不同分化胆管癌间差异表达基因的研究

目的 从基因表达水平上探讨不同分化胆管癌及其预后的机理,寻找与胆管癌分化发育相关的基因,从整体上分析不同分化胆管癌差异表达基因的情况,为胆管癌的早期诊断和治疗寻找一些Marker。方法 从高、低分化胆管癌组织中提取总RNA作为比较材料,采用差异显示PCR（DDRT-PCR）技术,将两种组织中差异表达的基因cDNA经PCR扩增,采用反向Northern blot鉴定,以排除假阳性,将有显著差异的PCR产物克隆到质粒载体上,测序并进行同源性比较。结果 得到了9个有显著差异的cDNA片段,其中一个序列分析的结果与LR（Laminin receptor）基因序列高度同源。另有一个序列与EST的大量序列同源。结论 通过对差异显示技术一系列条件的探索和改进,建立了有效的DDRT-PCR法,并在高、低分化胆管癌差异表达基因的研究方面获得了满意结果。     

多肽在生物医药和诊断试剂中的应用

简要介绍多肽作为药物及诊断试剂的特点、主要的筛选途径及国内外研究概况。系统介绍多肽在疫苗、抗肿瘤、抗病毒及抗菌药物、导向药物、细胞因子模拟肽、诊断试剂等领域的研究及应用情况     

芋螺毒素分子生物学研究进展

从海洋软体动物芋螺中分离纯化的芋螺毒素是一类具有特异生物活性的小肽神经毒素，目前芋螺毒素一方面作为神经生物学的重要分于探针正广泛应用于相关靶受体的基础研究中，另一方面则用于研制特异诊断试剂及疗效特异的新药，并作为分子模型用新药设计，研究涉及蛋白质化学，化学，药理学，电生理及分子生物学等诸多领域，本文综述了近年芋螺毒素分子生物学研究的进展。     

产组织型纤溶酶原激活剂CHO工程细胞无血清培基的研究

在对ＤＭＥＭ：Ｆ１２（１：１）进行优化的基础上,以细胞生长和组织型纤溶酶原激活剂（ｔ－ＰＡ）表达为评价指标,筛选无血清培养基添加成分,建立了由优化ＤＭＥＭ：Ｆ１２（１：１）,胰岛素,ＰｌｕｒｏｎｉｃＦ－６８维生素Ｃ,乙醇胺和微量元素混合液组成的适于产ｔ－ＰＡＣＨＯ工程细胞４Ｂ３生长和ｔ－ＰＡ表达效果均优于相同条件下用含血清培基培养的效果。     

鼠疫耶尔森菌菌株91001的蛋白质组学初步研究

目的建立鼠疫耶尔森菌的蛋白质组学研究方法,获得鼠疫耶尔森菌的基本蛋白质组数据。方法以对人无致病能力的布氏田鼠疫源地菌株91001为研究对象,按照溶解性的不同分别收集菌体蛋白,以3种不同方法(Shotgun-LC-MS-MS,1D-LC-MS-MS和2D-MS)进行分析,将分析数据与基于91001菌株基因组全序列建立的蛋白质理论数据库进行比对,确定91001菌株本实验培养条件下所表达的蛋白组分。结果Shotgun-LC-MS-MS方法鉴定了971种蛋白,1D-LC-MS-MS鉴定了915种,而2D-MS方法则鉴定了233种蛋白质,三者合计为1193种蛋白质,占基因组预测CDS的28．7％(1193／4143)。结论不同的蛋白质组分析方法鉴定的蛋白质种类和数目都存在差异,为更全面地获得鼠疫耶尔森菌蛋白质组数据,有必要同时采取多种方法进行分析。     

重组人肿瘤坏死因子突变体的构建和表达

运用ＰＣＲ技术，对天然人肿瘤坏死因子α（ｈｕｍａｎｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ一α，ＴＮＦ）基因进行了改造，去除了天然ＴＮＦＮ端的７个氨基酸，同时以Ａｒｙ￣８Ｌｙｓ￣９Ａｒｇ１０Ｐｈｅ１５７分别取代了原来的ＰｒｏＳｅｒＡｓｐＬｅｕ，形成新的突变体ＴＮＦ△。将突变体克隆于表达载体ｐＢＶ２２０后，在Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α中得到了表达，表达产物的分子量为１７ＫＤ。表达量为菌体总蛋白量的１５％。Ｌ９２９细胞的杀伤活性为２．２×１０６Ｕ／ｍｌ，是天然ＴＮＦ活性的七倍。本工作对研制高效低毒副作用的ＴＮＦ制剂具有重要意义。     

