enzymes hOGG1 and hMYHα in the HepG2/HBx, the control cells HepG2 and HepG2 transfected with pcDNA3.1 vector （HepG2/pDNA3.1）. The 8-OHdG levels were determined by HPLC/ECD in the established gene-transfected cells HepG2/HBx and the control cells HepG2 and HepG2/pcDNA3.1. Our results showed that the expression of DNA repair enzyme hMYHα in the HepG2/HBx （0.021±0.007） was significantly lower than that of HepG2 （0.099±0.041） （P〈0.05） and HepG2/pDNA3.1 （0.121±0.005） （P〈0.05）. However, the no significant differences existed in the expression of DNA repair enzyme hOGG1 among the three cell strains （P〉0.05）. The 8-OHdG level in the HepG2/HBx was significantly higher than that in HepG2 and HepG2/pcDNA3.1 （P〈0.05）. It is concluded that HBx gene may inhibit the expression of DNA repair enzyme hMYHα mRNA to impair the ability to repair the intracellular DNA oxidative damage, to increase the oxidative DNA-adduct 8-OHdG and to affect the nucleotide excision repair function, thus participate in the occurrence and development of hepatocellular carcinoma.     

La蛋白结合位点缺失的HBeAg mRNA在细胞内的稳定性

目的观察乙型肝炎病毒e抗原mRNA（HBeAg mRNA）上La蛋白结合位点的缺失对其细胞内稳定性的影响,从而进一步研究这个位点在乙肝病毒生命周期中的作用。方法针对HBeAg mRNA上La蛋白结合位点,在HBV DNA水平上利用PCR定点突变技术,构建突变型HBV载体,使其转录出来的HBeAg mRNA缺失La蛋白结合位点,将其命名为pHBV-mLa;应用脂质体将突变型HBV载体瞬时转染HepG2细胞,同时将转染了野生型HBV载体的细胞作为对照组;在各组中,用半定量逆转录PCR（RT-PCR）检测HBeAg mRNA,同时酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞培养上清中HBeAg。结果酶切鉴定和碱基测序证明,成功构建了La蛋白结合相关位点部分碱基缺失的突变型HBV载体—pHBV-mLa。转染后半定量RT-PCR检测发现,突变后HBeAg mRNA水平明显低于未突变的对照组,ELISA检测发现突变组中HBeAg表达下调。结论HBV-DNA上引入的突变可以破坏HBeAg mR-NA上La蛋白结合位点,影响HBeAg mRNA在细胞内的稳定性。HBeAg mRNA上La蛋白结合位点对乙肝病毒生命周期至关重要。     

乙型肝炎病毒x影响肝细胞增殖与凋亡的初步研究

目的 观察乙型肝炎病毒x(HBx)导入正常肝细胞后对细胞周期及凋亡的影响,探讨HBx致肝细胞癌的发生机制.方法 应用脂质体转染重组质粒pcDNA3.1( )/v5-hisB-HBx后,G418筛选获得阳性克隆L02/HBx,分别用RT-PCR和Western blot鉴定其HBx mRNA与蛋白的表达.噻唑蓝比色法(MTT)及细胞生长曲线观察细胞增殖情况,流式细胞术分析其细胞周期特征与凋亡率.结果 构建的L02/HBx细胞中可稳定表达HBx mRNA及蛋白.与对照组比较,L02/HBx细胞增殖速度明显加快(P＜0.05);其G1期细胞比例明显减少,S期细胞比例显著增加,凋亡率明显降低(P＜0.05).结论 成功构建稳定表达HBx的转基因细胞株L02/HBx,初步显示HBx可促进肝细胞增殖,抑制细胞凋亡,从而加速细胞周期进程,可能参与肝细胞的恶性转化.     

武汉地区新型冠状病毒肺炎住院患者消化系统表现的单中心描述性研究

目的 了解武汉地区新型冠状病毒肺炎(COVID-19)住院患者消化系统表现,为疾病防控和诊治提供参考。方法 回顾性分析华中科技大学同济医学院附属同济医院中法新城院区2020年1月27日至2月14日收治的COVID-19住院患者资料,包括一般情况、核酸检测阳性率、疾病危重程度、发病潜伏期、起始症状和消化系统表现。比较需使用无创或有创辅助呼吸的危重型患者(危重组)与未使用辅助呼吸的非危重型患者(非危重组)的一般情况、核酸检测阳性率和消化系统表现。统计学方法采用连续性校正卡方检验和中位数检验。结果 305例患者中,男146例(47.9%),女159例(52.1%);中位年龄为57岁;84.1%(228/271)的患者鼻咽拭子或咽拭子核酸检测阳性;危重组46例(15.1%),非危重组259例(84.9%)。发病潜伏期为1～15 d,中位潜伏期为6 d。起始症状以发热、咳嗽、乏力、食欲下降为主,分别占81.1%(163/201)、39.3%(79/201)、54.7%(110/201)、50.2%(101/201)。79.1%(159/201)的患者于起病后1～10 d出现消化道症状,包括恶心2...     

聚乙烯吡咯烷酮介导的白细胞介素-12基因治疗小鼠肝癌微小病灶的实验研究

目的 探讨白细胞介素(IL)-12基因注射对小鼠肝癌微小病灶的治疗作用。方法IL-12质粒转染BHK-21细胞，ELISA检测上清中IL-12的分泌，并用此上清刺激脾细胞，MTT检测其增殖。18只Balb／c小鼠股部肌肉内接种H22细胞后分为3组分别注射聚乙烯吡咯烷酮(PVP)／生理盐水(NS)、PVP／NS作溶剂的pcDNA3．1质粒和IL-2质粒观察肿瘤的形成；ELISA检测血清中IL-12的含量，切片观察肿瘤浸润淋巴细胞，并用免疫组化和TUNEL显示肿瘤血管密度和肿瘤细胞的凋亡。结果 IL-12因子可以分泌到胞外，促进脾淋巴细胞的增殖(15．2％)。与对照组相比，治疗组血清IL-12水平上升，瘤内淋巴细胞大量浸润，血管减少，肿瘤细胞凋亡，肝癌微小病灶生长受抑，抑制率高达85．7％。结论 PVP介导的IL-12基因重复注射对小鼠肝癌微小病灶具有很好的治疗效果。     

肠源性内毒素血症与肝病

肠道内有大量细菌生长,如细菌过度繁殖,内毒素产生过量,或肠黏膜屏障受损内毒素吸收入门静脉增多,或肝内Kupffer细胞吞噬功能低下,内毒素的吸收量超过了肝脏的清除能力,内毒素即可“泛滥”（spillover）进人体循环而形成内毒素血症。