建鲤重组Cystatin蛋白的原核表达、鉴定及多克隆抗体制备

目的:对建鲤半胱氨酸蛋白酶抑制剂(CPIs)Cystatin进行原核表达和纯化鉴定,并以重组Cystatin为抗原制备多克隆抗体。方法:用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导转入pET-30a-Cystatin的E.coli BL21(DE3)表达重组蛋白,经过Ni 2+-NTA镍离子亲和层析纯化重组Cystatin,高效液相色谱鉴定重组Cystatin的纯度,Azocasein法测定其对木瓜蛋白酶的抑制作用。利用QuickAntibody-Mouse5W快速佐剂和纯化的重组Cystatin免疫Balb/C小鼠获得抗血清,采用夹心ELISA法鉴定抗血清的效价,Western blotting和免疫组织化学法鉴定抗血清的抗原识别特异性。结果:原核表达的目的蛋白相对分子质量约20 000;镍亲和层析纯化后重组Cystain在SDS-PAGE上显示单一条带,纯度>95%;Azocasein法检测,0.014μg重组Cystain抑制木瓜蛋白酶活性达50%以上;ELISA夹心法检测获得的Cystatin抗血清效价达到1∶512 000;Western blotting检测,转入pET-30a空质粒的全菌蛋白中未检测到Cystatin存在,而在转入pET-30a-Cystatin的全菌蛋白及纯化各步样品中均检测到Cystatin信号,且均为单一条带;免疫组织化学检测,建鲤各组织呈现不同强度的Cystatin阳性染色,抗血清中的多克隆抗体与原核和真核表达的Cystatin均特异性结合。结论:成功表达和纯化了建鲤Cystatin;获得含高效价多克隆抗体的Cystatin抗血清,具有高特异性和灵敏性。     

住院腹泻患儿杯状病毒感染特征分析

目的了解长春市儿童医院住院腹泻患儿杯状病毒(HuCV)感染病原及临床特征。方法采集2013-2017年2272例因腹泻住院患儿粪便标本和临床资料。应用逆转录PCR(Rt-PCR)方法扩增HuCV核酸,用测序及序列分析进行基因分型,同时分析临床表现。结果 2013-2017年长春市儿童医院住院腹泻患儿HuCV阳性检出率分别为17.49%、12.28%、13.55%、16.75%和22.56%,HuCV阳性检出率3-4年一个高峰,而且近年有增多趋势;腹泻HuCV感染可见NoV与SaV,NoV基因分组可见GⅡ、GⅠ和GⅠ/GⅡ基因型,以NoV的GⅡ型为主;HuCV感染年龄高峰为7-12月龄(36.76%),≤24月龄组占阳性患者的83.20%;发病高峰季节为每年12月至次年1-3月;临床表现63.25%伴有呕吐,58.79%伴有体温升高,46.72%出现呼吸系统症状;2.01%出现抽搐,平均住院日为(3.6±2.7)天。结论 HuCV是长春市婴幼儿腹泻的主要病原之一,长春市HuCV腹泻存在NoV和SaV两个属,多种基因型;2岁以下婴幼儿为HuCV腹泻的高发人群,HuCv感染呕吐和发热所占比例较高,同时伴有多系统损害。     

脑囊虫20例临床观察

脑囊虫是儿童较常见的寄生虫疾病，是引起小儿惊厥的重要原因之一，脑囊虫如不能及时的诊断和治疗，往往会造成病儿严重不良后果。该病如能及时诊断，正规的治疗，其结果令人满意。现将我科１９９６年间诊断及治疗的２０例脑囊虫病例报告如下。临床资料一、一般资料男１０...     

KA注射致痫大鼠脑组织中CX43的表达及其意义

目的探讨CX43与癫痫之间的关系。方法利用免疫组织化学方法、Westernblot方法测定KA致痫后大鼠不同脑区、不同时程的CX43的分布及表达。结果KA致痫后大鼠的大脑皮层及海马均有CX43阳性表达。KA致痫后3h大鼠的海马各区及皮层CX43阳性细胞数逐渐增多，并持续上升，时程越长阳性细胞数目越多。上述变化在海马比皮层明显。结论星形胶质细胞的缝隙连接与癫痫的发生和发展上有密切联系。     

缝隙连接蛋白32(CX32)在癫痫发病中的作用

目的初步探讨由CX32组成的缝隙连接与癫痫之间的关系。方法利用免疫组织化学方法、West-ernblot方法测定KA致痫后大鼠不同脑区、不同时程的CX32的分布及表达。结果KA致病后大鼠的大脑皮层及海马均有CX32阳性表达。KA注射致痫后的早期CX32的表达明显增强,第3天达到高峰,中、后期其表达逐渐减弱,表达量也逐渐减少。上述变化在海马比皮层明显。结论神经元上的由CX32组成的GJ可能在癫痫的始动和发生上有一定的作用,但在长期的、慢性的癫痫过程中其对癫痫的发生和发展的作用是逐渐减弱的。     