组织型纤溶酶原激活剂基因治疗预防血管成形术后再狭窄的实验研究

用１８条犬探讨了组织型纤溶酶原激活剂（ｔ－ｐＡ）基因治疗预防经皮冠状动脉成形术（ＰＴＣＡ）后再狭窄的应用价值，其中对照组６条犬．１２条在建立再狭窄模型时即用多孔球囊输注导管将ｔ－ｐＡ基因逆转录病毒载体直接注入血管壁，经过３０、６０、９０ｄ不同时间的观察，结果表明，在ＤＮＡ水平（原位杂交，Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ）、转录水平（ｍＲＮＡ打点杂交）及产物水平（免疫组化）等方面均证实了ｔ－ＰＡ基因的存在和活性产物表达，而且发现这种活性ｔ－ｐＡ使再狭窄犬模型的百分狭窄面积在３个月时减少了２２．２％，有较好的预防再狭窄作用。     

鞘内注射ω-芋螺毒素SO3对神经痛大鼠脊髓Fos及Jun蛋白表达的影响

目的：ω-芋螺毒素SO3是从海洋生物线纹芋螺中提取的一种多肽,为新型、特异性N型电压敏感性钙离子通道阻滞剂.通过研究鞘内注射ω-芋螺毒素SO3对坐骨神经慢性挤压伤（CCI模型）大鼠脊髓Fos、Jun蛋白表达的影响,探讨N型钙通道在伤害性信息传递中的作用.方法：雄性SD大鼠72只,随机均分为9组,其中3组为假手术或单纯制作CCI模型后3、14 d;3组为单次鞘内注射生理盐水或不同剂量SO3;另3组为持续鞘内注射生理盐水或不同剂量SO3共 7 d.在预定时间点,经左心室灌注4%多聚甲醛,取L4-L6段脊髓制备石蜡切片.用相应抗体行免疫组织化学染色,检测各组动物脊髓标本中Fos样或Jun样免疫反应阳性细胞的数量.结果：大鼠CCI后脊髓背角Fos样或Jun样免疫反应阳性细胞数量显著升高;单次或持续鞘内注射生理盐水对其无明显影响;单次或持续鞘内注射SO3均可剂量依赖性抑制其上升.结论：神经损伤后脊髓Fos、Jun蛋白表达增加,鞘内注射SO3可以减轻此种反应,提示N型钙通道阻滞剂在脊髓水平可以部分阻断伤害性信息传递.     

芋螺毒素ω-SO3单次及连续给药对福尔马林致大鼠炎性疼痛的镇痛作用

目的评价单次及连续鞘内给药ω-SO3对福尔马林致大鼠炎性疼痛的镇痛作用。方法采用福尔马林致大鼠炎性疼痛模型,通过大鼠鞘内置管术分别单次及多次鞘内给药,观察ω-SO3对炎性疼痛急性期和持续期的镇痛强度和有效时间以及连续给药对其镇痛作用可能的影响;通过大鼠自发活动实验评价ω-SO3单次鞘内给药可能引起的中枢副反应。结果在大鼠福尔马林炎性疼痛模型上,单次鞘内给药ω-SO3产生剂量及时间依赖性的镇痛作用,其抑制炎性疼痛急性期和持续期的ED50值分别为1.79和0.41ng.g-1,比吗啡的镇痛作用强并且有效时间长;以ED80剂量每日鞘内给药2次连续5d后,ω-SO3仍然产生与单次给药类似的镇痛强度,而吗啡的镇痛作用降低,说明产生镇痛耐受,更有意义的是ω-SO3对吗啡镇痛耐受大鼠仍具有镇痛作用。在上述镇痛剂量范围内,ω-SO3单次鞘内给药对大鼠自发活动没有明显的影响。结论ω-SO3对福尔马林致炎性疼痛的急性期和持续期均具良好的镇痛作用,其镇痛作用强,有效时间长,连续给药不产生自身镇痛耐受,并且对吗啡不产生交叉耐受。     

化学修饰对组织型纤溶酶原激活剂的纤溶活性和体内半衰期的影响

用肝素、右旋糖酐和聚乙二醇对重组组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)进行化学修饰。不同的化学修饰物对rt-PA体外纤维蛋白溶解活性的影响不同。肝素修饰小PA的纤维蛋白溶解活性提高63％;右旋糖酐和聚乙二醇修饰rt-PA的纤维蛋白溶解活性则分别降低了36％和63％。rt-PA经化学修饰后半衰期均有所延长,其中聚乙二醇修饰的小PA的半衰期由修饰前的3．4min延长至6．3mim。