短片段扩增KIR基因的PCR-SSP分型法的建立及其应用

目的建立短片段扩增杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因的序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)分型法。方法选取330例湖南汉族健康志愿者血液标本,提取基因组DNA;合成短片段扩增KIR基因的序列特异性引物,采用PCR-SSP分型法扩增已知的16个KIR基因,分析湖南汉族人群KIR基因的频率分布特征。从330例DNA标本中随机选取100例,比较长、短片段扩增KIR基因的PCR-SSP分型法检测基因的阳性率差异。结果①短片段扩增KIR基因的PCR-SSP分型法可检测出所有KIR基因,扩增产物条带清晰,结果准确;②湖南汉族健康人群KIR2DL4、KIR3DL2、KIR3DL3、KIR3DP1基因阳性率均为100%,KIR2DL1、KIR2DL3、KIR3DL1、KIR2DS4、KIR2DP1基因阳性率分别为96.4%、96.1%、94.2%、94.2%和99.7%,而KIR2DS1、KIR2DL5、KIR3DS1、KIR2DL2、KIR2DS2、KIR2DS3、KIR2DS5基因阳性率均40%;③长、短片段扩增KIR基因的PCR-SSP分型法(长、短片段方法)均可检测出16个KIR基因,且KIR2DL3、KIR2DL4、KIR3DL2、KIR3DL3、KIR3DP1基因的阳性率一致,但长片段方法检测其余KIR基因的阳性率均低于短片段方法,其中短片段方法检测KIR3DL1、KIR2DS1、KIR2DS4、KIR3DS1基因阳性率均明显高于长片段方法(分别为94%vs.84%、40%vs.26%、94%vs.62%、38%vs.20%,均P0.05),同时漏检和误检降低。结论短片段扩增KIR基因的PCR-SSP分型法简单、易行、准确,具有良好的应用价值。     

双侧髋部和前臂骨密度的比较及其与体重的关系

目的　探讨双侧髋部和前臂骨密度之间的差异及其与体重的关系。方法　采用双能X线骨密度仪测量 5 5例 16～ 73(5 2± 10 )岁健康志愿者双侧髋部和前臂的骨密度。结果　双侧髋部对应区域骨密度呈高度正相关 (r =0 947～ 0 981) ,右侧骨密度均值高于左侧 (P <0 0 1) ,不同区域骨密度的平均差异为 2 %～ 3% ;双侧前臂对应区域骨密度呈高度正相关 (r =0 948～ 0 977) ,除桡骨远端1/ 3段骨密度右侧高于左侧外 (P <0 0 1) ,其余区域骨密度左右侧无差别 ;髋部除Ward区骨密度与体重无相关外 (r =0 0 35 ,P >0 0 5 ) ,其余区域骨密度与体重呈正相关 (r =0 2 88～ 0 42 8,P <0 0 5 )。前臂所有区域骨密度与体重无相关性。结论　髋部和前臂骨密度双侧呈高度正相关 ;负重区骨骼的骨密度与体重呈正相关     

羧基肽酶-H抗体与LADA患者胰岛β细胞功能关系的横断面研究

目的：探讨羧基肽酶-H自身抗体（CPH—Ab）与成人隐匿性自身免疫性糖尿病（LADA）患者胰岛β细胞功能的关系,以进一步明确其对LADA的诊断价值。方法：选择临床初诊2型糖尿病（T2DM）患者545例,采用放射配体法检测血清CPH—Ab和谷氨酸脱羧酶抗体（GAD-Ab）滴度,以筛出的CPH-Ab阳性患者为病例组,以GAD—Ab阳性患者和抗体阴性的T2DM患者为对照组,比较3组研究对象的胰岛β细胞功能（以空腹和餐后2hC肽值表示）,分析CPH-Ab与成人隐匿性自身免疫性糖尿病（LADA）患者胰岛β细胞功能的关系。结果：CPH—Ab阳性患者的空腹C肽介于GAD-Ab阳性与两种抗体（GAD-Ab和CPH—Ab）均阴性的T2DM患者之间（P〈0.05）,以病程分层后三者的C肽值仍具有统计学意义（均P〈0．05）,而以BMI分层无明显差异（均P〉0．05）。经以年龄、起病年龄、病程、性别等为协变量校正后,3组间的空腹C肽和餐后2hC肽值仍存在显著性差异（均P〈0,001）,其中CPH—Ab^＋组仅空腹C肽低于Ab—T2DM组（P〈0,05）,而GAD—Ab^＋组空腹和餐后2hC肽均低于Ab^-T2DM组（P〈0．05和P〈0．01）。胰岛素缺乏患者在CPH-Ab^＋组、GAD-Ab^＋组和Ab—T2DM组的比例分别为27．6％（8／29）,48．1％（8／52）和13．5％（54／400）,三者间差异有统计学意义（P〈0.001）。多元线性逐步回归分析提示,GAD-Ab,BMI和空腹血糖对T2DM患者的空腹C肽和餐后2hC肽均有影响（均P〈0．05）,而CPH-Ab与二者均无统计学相关（均P〉0．05）。结论：CPH抗体对LADA患者胰岛β细胞功能的影响不如GAD-Ab显著,CPH-Ab对LADA患者胰岛功能衰减的作用需前瞻性研究。     