伊来西胺治疗和预防小儿复杂性热惊厥复发的疗效观察

目的:评价伊来西胺预防小儿复杂性热惊厥(CFC)复发的效果。方法:将45例CFC患儿随机分为两组,对照组20例给予常规退热及原发病治疗;治疗组25例在发热期间每日口服伊来西胺3～5 mg/kg用至体温正常,常规辅以退热及原发病治疗。所有病例随访1年。结果:服药5 h以内,对照组和治疗组意识恢复的总有效率分别为63.27%和80.64%(P<0.05);服药48 h以内,对照组和治疗组体温恢复的总有效率分别为61.58%和79.83%(P<0.05);对照组和治疗组的CFC复发率分别为45.00%和12.00%(P<0.05);对照组和治疗组的癫痫发生率分别为15.00%和4.00%(P<0.05),并且治疗组比对照组患儿的脑电图有明显改善。结论:伊来西胺对治疗和预防CFC复发有较好的效果。     

3．5岁幼儿型布鲁氏菌病脑膜炎1例报告并文献复习

目的报告1例3．5岁幼儿布氏杆菌脑膜炎误诊病例，复习相关资料，以提高对其认识。方法布氏杆菌脑膜炎3．5岁幼儿1例。患儿，男，3．5岁。因间断发热、头痛3个月入院。回顾性分析该患儿临床资料。检索国内外文献，进行总结分析。结果患儿为急性起病，病程长，主要表现为发热、头痛和脑膜刺激征阳性，脑脊液的改变早期类似于化脓性脑膜炎，后期类似于结核性脑膜炎，WBC轻度升高，早期以中性粒细胞为主，后期以淋巴细胞为主，蛋白增高，糖和氯化物降低。血清布氏杆菌抗体阳性，凝集效价为1：200。经头孢曲松钠、利福平和复方新诺明三联抗生素治疗，3周后脑脊液恢复正常。出院后继续口服利福平和复方新诺明6周，恢复良好。检索国内外文献发现，儿童布氏杆菌病神经系统并发症的发生率明显低于成人，以急性脑膜炎／脑膜脑炎为主。布氏杆菌脑膜炎为亚急性病程，脑脊液改变与结核性脑膜炎类似，临床易误诊为结核性脑膜炎。本病的治疗目前主张3种抗生素联合治疗，应选用易通过血脑脊液屏障的药物，总疗程不短于8周。结论3．5岁幼儿布氏杆菌脑膜炎临床少见，对于幼儿反复波动性发热，合并有诊断不明的脑膜炎／脑膜脑炎，尤其表现与化脓性或结核性脑膜炎类似者，应考虑布氏杆菌脑膜炎的可能性，需进行流行病学调查，详细询问牧区居住史以及牛羊制品食用史，并行血清凝集试验和脑脊液培养，以早期确诊。     

浅析多媒体技术应用于组织胚胎学教学应注意的问题

主要阐述了在组织胚胎学教学实践中，应用多媒体技术提高教学质量应该引起注意的几方面问题和相关对策。     

急性感染性多发性神经根炎患儿空肠弯曲菌感染与抗神经节苷脂GM_1抗体关系

目的：急性感染性多发性神经根炎(GBS)病因尚不清楚,目前认为与感染,尤其与空肠弯曲菌(CJ)感染有关,本文研究CJ感染与神经节苷脂(GM1)损伤的关系,探讨GBS的发病机理。方法：采用酶联免疫吸附试验测定31例GBS患儿(经典型急性感染性多发性神经根炎AIDP 23例,急性运动性轴素神经病AMAN 8例)急性期、恢复期血清和急性期脑脊液CJ-IgG抗体及GM1-IgG、GM1-IgM抗体的变化;并与非GBS神经系统疾病患儿(NGBS组)和10例正常儿童(正常组)对比。结果：AMAN急性期、恢复期血清CJ-IgG抗体水平高于NGBS组(P0.05)。GBS组脑脊液GM1-IgM水平高于NGBS组(P<0.05)。CJ-IgG与GM1-IgG、GM1-IgM具有明显的相关性(R=0.722,P=0.05)。结论：空肠弯曲菌感染是GBS发病的重要病因。神经节苷脂GM1的免疫损伤在GBS发病中起重要作用。     

儿童非结核分支杆菌脑膜炎1例误诊分析

<正>非结核性分枝杆菌(NTM)是指在分枝杆菌属中,除了结核分枝杆菌复合群(人型、牛型、非洲型和田鼠型结核分枝杆菌)和麻风分枝杆菌以外的分枝杆菌。非结核分支杆菌脑膜炎是由NTM引起。由于非结核分支杆菌与结核分支杆菌同为分支杆菌属,故非结核分支杆菌脑膜炎与结核分支杆菌脑膜炎的临床症状、X线胸片特点极为相似,单纯靠胸片和痰液结核分枝杆菌抗酸染色涂片是无法区分的。临床上往往在没有进行抗酸杆菌菌型鉴定的情