肝癌特异性HSV-TK/CD基因表达质粒的构建及其杀伤活性

[目的]构建肝癌特异性双自杀基因表达质粒.[方法]用平端连接方法将pUH-3质粒中822 bp的pALBeAFP片段(含有416 bp的白蛋白启动子pALB和406 bp的甲胎蛋白增强子eAFP)代替pCEA-CD/TK质粒的CEA启动子,用PCR法鉴定插入方向,构建肝癌特异性双自杀基因表达质粒pALBeAFP-CD/TK.将pALBeAFP-CD/TK转染HepG2等4种肝癌细胞,MTT法测定前药GCV、5-FC对HepG2细胞的杀伤作用.[结果]获得pALVeAFP-CD/TK克隆,RT-PCR证实HepG2细胞转染pABeAFP-CD/TK后可表达自杀基因,pALBeAFP-CD/TK转染可使前药GCV、5-FC特异性地杀伤HeFG2细胞.[结论]肝癌特异性HSV-TK/CD基因表达质粒构建成功.     

B7-1分子诱导体外抗肝癌免疫反应

目的：了解Ｂ７分子在体外抗肝癌免疫中的作用。方法：健康人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）与ＨｅｐＧ２／ｈＢ７－１，ＨｅｐＧ２／ｎｅｏ及亲代ＨｅｐＧ２瘤苗混合培养（ＭＬＴＣ），检测淋巴细胞活化增殖能力，淋巴细胞ＨＬＡ－Ｉ类抗原的表达，培养上清ＩＦＮ－γ水平，ＴＮＦ活性及ＬＡＫ，ＣＴＬ细胞活性。结果：ＨｅｐＧ２／ｈＢ７－１瘤苗促淋巴细胞增殖最高达１４．６倍，明显高于ＨｅｐＧ２／ｎｅｏ和ＨｅｐＧ２瘤苗的作用     

腺病毒携带人内皮抑素基因在舌癌细胞和血管内皮细胞中的表达

【目的】以腺病毒携带的人内皮抑素基因 Endostatin基因 (Ad/hEnd)感染舌癌细胞株Tca8113和人脐静脉内皮细胞株ECV30 4,观察其在舌癌细胞和静脉内皮细胞株中的表达。【方法】用 2 93细胞扩增Ad/hEnd ,并抽提、纯化。以 10MOI的Ad/GFP感染ECV细胞 ,观察细胞中表达绿色荧光蛋白的细胞所占的比例。采用免疫组化法检测Endostatin蛋白在感染了Ad/hEnd的Tca细胞和ECV细胞中的表达。Ad/hEnd感染Tca细胞后收集细胞培养液上清 ,ELISA检测上清中Endostatin蛋白含量。Western blot检测Endostatin蛋白在Tca和ECV细胞中的表达。【结果】扩增的Ad/hEnd通过空斑形成试验准确测定其滴度可达 1× 1 0 1 0 ～ 8× 1 0 1 0 PFU/mL。表达绿色荧光蛋白的细胞所占的比例为 31 %。实验显示感染Ad/hEnd后 ,在Tca细胞和ECV细胞胞浆内有Endostatin蛋白合成。细胞培养液上清中Endostatin蛋白表达浓度呈时间剂量依赖关系 ,最高达到 5 97μg/L。Western blot检测显示Endostatin蛋白可在两种细胞中高效表达 ,相对分子质量与自然Endo statin蛋白一致 ,无杂合蛋白 ,呈剂量依赖关系 ,且持续到第 7天仍呈明显的Endostatin蛋白质条带。【结论】本实验制备的重组腺病毒Ad/hEnd能在舌癌细胞和血管内皮细胞中有效表达Endostatin蛋白 ,可用于抗     

腺病毒介导SARS病毒SN基因表达及其诱导的体液免疫

目的检测重组腺病毒Ad-SN在体内外的表达,初步探讨其在大鼠内诱导的体液免疫反应。方法Ad-SN感染Vero-E6细胞后用RT-PCR和WesternBlot法检测SN基因的表达;用WesternBlot法检测Ad-SN在大鼠皮下组织中的表达。Ad-SN皮下免疫大鼠,用ELISA法测定血清中抗SARS-CoVIgG水平。结果在Ad-SN感染的Vero-E6细胞中存在SN基因的转录,其mRNA量呈剂量依赖性;在Ad-SN感染的细胞、其培养上清及Ad-SN注射部位组织中均能检测到SN的表达。在Ad-SN免疫大鼠血清中可检测到高滴度SARS冠状病毒抗体(IgG)。结论Ad-SN能表达分泌型SN蛋白,并在大鼠体内诱导SARS-CoV特异的体液免疫反应。     

胰高血糖素瘤 1例报告及文献复习

1 临床资料 患者女性, 64岁.因多饮多食、消瘦 6月余,于 2001年 4月 5日入中山大学附属第一医院治疗.腹部 B超提示胰腺颈部肿物(单个,直径 1.5 cm,结节状,境界清楚,胰管扩张,内径 0.2 cm).内镜超声显示胰颈 1.4 cm?1.0 cm实性低回声肿物,边界清楚,与门静脉不粘连,胰头大小正常,周围未见淋巴结肿大,胆管不扩张.超声引导下多点穿刺活检见异型小细胞,核圆,深染,胞浆丰富,未见明显核分裂,细胞呈条索状排列,考虑为胰腺小细胞性肿瘤,神经内分泌性肿瘤可能性大. CT提示胰腺肿瘤.空腹血糖 10.9 mmol/L,胰功能二项(血淀粉酶 41 U/L,脂肪酶 117 U/L)正常,血胰岛素水平正常( 12 U/L),甘油三酯升高( 3.59 mmol/L).术前诊断为胰腺肿瘤,接受降糖治疗.