支气管哮喘患者血清对内皮穿越模型中单核细胞分化为树突状细胞的作用

目的 探讨支气管哮喘(简称哮喘)患者血清和正常血清对内皮穿越模型中单核细胞向树突状细胞(DC)分化和功能的作用及其机制.方法 在江苏省哮喘联盟数据库中选择2008年5月至2009年5月轻～中度哮喘患者12例,募集匹配的健康志愿者12名,常规分离血清和外周血单个核细胞,免疫磁珠法获得单核细胞.选择健康产妇5名,胰酶消化法获得人脐静脉内皮细胞(第2代),培养融合至内皮细胞单层.在内皮细胞上方加入单核细胞及哮喘血清(哮喘组)或正常血清(对照组),构建内皮穿越模型.硝酸银染色法观察单核细胞来源的树突状细胞(MDDC)迁移行为.于48 h收集MDDC,扫描电镜观察形态学特征,电泳迁移率实验检测核因子κB(NF-κB)活性,流式细胞术、ELISA和混合淋巴细胞反应分别检测其表型和功能.结果 (1)在内皮穿越模型中,单核细胞2 h后发生正向穿越,48 h后发生逆向穿越并分化为DC.(2)与穿越前单核细胞[CD14(81±6)%、人白细胞抗原DR(HLA-DR)(24±5)%、CD80(2.8±2.0)%、CD86(14±4)%、CD83(0.9±0.8)%]比较,对照组MDDC的CDi4[(20±5)%]显著下降(F=49.01,P＜0.05)、HLA-DR、CD80、CD86和CD83[(43±4)%、(17.9±3.5)%、(43±11)%和(6.7±1.8)%]均显著增高(均P＜0.05),但CD83仍较低,为未成熟DC.(3)与对照组比较,哮喘组MDDC的HLA-DR和CD86[(55±6)%和(59±12)%]相仿(F值分别为15.29和35.97,均P＞0.05)、CD80和CD83[(49.7±10.2)%和(30.2±6.8)%]显著增高(F值分别为34.01和20.68,均P＜0.05),为成熟DC.并且,哮喘组MDDC呈典型的树枝样突起,其NF-κB活性、白细胞介素-12 P70水平和T细胞增殖作用[(100±11)%、(568±43)ng/L和(2033±198)cpm]较对照组[(12±3)%、(220±35)ng/L和(952±64)cpm]显著增高(均P＜0.05).结论 哮喘血清可诱导内皮穿越模型中单核细胞向DC异常分化成熟,并与NF-κB过度激活有关.该模型为剖析哮喘免疫学发病机制和筛选新型抗哮喘药物建立了新的体外实验平台.

Abstract：

Objective To explore the effect of asthmatic and healthy serum on differentiation and function of monocyte-derived dendritic cells (MDDC) in a transendothelial trafficking model. Methods The sera and peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were separated from 12 asthmatic patients and 12 healthy volunteers, and monocytes were selected from PBMC using magnetic beads. The trypsin-digested human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) at passage 2 from 5 healthy lying-in women were used to construct the transendothelial trafficking model under asthmatic or healthy serum, wherein MDDC were identified by silver nitrate staining and scanning electron microscopy. Nuclear factor κB (NF-κB) activity was determined by electrophoretic mobility shift assay. Flow cytometry, ELISA and mixed leukocyte reaction were relevantly utilized to detect the phenotype, cytokine and T cell proliferation. Results ( 1 ) Monocytes traversed through HUVEC monolayer after 2 h, and reverse-transmigrated to develop into DC 48 h later. ( 2 ) The healthy serum stimulated monocytes into immature MDDC with lower CD14 [ ( 20 ±5)%] (F=49.01, P＜0.05), and higher HLA-DR, CD80, CD86 and CD83 [(43 ±4)%, (17.9 ±3.5)%, (43 ± 11)% and (6.7 ± 1.8)%, respectively] (F= 10.35 -40.17, all P＜0.05) than monocytes did before transmigration at 0 h [ CD14(81 ±6)%, HLA-DR (24 ±5)%, CD80(2. 8 ±2. 0)%,CD86( 14 ±4)% and CD83(0. 9 ±0. 8)%, respectively]. (3) The asthmatic serum stimulated monocytes into mature MDDC, characteristic of dendrites, with similar HLA-DR and CD86 [ ( 55 ± 6 ) % and ( 59 ±12)%] (F=15.29 and 35.97, all P ＞0.05), higher CD80 and CD83 [(49.7 ± 10.2)% and (30.2 ±6. 8) % ] ( F = 4. 01 and 20. 68, all P ＜ 0. 05), accompanied by increased levels of NF-κB activity, IL-12 p70 and T cell proliferation [ ( 100 ± 11 )%, (568 ±43) ng/L and (2033 ± 198) cpm, respectively] (F=49. 23 - 350. 84, all P ＜ 0. 05 ) relative to the healthy serum-stimulated immature MDDC [ ( 12 ± 3 ) %,(220 ± 35) ng/L and (952 ± 64) cpm, respectively ]. Conclusion The asthmatic serum induces mature MDDC in association with NF-κB overactivation in the transendothelial trafficking model, which provides a promising experimental platform for both investigation of immunological mechanisms in asthma and screening of novel anti-asthma drugs in vitro.     

