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目的:应用16SrRNA测序及序列分析方法来鉴定一株来自实验室饲养小鼠的细菌。方法:对可疑小鼠的血液进行细菌培养,革兰氏染色观察细菌菌株的表型,PCR扩增菌株16SrRNA并进行测序,将测序序列与GenBank数据库的菌株序列进行进化树和基因距离分析。结果:本研究鉴定的菌株为革兰氏阳性表皮葡萄球菌。结论:16SrRNA基因测序鉴定细菌的方法适用于非专业研究人员;实验动物也可能含有病原体,进行动物实验时要有防护措施。 相似文献
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目的:克隆乳胶主要过敏原Hev b3基因,构建其原核表达裁体并表达和纯化重组蛋白,了解重组的Hev b3是否具有和相应IgE特异结合的过敏原特性。方法:用RT—PCR方法从新鲜海南橡胶树叶提取的总RNA中扩增出Hev b3的cDNA,将其克隆于原核表达载体pQE30质粒,转化大肠杆菌XL1-Blue,酶切和测序验证构建的载体,利用Ni—NTA柱层析纯化重组蛋白并用SDS—PAGE和Western Blot验证。结果:酶切和测序结果证实克隆了正确的Hev b3序列,重组表达并纯化的蛋白具有和特异IgE抗体结合的过敏原特性。结论:成功构建了乳胶主要过敏原的原核表达载体,并纯化了具有过敏原特性的重组蛋白,为过敏原的标准化创造了条件。 相似文献
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目的构建果实特异启动子驱动的含伯氏疟原虫裂殖子表面蛋白PbMSP4/5(Plasmodium berghei merozoitesurface protein4/5)基因的植物表达载体,并进一步提高抗原基因的表达量和免疫原性,为研制有效的转基因植物疟疾疫苗打下基础。方法分别以提取的番茄和伯氏疟原虫Anka株的基因组DNA为模板,扩增番茄果实特异表达启动子E8的核心序列(约1.11Kb)及PbMSP4/5基因(704bp),并通过重叠区扩增基因拼接法(Gene splicing by overlap extension,SOE)PCR将二者拼接,拼接后的序列为EM,并合成霍乱毒素B亚基基因CTB,共同构建重组质粒pCAMBIA1302-EM-CTB,电击法转化根癌农杆菌GV3103。结果重组质粒经酶切鉴定证明已成功转化。结论实验成功构建了以番茄果实特异启动子驱动PbMSP4/5基因、以CTB为黏膜免疫佐剂的高效植物表达载体。 相似文献
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羊膜及羊膜来源细胞应用于组织再生工程的研究进展 总被引:1,自引:1,他引:0
组织再生可分为体外组织再生和体内组织再生。体外组织再生是于体外设计、构建人体组织,并用于移植,以替换或修复病损组织。体内组织再生是把含有活细胞成分或不含细胞成分的装置植入体内,以诱导和促进功能组织的再生。这一方法除了要求设计、制备新型生物活性材料以提供细胞粘附和生长的基质外,还需要生长因子等辅助生物材料诱导组织再生。因此,细胞、支架和生长因子就成为构建工程组织的3个关键因素。羊膜具有很多特性,使其可作为组织工程中的支架;另外,羊膜本身就可以表达多种生长因子。就细胞来源而言, 相似文献
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目的 体外扩增小鼠组织因子基因cDNA序列,构建小鼠组织因子重组原核表达质粒,在大肠杆菌中诱导表达.方法 根据基因库提供的基因序列设计克隆扩增小鼠组织因子cDNA基因序列的引物,利用原位反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术扩增获得小鼠组织因子cDNA基因,通过内切酶酶切和T7酶连接,将小鼠组织因子cDNA序列插入原核表达质粒pQE30多克隆位点中.筛选的重组质粒经酶切和DNA序列测定证实正确后,转染感受态大肠杆菌,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并通过10%聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白印迹法进行鉴定.结果 琼脂糖凝胶电泳发现扩增的小鼠组织因子cDNA序列相对分子量大小和预期值相一致,重组质粒酶切结果和预期值相符,DNA序列测定显示质粒的目的基因阅读框架准确无误.用IPTG诱导可以有效诱导重组蛋白质在大肠杆菌中表达,表达的重组蛋白质相对分子量与预期值相一致.结论 成功构建了小鼠组织因子的原核表达载体,并在大肠杆菌中诱导了有效表达,为将组织因子应用于治疗和功能研究奠定了基础. 相似文献
