SO3—一种新型具镇痛活性的芋螺多肽

目的：通过对中国南海线纹芋螺毒素的基因克隆、多肽的化学合成 量筛选,获得一种具有镇痛作用的芋螺多肽SO3。该太含有25个氨基酸残基CKAAGKPCSRIATNCCTGSCRSGKC－NH2,三对二硫键,其作用靶位为N型钙通道。方法：小鼠采用侧脑室给药,每只20μl。小鼠镇痛活性采用热板法、光热辐法及扭体法测定,大鼠采用脊髓鞘内套管给药,每只10μl,大鼠镇痛活性采用烫尾法及尾部压痛法。结果：生物活性测这表明该肽对小鼠的镇痛活性ED50为0．75μg/kg,对小鼠的急性毒性试验LD50为13．5mg/kg.LD50比ED50大18000倍,具有很高的用药安全性。论：国外已进入Ⅱ-Ⅲ期临床实验的ω－芋螺毒素MVIIA进行对照实验的结果表明两者活性相当,SO3毒副作用更低,而且作用靶位与MVIIA类似,无成瘾性。SO3具有诱人的药物发展前景。     

禽流感病毒NP基因的酵母双杂交饵载体表达及自激活检测

目的构建H5N1亚型禽流感病毒NP基因的酵母双杂交诱饵载体,验证其在酵母中的表达并检测其自激活作用。方法以PCR法从pGEMT/H5NP扩增NP基因编码区序列,将其定向克隆到PGBKT7载体,经测序鉴定后,PEG/Li-Ac法转化酵母菌株AH109,用表型筛选法及颜色筛选法检测其自激活作用同时Westernblot验证诱饵蛋白的表达。结果获得NP编码区基因,并成功构建酵母双杂交系统中的诱饵载体pGBKT7-NP,对宿主细胞酵母菌株AH109无毒性和自激活作用,并能在酵母细胞中稳定表达。结论诱饵载体pGBKT7-NP可用于GAL4酵母双杂交系统钓取与禽流感病毒核蛋白相互作用的蛋白。     

EZH2在肝癌发生发展中功能的研究进展

多种因素引起的原癌基因激活和抑癌基因失活是导致肝癌发生发展的主要原因.EZH2是新近发现的具有组蛋白甲基转移酶活性的癌相关基因,主要通过催化H3K27me3修饰介导基因沉默,参与X染色体失活、细胞分化和胚胎发育调节.近来发现,EZH2在多种机制调节下在肝癌组织中过度表达,通过多种机制调控其下游基因异常表达,从而参与肝癌...     

MM-7基因工程双价疫苗对新疆细毛羊免疫效果的研究

应用ＭＭ－７基因工程双价疫苗免疫产前１５天的新疆细毛孕母羊，并通过改变产前１５天孕母羊机体免疫水平，由初乳被动免疫羔羊。在免疫孕母羊后１０，２０，３０，４０，５０，６０，７０天分别检测免疫组及对照组血清特异性中和抗体ＩｇＧ及ＩｇＡ动态水平，观察两组腹泻发病率，死亡率情况和ＭＭ－Ｕ基因工程双价疫苗的免疫保护效果。     

大肠杆菌耐热性肠毒素ST_(1b)基因的亚克隆、重组及其核苷酸序列分析

产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)是幼畜、婴幼儿及旅游者腹泻的重要病原菌之一。作者以大肠杆菌pSLM004菌株为始发菌株,利用合成的一对与ST_1基因特定序列相匹配的引物,通过PCR扩增出了ST_(1b)基因。该基因片段扩增物(150bp)经适当方法纯化,与克隆载体pUC18的HlincⅡ位点平端连接,转化到受体菌JM101中。利用氨苄青霉素(Ap)抗性作为压力选择标志以及LacZ基因插入失活显色反     

组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)新型突变体克隆载体的构建

目的构建含有K10Q、R30I、S165W及K10Q/R30I/S165W4种t PA突变体。方法采用PCR重叠延伸法进行突变体的构建。结果成功地构建了上述4种t PA突变体克隆质粒 ,测序结果表明构建完全正确。结论PCR重叠延伸法为构建突变体的可靠快捷的方法。     

肝癌细胞特异性结合抗体的筛选及序列测定

目的通过噬菌体展示技术筛选与肝癌细胞特异性结合的抗体.方法用肝癌细胞系SMMC7721免疫小鼠,提取脾细胞总RNA,构建单链抗体库,从中筛选特异性结合的抗体.结果构建了一个库容量为2×105的单链抗体库,并筛选到1个与肝癌细胞系HepG2特异性结合的噬菌体-单链抗体.此单链抗体与HepG2细胞结合滴度比正常肝细胞低125倍以上.结论本研究成功构建了单链抗体库并筛选到与靶细胞特异性结合的噬菌体-单链抗体.     

重组人红细胞生成素大规模制备中反相色谱的条件优化

目的优化重组人红细胞生成素(rhEPO)大规模制备纯化中主要影响回收率的反相色谱的条件,提高回收率。方法采用反相纯化作为三步法纯化的第一步,利用R1型反相填料采用不同分步洗脱条件进行洗脱。结果优化后经第一步反相色谱所得rhEPO蛋白纯度达70%,再通过阴离子交换和凝胶过滤色谱纯化,rhEPO终产物的纯度可达100%,体内比活达1.91×105IU/mg,rhEPO蛋白的回收率提高了1.2倍。结论优化的反相纯化条件(30%乙醇-1.5 mol/L尿素,60%乙醇-3.0 mol/L尿素)能更有效的从培养上清中大量纯化出rhEPO,回收率高。获得的产品纯度高,体内外活性好。适合大规模纯化。     

不同分化胆管癌差异表达基因的分离、克隆和功能研究

从分子水平研究胆管癌发病机理及病理过程 ,对认识及防治胆管癌都具有重要的理论和实际意义。基于临床研究的结果[1] ,我们采用Ｌｉａｎｇ 1992年建立的差异显示法 (ＤＤＲＴ ＰＣＲ) [2 ] ,来寻找高、低分化胆管癌间差异表达基因的ｃＤＮＡ。1 材料和方法 :(1)采用ＴＲＩｚｏｌ总ＲＮＡ提取试剂盒 ,分别提取高分化、低分化胆管癌新鲜组织总ＲＮＡ ,逆转录合成单链ｃＤＮＡ。 (2 )ＤＤＲＴ ＰＣＲ :在 2 0 μＬ体系中对 2 μＬ逆转录产物进行扩增 ,加入2 μｍｏｌ/Ｌ 4ｄＮＴＰｓ,5 μｍｏｌ/Ｌ锚定引物Ｔ15Ｍ ,1μｍｏｌ/Ｌ随机引物 ,37Ｂ…