谷氨酸脱羧酶65片段与IL－10双基因真核表达载体的构建与鉴定

 目的 优化以往构建的以预防 1 型糖尿病为目的的全长谷氨酸脱羧酶（GAD）65 DNA疫苗，尝试构建GAD 65片段与IL-10双基因真核表达载体。方法 从GAD65质粒中扩增出GAD190-315片段和GAD490-570片段的cDNA，以overlap PCR法将之分别与hIL-2信号肽cDNA拼接，得到SGAD190-315、SGAD490-570融合基因。以p43.2-mIL-10质粒为模板，用PCR方法扩增出IL-10基因。将SGAD190-315、SGAD490-570融合基因分别与IL-10基因依次克隆入双启动子真核表达载体pBudCE4.1中，构建出2种双基因重组真核表达载体pBud-SGAD190-315/IL-10和pBud-SGAD490-570/IL-10。2种重组真核表达载体经测序鉴定正确后，用脂质体介导的方法转染COS-7细胞，转染后48和72 h以蛋白质印迹法检测细胞裂解产物及上清液中SGAD190-315和SGAD490-570融合基因的表达，ELISA方法检测细胞上清液中IL-10的表达。结果　核酸序列测定表明克隆的SGAD190-315、SGAD490-570融合基因和IL-10基因序列与报告序列一致。蛋白质印迹法和ELISA方法均检测到SGAD190-315/IL-10和SGAD490-570/IL-10重组真核表达载体在COS-7细胞中的表达。结论　成功构建了2种GAD65片段与IL-10双基因真核表达载体，为1型糖尿病的基因疫苗预防研究提供了实验基础。     

吡啶酚和脱氧吡啶酚与骨吸收

吡啶酚和脱氧吡啶酚已成为骨吸收特异性新指标，在临床上正逐渐被采用。本文介绍其生化特性、规定方法以及在各种代谢性骨病诊断和治疗监测中的应用。     

女性不同绝经年龄骨密度和骨强度256例分析

目的　研究绝经年龄对女性骨密度和骨强度的影响 ,为骨质疏松症 (OP)的预防提供科学依据。方法　采用双能X线骨密度仪和骨超声仪 ,测量 2 5 6例绝经年限 10～ 2 5年的健康女性志愿者骨密度 (BMD)和胫骨超声传导速度 (SOS) ,按绝经年龄不同分为Ⅰ组 (绝经年龄 <4 5岁 )、Ⅱ组 (绝经年龄 4 5～ 5 1岁 )、Ⅲ组 (绝经年龄>5 1岁 )进行分析。结果　三组除腰椎正、侧位 ,髋部wards区 ,尺骨和桡骨超远端外 ,其他部位BMD均与绝经年龄呈正相关 (r =0 10 7～ 0 2 11,P <0 0 5或P <0 0 1) ;Ⅱ、Ⅲ组髋部股骨颈、髋部总体、尺骨和桡骨远端 1/ 3段、尺骨和桡骨总体BMD均高于Ⅰ组对应部位 (P <0 0 5或P <0 0 1) ,且OP的患病率均低于Ⅰ组 (P <0 0 5或P <0 0 1) ;Ⅱ、Ⅲ组之间各部位BMD以及OP的患病率差异无显著性意义 ;胫骨SOS值与绝经年龄无相关性 ,且Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组之间胫骨SOS值以及OP的患病率差异无显著性意义 (P >0 0 5 )。结论　绝经年龄早 (<4 5岁 )主要引起皮质骨BMD降低 (腰椎正位除外 ) ,对松质骨BMD影响小 ;正常和晚绝经年龄对BMD影响小 ;绝经年龄对骨强度影响小     

1型糖尿病患者酪氨酸磷酸酶2β抗体检测的临床意义

目的 探讨1型糖尿病(T1DM)患者中蛋白酪氨酸磷酸酶2β抗体(IA-2βA)的分布规律及阳性患者的临床特征.方法 采用放射配体法检测401例T1DM患者、200例正常对照血清中IA-2βA、IA-2A和谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)水平,并分析抗体阳性患者的临床特征.结果 (1)T1DM组IA-2βA阳性率8.7%(35/401).显著高于正常对照组(1.0%,P＜0.05);(2)35例IA-2βA阳性患者中,同时合并IA-2A阳性的患者16例,阳性重叠率45.7%.IA-2βA与IA-2A指数无相关性(r=0.021,P=0.780);(3)T1DM患者中,IA-2A、IA-2βA阳性率在0～9岁组最高,二者阳性率显著高于10岁以上的T1DM患者(62.8% vs 19.7%,x2=31.41,P＜0.001;20.0% vs 7.6%,)(x2=6.11,P＜0.05).而GADA阳性率在各年龄组中差异无统计学意义;(4)与单独IA-2A阳性患者比较,单独IA-213A阳性患者年龄和起病年龄较大(IA-2A阳性患者平均年龄24.2岁,平均起病年龄21.6岁;IA-2βA阳性患者平均年龄35.5岁,平均起病年龄34.0岁,均P＜0.05).结论 IA-2βA在儿童T1DM患者中阳性率较高,且随年龄增长阳性率下降.IA-2βA是糖尿病患者自身免疫检测的一项实用指标.     