喉罩通气全身麻醉下经可弯曲气管镜介入治疗窒息性气管狭窄三例

近年来,随着介入技术的发展,很多以往需要手术治疗或无法治疗的气道腔内病变可采用介入治疗获得治愈[1].不同原因导致的气管重度阻塞伴有极度缺氧的患者可出现缺氧性心脏骤停并死亡,这种严重的气管狭窄临床上称为窒息性气管狭窄,需要紧急通畅气道,快速纠正缺氧,防止猝死.由于此类患者病情危急,选择合适的介入治疗工具及方法十分重要,周内外多采用硬质气管镜(简称硬镜)直视下治疗[2-7],现报道3例采用喉罩通气在全身麻醉下经可弯曲气管镜介入治疗窒息性气管狭窄的患者,总结临床经验.     

布地奈德上调支气管哮喘小鼠肺组织IDO、抑制气道炎症和气道高反应性的研究

目的 研究布地奈德对急性支气管哮喘(简称哮喘)模型小鼠肺组织吲哚胺-2,3双加氧酶(IDO)表达、气道炎症和气道高反应性的干预作用.方法 18只SPF级BALB/c小鼠随机分为正常组、哮喘组、布地奈德组.卵白蛋白(OVA)致敏和激发建立哮喘模型.末次激发24 h后,测定气道对乙酰胆碱的反应性,HE染色观察气道炎症细胞浸润,ELISA法检测血清总IgE、OVA特异性IgE(OVA-sIgE)以及支气管肺泡灌洗液(BALF) Th2细胞因子(IL-4和IL-13).Western blot检测肺组织IDO蛋白表达.结果 正常组小鼠气道阻力随乙酰胆碱浓度增加仅轻度增加,哮喘组气道阻力较正常组显著增高,布地奈德组气道阻力较哮喘组显著下降(P＜0.05);哮喘组血清总IgE和OVA-sIgE、BALF炎症细胞总数和嗜酸粒细胞分类计数、Th2细胞因子水平较正常组显著增高,布地奈德组炎症指标较哮喘组显著降低(P＜0.05);哮喘组肺组织IDO)较正常组显著下降,布地奈德组肺组织IDO较哮喘组显著增高(P＜0.05).结论 布地奈德抑制急性哮喘模型气道炎症和气道高反应性,可能与上调肺组织IDO有关.     

支气管舒张试验在哮喘患者诊断中的应用

目的 研究各项通气功能指标在哮喘患者支气管舒张试验中的变化和诊断价值.方法 测定30例哮喘患者支气管舒张试验中用力肺活量(FVC),用力1秒呼气量(FEV1),50%肺活量时用力呼气容积(V50),25%肺活量时用力呼气容积(V25)的变化.结果 应用支气管舒张剂后FVC、FEV1、V50、V25(%预计值)和绝对值均明显增加.以FEV1≥12%为标准,支气管舒张试验阳性率为67%.基础FEV1(%预计值)与舒张试验改变率(%)之间存在显著负相关.结论 以FEV1作为支气管舒张试验的主要评价指标,必要时联合应用多项指标,结合临床资料加以综合评价.     

肺炎型肺癌19例分析

肺炎型肺癌是支气管肺泡细胞癌(bronchioloalveolar carcinoma,BAC)的一种特殊的类型.由于其在影像学上多表现为斑片或大片状模糊阴影的炎性病灶,容易误诊为肺炎1.我们总结了2000年1月~2006年12月经病理学证实的肺炎型肺癌19例,现报道如下.     

