MODS技术的研究和应用进展

早期发现和诊断结核病(Tuberculosis,TB)病人、及时选用敏感药物给予有效治疗,是减少TB传播机会、控制TB疫情的关键环节。目前,病原学诊断仍是TB诊断的金标准,也是判断疾病活动性、传染性和疗效考核的主要指标。传统的TB病原学检查主要是涂片抗酸染色检查和罗氏培养基培养法(L-J法)。抗酸染色的优点是操作简单,快速,但敏     

长链非编码RNA NEAT1靶向miR-27b调控RA-FLS细胞生物学功能机制研究

目的 研究长链非编码RNA NEAT1靶向miR-27b调控类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（RA-FLS）细胞生物学功能机制。方法 选取2021年1月至2022年12月在南昌大学第一附属医院东湖院区风湿免疫科确诊的类风湿关节炎（RA）患者40例作为观察组,同期行膝关节手术的健康创伤患者40例作为对照组开展研究。分别采集观察组和对照组研究对象的膝关节滑膜组织中进行培养,培养成功之后将RA-FLS细胞根据免疫荧光分为对照组以及观察组。其中观察组待细胞汇合度达至80%时转入si-NEAT1,对照组则转入对照组-siRNA。比较两组NEAT1、miR-27b的表达,RA-FSL细胞生物学功能,炎症因子表达水平,并行Pearson相关性分析。结果 观察组NEAT1、miR-27b相对表达量分别相较于对照组均更低,差异有统计学意义（P<0.05）。观察组RA-FSL细胞增殖率、迁移细胞数、侵袭细胞数分别相较于对照组均更低,而细胞凋亡率相较于对照组更高,差异有统计学意义（P<0.05）。观察组白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平分别...     

肺结核患者外周血单个核细胞中lncRNA NEAT1的检测及临床意义

目的探讨肺结核患者外周血单个核细胞(PBMC)中长链非编码RNA(lncRNA)核富含丰富的转录本1(NEAT1)的表达及其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测65例肺结核病患者(结核组)及30例健康体检者(健康对照组)PBMC中lncRNA NEAT1的表达量,分析其与结核病发生发展以及转归的相关性。结果 RT-PCR检测结果显示lncRNA NEAT1在肺结核患者PBMC中的相对表达水平是健康对照组的4.90±0.72倍,差异有统计学意义(P0.01)。LncRNA NEAT1在初治和复治病例中表达差异无统计学意义(P0.05);lncRNA NEAT1在肺部有无空洞及空洞数量分组之间表达差异有统计学意义(P0.05),即lncRNA NEAT1随空洞累及范围的增加而升高。肺结核患者PBMC中lncRNA NEAT1表达量随着治疗时间逐渐下降,恢复至正常水平。结论肺结核患者PBMC中lncRNA NEAT1表达升高,且与肺结核的发展和转归有关,监测PBMC中lncRNA NEAT1表达或可以评估结核病患者预后情况。     

人参皂苷Rg1对LPS致心肌细胞损伤的保护作用及其对细胞lincRNA-COX2表达的影响

目的 探讨人参皂苷Rg1对脂多糖(LPS)诱导的小鼠心肌细胞损伤的保护作用及其对促炎分子lincRNA-COX2表达的影响.方法 分离培养原代BALB/c乳鼠的心肌细胞,用终浓度为25、50、100 μmol/L人参皂苷Rg1预处理12 h后,分别加入终浓度为10 mg/L的LPS刺激6 h(25、50、100 μmol/L人参皂苷Rg1+LPS组),以单纯10 μg/L LPS(LPS组)、未经人参皂苷Rg1及LPS处理(对照组)作对照,ELISA法检测心肌细胞培养上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)蛋白分泌;MTT法检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞活性氧(ROS)生成;RT-qPCR法检测细胞内lincRNA-COX2表达变化情况.结果 与LPS组相比,25、50、100 μmol/L人参皂苷Rg1+LPS组细胞培养上清液中的TNF-α、IL-6蛋白浓度呈剂量依赖性地减少,心肌细胞中lincRNA-COX2表达被抑制,心肌细胞的存活率相应提高.结论 人参皂苷Rg1能够保护LPS所致小鼠心肌细胞损伤,其机制可能与抑制炎症因子TNF-α、IL-6分泌,下调促炎因子lincRNA-COX2表达有关.     

