生长抑制特异性基因研究进展

生长抑制特异性基因是指培养过程中血清饥饿或细胞接触抑制时表达上调的基因。生长抑制特异性基因编码的蛋白产物包括Gas1、Gas2、Gas3……Gas11等。这些蛋白具有不同的功能，如调控微丝组装、神经细胞生长或分化、凋亡、酪氨酸激酶受体活性以及正或负调控细胞周期。gas基因间没有序列同源性或一致的结构特征。本文就目前已报道的gas基因的研究进展进行概述。     

人细胞周期相关激酶(CCRK)启动子的分析和特征研究

目的：分析人CCRK基因启动子、启动子的核心序列及与其表达相关的转录因子。方法：采用5’-RACE技术鉴定人CCRK基因的转录起始点；对启动子区3’端3个截短片段255bp(-367／-128)，210bp(-322／-128)和160bp(-272／-128)进行删除分析，双荧光素酶分析测出的最小活性片段作为核心启动子的上游位点。通过生物软件Matlnspector V2．2分析核心启动子区域，寻找并推测重要的转录因子，并对其核心序列进行定点突变分析，再通过电泳迁移率(EMSA)实验加以鉴定。结果：采用5‘-RACE技术，得到的PCR产物直接测序，定位-242“T”为转录起始点；通过启动子3’端小片段删除分析，255，210和160bp均无活性，由此判断3’端255个核苷酸不存在核心启动子序列，并定位一段74bp的区域为核心启动子(-441／-367)区域。通过Matlnspector软件分析，发现在这段核心启动子区域内有3个重要的结合位点：Delta EF-1，NF-κB和Spl。对这3个结合位点的核心序列进行定点突变后瞬时转染U373，经双荧光素酶分析发现Delta EF-1的活性明显升高，NF-κB没有变化，Spl的活性降低但不太明显。进一步通过电泳迁移率(EMSA)实验鉴定，Delta EF-1和NF-κKB能与U373核蛋白形成特异性的DNA-蛋白质复合体，表明Delta EF-1和NF-κB两个转录因子与人CCRK基因表达相关。结论：对人CCRK启动子的特性研究，为今后认识该基因的转录调控机制打下了基础，为揭示恶性神经胶质瘤的发生机制及防治措施的研究提供了新的思路。     

蛇毒中趋化活性成分的分离、鉴定

蛇毒中的某些组分与趋化因子功能相似,都具有体内溶血、体外凝血的作用,可能其中含有某些趋化因子。我们利用电泳从蛇毒中分离出30 0多个分子量与趋化因子相近的小肽,并以此为样品库,利用趋化小室从中筛选出19种活性成分,将这19种活性成分用细胞微生理检测仪(Cytosensor)进行筛选。当有趋化作用的样品与细胞上的受体结合时,细胞的新陈代谢被破坏,进而细胞周围环境的pH值将随之变化,这样Cytosen sor就可以通过pH值的变化来检测样品是否有趋化能力。Cytosensor筛选试验选用的细胞是THP 1细胞,它需要用含0 .1%牛血清白蛋白(BSA)的RPMI 16…     

鼠疫耶尔森菌菌株91001全基因组序列测定及初步分析

目的 测定对人不致病的鼠疫耶尔森菌布氏田鼠疫源地菌株91001的全基因组序列,并通过比较基因组学研究,探索鼠疫耶尔森菌致病性的遗传学机制和进化路线。方法 采用全基因组鸟枪法测定91001菌株的全基因组序列,利用比较基因组方法对91001与另外2株鼠疫耶尔森菌(CO92和KIM)的全基因组进行比较研究。结果 91001菌株的基因组包括1条染色体和4个质粒(pPCP1、pCD1、pMT1和pCRY)。pPCP1质粒长度为9609bp,与参考菌株基本一致;pCD1质粒是编码Ⅲ型分泌系统的质粒,长度为70159bp,编码情况与参考菌株基本相同,但重排导致了质粒的结构与参考菌株存在差异;pMT1质粒长度为106642bp,保留了较多的原始质粒片段,毒力相关基因与参考菌株没有差异;pCRY质粒是本研究中新发现的质粒,在国内外研究中未曾报道,这一质粒长度为21742bp,具有独立复制能力,有一群编码Ⅳ型分泌系统的基因。91001菌株的染色体长度为4595065bp,有4037个编码序列(CDS),其中141个是假基因;染色体中存在着非常丰富的插入序列,由于存在IS序列介导的基因组重排,91001菌株染色体的结构与参考菌株存在较大差异。通过比较基因组学分析,初步确定了91001菌株甘油降解阳性、硝酸盐还原阴性、阿拉伯糖分解代谢阴性以及蜜二糖分解阳性的遗传基础。结论 根据质粒结构、染色体基因组重排、硝酸盐还原阴性的机制以及假基因的分布等信息,推测以91001菌株为代表的田鼠型菌株是原始鼠疫耶尔森菌进化过程中的另一个分支,与现有菌株存在着比较明显的差异;而91001菌株独特的致病性可能与基因组中的假基因或大片段缺失有关。     

鼠疫耶尔森菌DNA标识序列的鉴定及其应用研究

目的确定鼠疫耶尔森菌DNA标识序列,以用于鼠疫耶尔森菌的快速检测和鉴定。方法通过芯片比较基因组杂交和PCR验证,鉴定鼠疫耶尔森菌DNA标识序列,针对标识序列设计特定的PCR引物。结果鼠疫耶尔森菌基因组中存在3个区段,共28条基因,均是鼠疫耶尔森菌DNA标识序列。针对其中3条基因设计PCR引物,能特异性扩增出鼠疫耶尔森菌,与来自其他非鼠疫耶尔森菌的DNA无交叉反应。结论鼠疫耶尔森菌存在DNA标识序列,并能用于鼠疫耶尔森菌的快速检测与鉴定。     

应用基因芯片技术比较两种不同表型的胆管癌组织中基因表达的差异

目的 研究与胆管癌侵袭、转移表型及预后相关的基因表达情况。方法 应用基因芯片（cDNA array）技术,从两个胆管癌标本分离得到的 mRNA逆转录合成探针,分别与尼龙膜上的14802个基因进行杂交,杂交后的膜经扫描仪成象和软件进行光密度分析后得出表达发生改变的基因。结果 所分析的14802个基因或序列中,表达差异的基因或序列共有754条,其中有455条是已知功能的基因,经进一步分析得出有30余条是比较有意义的,如:MUC18、KGF、TCF-4、PSP94、Smad5、TACC1、α-Catenin、Syndecan-1、Angiogenin、myosin等。结论 胆管癌组织中与肿瘤转移及预后相关的基因是很多的,应用基因芯片技术,为同时分析多个基因的表达状况提供了一个可用的方法,这一方法为了解不同生命过程中基因表达概况提供了一种途径。