重症监护病房下呼吸道感染铜绿假单胞菌耐药监测

铜绿假单胞菌(PA)是重症监护病房下呼吸道感染最常见的病原菌之一[1],中国重症监护病房病原菌耐药监测显示PA对亚胺培南(IPM)的耐药率由1994年的6%上升到2003年的22%[2].PA本身的耐药机制复杂,由于抗生素的广泛使用,导致临床上多种药物耐药菌呈逐年上升趋势,极大的限制了医生选择药物的范围.因此,了解地区性PA耐药情况是临床有效抗感染的较佳途径.我们就2004年1月～2007年12月南京医科大学第一附属医院ICU中的下呼吸道感染患者痰培养的PA进行耐药现状的分析.     

肺癌筛查的研究进展

肺癌是严重威胁全人类健康的肿瘤疾病,有着极高的发病率及致死率;但相较于晚期肺癌,早期肺癌只要经过规范治疗,便能拥有极长的生存周期和较高的生活质量.因此,针对肺癌,做到早发现、早诊断是影响治疗效果的关键.本文就近年来有关肺癌筛查的研究进展进行整理,包括影像学、液体活检技术以及支气管镜等,旨在为临床医师提高诊断肺癌的能力提...     

气道重塑与难治性哮喘机制的相关研究进展

难治性哮喘是指少数患者尽管通过充分的哮喘治疗包括全身激素治疗后,症状仍不能得到很好控制。关于难治性哮喘的发病机制尚未得到完全阐明。目前各国学者将研究的焦点集中于相关的炎性细胞及细胞因子方面。气道重塑被认为是导致不可逆性气道阻塞的原因之一,与难治性哮喘的发病密切相关。现就目前与难治性哮喘相关的炎症和细胞因子的研究进展,及其与气道重塑的关系予以综述。     

地塞米松对哮喘大鼠肺组织NF-κB和MMP-9及TIMP-1表达的影响

目的:探讨哮喘大鼠肺组织中核因子鄄κB(NF鄄κB)与基质金属蛋白酶鄄9(MMP鄄9)及金属蛋白酶组织抑制因子鄄1(TIMP鄄1)的关系以及地塞米松对NF鄄κB、MMP鄄9和TIMP鄄1的作用。方法:建立大鼠哮喘模型,采用免疫组化法观察肺中NF鄄κB活化及MMP鄄9、TIMP鄄1的蛋白表达,用逆转录-聚合酶联反应技术(RT鄄PCR)测定肺中MMP鄄9、TIMP鄄1mRNA的表达。结果:哮喘组NF鄄κB的活化及MMP鄄9、TIMP鄄1蛋白在气道黏膜上皮的表达明显高于对照组(P<0.01)和地塞米松组(P<0.05),哮喘组MMP鄄9、TIMP鄄1在肺组织的mRNA表达也高于对照组(P<0.01)和地塞米松组(P<0.01)。MMP鄄9的表达与NF鄄κB的活化呈显著正相关(rs=0.8071,P<0.01)。TIMP鄄1的表达与NF鄄κB的活化无明显相关(rs=0.4716,P>0.05)。结论:地塞米松可能抑制气道壁NF鄄κB活化和减少MMP鄄9的表达、调节MMP鄄9/TIMP鄄1之间的失衡,对MMP鄄9的抑制作用可能部分通过抑制NF鄄κB活化而实现的。     

非小细胞肺癌患者化疗前后淋巴细胞亚群监测的临床意义

目的监测非小细胞肺癌患者化疗前后淋巴细胞亚群的变化,了解免疫功能变化的意义。方法采用流式细胞术检测非小细胞肺癌患者化疗前、化疗后第7天、第21天外周血淋巴细胞亚群的比值,了解化疗对免疫系统的影响。结果非小细胞肺癌患者中,未手术患者化疗前外周血部分淋巴细胞亚群(CD3+、CD4/CD8比值)下降、NK细胞比值下降,经化疗可使T淋巴细胞亚群及NK细胞比值明显升高(P<0.05),B淋巴细胞比值均无明显变化;手术后患者化疗前后外周血淋巴细胞亚群比值变化无显著差别(P>0.05)。结论非小细胞肺癌患者中未手术者化疗前后免疫功能变化有明显差异,化疗可显著提高患者的免疫功能;手术后患者化疗前后免疫功能变化无明显差异。手术后患者的免疫功能高于未手术患者。