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[目的] 构建果实特异性启动子驱动的含伯氏疟原虫裂殖子表面蛋白PbMSP4/5(Plasmodium berghei merozoite sHrface protein 4/5)基因的植物表达载体,进一步提高目的基因的表达量,为研制有效的转基因植物疟疾疫苗打下基础. [方法] 分别以提取的番茄和伯氏疟原虫的基因组DNA 模板,通过SOE PCR,即重叠区扩增基因拼接法(gene splicing by overlap extension)拼接番茄果实特异表达启动E8的核心序列(约1.11 Kb)及PbMSP4/5基因(704bp),拼接后的序列为EM.用EcoRI和Hind Ⅲ分别双酶切EM序列及表达载体pCAMBIA1302,连接转化,得到的重_组质粒pCAMBIA1302-EM用电击法转化根癌农杆菌GV3103. [结果] 重组质粒经PcR及酶切鉴定证明已成功转化.[结论] 本实验成功构建了番茄果实特异性启动子驱动PbMSP4/5基因的植物表达载体. 相似文献
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目的:探讨小型化的免疫偶联物Fab-ADM的抗肿瘤机制。方法:建立小鼠肝癌细胞H22及小鼠黑色素瘤细胞B16的皮下移植瘤模型,分别予以生理盐水及ADM、Fab-ADM治疗,治疗结束后取肿瘤组织制备石蜡切片进行HE染色,并通过CD34进行免疫组织化学染色以计数肿瘤微血管。结果:在2种动物模型中,Fab-ADM治疗组小鼠瘤体内可见肿瘤细胞的大片状坏死,微血管密度明显减少,与生理盐水对照组及ADM治疗组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Fab-ADM偶联物较游离ADM具有更强的肿瘤抑制作用,其可显著抑制肿瘤微血管密度的增加,继而引起肿瘤细胞的大面积坏死。 相似文献
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目的:克隆乳胶主要过敏原Hevb3基因,构建其原核表达载体并表达和纯化重组蛋白,了解重组的Hevb3是否具有和相应IgE特异结合的过敏原特性。方法:用RT-PCR方法从新鲜海南橡胶树叶提取的总RNA中扩增出Hevb3的cDNA,将其克隆于原核表达载体pQE30质粒,转化大肠杆菌XL1-Blue,酶切和测序验证构建的载体,利用Ni-NTA柱层析纯化重组蛋白并用SDS-PAGE和WesternBlot验证。结果:酶切和测序结果证实克隆了正确的Hevb3序列,重组表达并纯化的蛋白具有和特异IgE抗体结合的过敏原特性。结论:成功构建了乳胶主要过敏原的原核表达载体,并纯化了具有过敏原特性的重组蛋白,为过敏原的标准化创造了条件。 相似文献
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目的:构建大肠杆菌抗原Ag43(pETAg43′)以及Ag43和绿色荧光蛋白(GFP)(pETAg43′/GFP)的重组表达质粒,了解pETAg43′/GFP是否能够将GFP表达于细菌表面。方法用PCR扩增获得Ag43大部分基因序列( Ag43′),同时用酶切方法从质粒pEGFP-C1切取GFP基因序列,首先将Ag43′基因序列插入表达质粒pET-22b中,获得重组质粒pETAg43′,然后再将GFP基因序列插入pETAg43′获得质粒pETAg43′/GFP。将重组质粒pETAg43′/GFP转化Ag43基因缺失的菌株JM109(△Ag43),用荧光显微镜和SDS-PAGE了解是否能将GFP表达于细菌表面,同时了解加热是否能够直接获得Ag43′/GFP的嵌合重组蛋白。结果琼脂糖凝胶电泳发现PCR扩增的Ag43′和GFP基因序列分子量大小与预期值相一致,酶切分析重组质粒pETAg43′和pETAg43′/GFP结果与预期值相符,基因测序显示质粒pETAg43′和pETAg43′/GFP的基因序列和阅读框架均准确无误。质粒pETAg43′/GFP经诱导后可以将Ag43′/GFP嵌合蛋白表达于大肠杆菌JM109(△Ag43)的表面,55℃加热50 min是提取Ag43′/GFP嵌合蛋白的最佳条件。结论成功构建了能够将外源蛋白GFP表达于细菌表面的重组表达载体,在大肠杆菌表面有效表达并加热提取获得了嵌合重组蛋白Ag43′/GFP,为制备其他自身抗原分子的Ag43嵌合蛋白奠定了基础。 相似文献