显微镜观察药物敏感度检测技术在结核分枝杆菌吡嗪酰胺耐药性检测中的应用

目的建立显微镜观察药物敏感度检测(MODS)技术快速测定吡嗪酰胺(PZA)耐药性,并探讨其在结核分枝杆菌(MTB)PZA耐药性测定中的应用价值。方法用24孔细胞培养板建立MODS技术,进行PZA耐药性检测,并对最佳检测条件进行探讨。将该技术用于112株MTB临床分离株的PZA耐药性检测,将检测结果与罗氏绝对浓度法的药敏结果进行比较分析,对不符合的菌株进行最低抑菌浓度(MIC)测定和MTB pncA基因序列测定分析。结果 MODS检测PZA耐药性的最佳测定条件为pH=5.7,药物浓度为100μg/mL。如以绝对浓度法药敏结果为判断标准,MODS检测PZA耐药性的敏感度、特异度、准确度、阳性预测值和阴性预测值分别为95.7%、88.4%、92.9%、93.0%和92.7%。MODS与绝对浓度法检测结果不符的8株菌株中,MIC和pncA基因测序结果表明,有6株的MODS结果与MIC和pncA基因测序结果相符,2株的结果不符。结论 MODS检测MTBPZA耐药性具有快速、操作简便、价廉等优点,与绝对浓度法药敏结果有较高的符合率,可作为PZA耐药性的快速筛选方法之一。     

显微镜观察药敏检测技术检测结核分枝杆菌耐药性研究

目的建立快速测定耐药结核分枝杆菌(MTB)的显微镜观察药敏检测(MODS)技术,并评价其临床应用价值。方法采用24孔细胞培养板液体培养方法建立MODS技术,并对最佳检测条件进行探讨。应用该技术对192株MTB临床分离株进行利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素、氧氟沙星的药敏检测,并与传统绝对浓度法药敏结果进行比较,对两法检测结果不一致的菌株进行BACTEC-960测定。结果 MODS药敏检测时间中位数为6d。以绝对浓度法药敏结果为判断标准,MODS技术进行利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素、氧氟沙星药敏检测的敏感度分别为97.8%、98.7%、88.4%、93.2%、96.4%;特异度分别为98.0%、94.8%、94.3%、99.0%、95.6%;符合率分别为97.9%、96.4%、92.1%、96.4%、95.8%。结结论 MODS技术可作为MTB耐药性的快速检测方法。     

类风湿关节炎患者外周血T细胞PD1表达的分析和意义

目的 探讨程序性死亡分子1(PD1)在类风湿关节炎(RA)患者外周血CD4+T和CD8+T细胞上的表达及临床意义.方法 应用流式细胞仪检测66例RA患者和30例健康对照者外周血CD4+T和CD8+T细胞上PD1表达(平均荧光强度和百分率),比较RA组和健康对照组之间CD4+T和CD8+T细胞上PD1表达水平,分析其与RA实验室检查指标的相关性.结果 ①RA患者CD4+T、CD8+T细胞PD1表达的平均荧光强度(MFI)显著高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05);RA患者CD4+ PD1+T细胞百分率显著高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).②RA患者外周血CD4+T、CD8+T细胞PD1表达的MFI与DAS28评分呈正相关性(r =0.49,P＜0.000 1;r =0.40,P=0.0008).③RA患者外周血CD4+T细胞PD1表达的MFI与血沉(ESR)、C-反应蛋白(CRP)呈正相关性(r=0.45,P＜0.000 1;r=0.39,P=0.001);RA患者外周血CD8+T细胞PD1表达的MFI与CRP呈正相关性(rx=0.40,P=0.0009);RA患者外周血CD4+ PD1+T细胞百分率与CRP呈正相关性(r =0.24,P=0.048).④RA患者外周血CD8+T细胞PD1表达的MFI与类风湿因子(RF)呈正相关性(rs=0.32,P =0.009);RA患者外周血CD4+ PD1+T细胞百分率与RF呈正相关性(r=0.27,P=0.030).结论 RA患者外周血CD4+T和CD8+T细胞PD1表达异常,与疾病的活动性及抗体产生有关.