女性腰椎峰值骨量与骨骼大小的关系

目的　了解女性腰椎骨骼大小对峰值骨密度 (BMD)的影响。方法　采用QDR 450 0A型扇形束DXA骨密度仪 ,测量 52 7例年龄 2 5～ 3 9岁健康女性前后位 (正位AP)腰椎 1～ 4椎体和侧位 (Lat)腰椎 2～ 4椎体的投射骨面积 (BA)、骨矿含量 (BMC)和面积BMD(aBMD)及AP/Lat相伴扫描测量腰椎的体积BMD(vBMD)。用直线和多元线性回归分析骨量与BA、身高和体重之间的关系。按不同BA分组 ,了解各组之间骨量的差异。结果　BA与BMC(r =0 .79和 0 .78,均P <0 .0 1)和aBMD(r =0 .40和 0 .3 8,均P<0 .0 0 1)呈正相关 ,Lat BA与vBMD相关有显著意义 (r =0 .14 ,P <0 .0 1)。AP BA每变化 1个标准差 ,AP BMC和AP aBMD在平均值的基础上分别相应变化 13 .1%和 4.47% ;Lat BA每变化 1个标准差 ,Lat BMC、Lat aBMD和vBMD在平均值的基础上分别相应变化 13 .3 %、4.4%和 1.5% ;AP BA的全距变化所致AP BMC和AP aBMD的变化分别约为 78.6%和 2 6.8% ,Lat BA的全距变化所致Lat BMC、Lat aBMD和vBMD的变化分别约为 79.8%、2 6.3 %和 8.94%。不同BA组之间的身高、体重、BMC和aBMD均具有非常显著性意义 (均P <0 .0 0 1)。影响BA、BMC和Lat aBMD的主要因素为身高 ,影响AP aBMD的主要因素为体重。结论　BMC除以BA不能完全消除骨骼大小对aBMD的影响     

椎间孔镜在临床应用的回顾性分析

目的探讨经皮内镜椎间孔入路椎间盘切除术(transforaminal percutaneous endoscopic lumbar discectomy,TF-PELD)治疗腰椎间盘突出症(lumbar disc heniation,LDH)的临床效果及安全性。方法回顾性分析2016年1月至2017年2月,我院收治的70例LDH患者的临床资料,其中34例采用TF-PELD治疗(观察组),36例采用开放性手术(对照组),术后随访6个月,随访率100%,评价并分析两组手术指标和治疗效果。结果观察组手术时间长于对照组[(65.3±7.2)min vs.(58.4±6.4)min],但出血量[(47.3±8.5)ml vs.(142.4±12.3)ml]、下床活动时间[(1.6±0.5)天vs.(13.4±2.4)天]和住院时间[(4.9±1.5)天vs.(16.2±3.9)天]均少于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。两组患者术后3个月和6个月时的疼痛视觉模拟评分(visual analogue scale,VAS)和Oswestry功能障碍指数(oswestry disability index,ODI)评分均显著低于术前,差异有统计学意义(P0.05);观察组术后3个月(2.41±0.82 vs.4.34±0.93)和术后6个月(1.61±0.56vs.2.17±0.78)的VAS显著低于对照组,差异有统计学意义(P0.05);观察组术后3个月(23.27±7.79 vs.35.47±8.24)和术后6个月(14.45±3.47 vs.18.66±5.18)的ODI评分显著低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。观察组和对照组Mac Nab疗效优良率分别为91.18%和69.44%,差异有统计学意义(P0.05)。结论 TF-PELD治疗LDH安全有效、术后恢复快、并发症少,值得临床推广。     

自发酮症起病的肥胖糖尿病患者的临床特征及分型

目的 探讨自发酮症或酮症酸中毒起病的肥胖糖尿病患者的临床特征及分型。方法 将66例自发酮症起病的糖尿病患者根据体重指数分为低体重组、正常体重组和肥胖组，比较肥胖组与其它两组在年龄、性别、起病情况、谷氨酸脱羧酶抗体(GAD—Ab)和(或)蛋白酪氨酸磷酸酶抗体(IA2-Ab)阳性率及胰岛功能等方面的差异，并对肥胖组患者进行HLA—DQAl和DQBl基因分型和随访观察。结果 3组之间起病时的血糖升高、体重下降及酮症和酸中毒程度差异并无显著性，但是肥胖组与低体重组相比，存在血甘油三酯较高、GAD—Ab和(或)IA2—Ab阳性率较低、发生酮症或酮症酸中毒时的胰岛素缺乏程度较轻等特点。随访肥胖组15例患者发现有9例患者可停用胰岛素治疗。肥胖组12例抗体阴性患者中，6例不带有1型糖尿病HLA易感基因型。结论 自发酮症或酮症酸中毒起病的肥胖糖尿病患者具有明显不同于非肥胖组的临床及免疫学特征，其中一部分可考虑分型为特发性1型糖尿病。