成年健康女性外周血免疫相关指标的分析

目的 探讨成年健康女性外周血中多项免疫相关指标合适的参考范围和临床价值.方法 采集21～40岁的356例成年健康女性外周血,测定血常规、T淋巴细胞亚群、自然杀伤(NK)细胞和B细胞的数量及百分比,采用免疫比浊法对免疫球蛋白(Ig)进行分析,采用95％ 置信区间表示各指标参考范围.结果 21～40岁成年健康女性白细胞计数的参考范围为(3.71～9.47)×109/L;CD3+CD4+绝对数参考范围为378.21～1170.02个/微升,百分比参考范围为23.73％ ～51.05％;NK细胞数参考范围为94.4～660.4个/微升;IgA、IgG、IgM的参考范围分别为1.10～4.01 g/L、9.51～15.80 g/L和0.64～2.57 g/L.结论 该研究全面评估了成年健康女性外周血免疫相关指标的均数和中位数,为基础研究和临床实验提供了较为规范的反映成年健康女性身体免疫状况的参考范围.     

胆碱相对水平在胶质瘤术前分级的价值及与细胞增殖活性的相关性研究

目的：探讨Cho相对水平在胶质瘤术前分级的价值及与肿瘤细胞增殖活性的相关性。材料与方法搜集行1H-MRS检查并经病理证实的脑胶质瘤患者58例,分为Ⅰ～Ⅱ级(低级别)、Ⅲ级、Ⅳ级3组,其中Ⅲ～Ⅳ级为高级别胶质瘤。选取肿瘤实质Cho/Cr最大处及对侧正常表现白质为感兴趣区,获得肿瘤实质Cho/NAA、Cho/Cr、rCho/NAA及rCho/Cr值。根据Ki-67标记指数将Ki-67分级定义为阴性(－)、弱阳性(+)、阳性(++)和强阳性(+++)4级。分析不同级别胶质瘤肿瘤实质Cho相对水平各参数的组间差异性并采用受试者特征曲线(ROC)确定诊断阈值。分析Ki-67级别与胶质瘤肿瘤级别、Cho相对水平各参数的相关性。结果Ⅲ级及Ⅳ级胶质瘤实质部分Cho相对水平各参数显著高于Ⅰ～Ⅱ级胶质瘤(P<0.05),但Ⅲ级与Ⅳ级间无统计学差异性(P>0.05),高低级别胶质瘤各参数组间有统计学差异性(P<0.05);区分高低级别胶质瘤的Cho相对水平各指标中,Cho/NAA的诊断准确率最高,为81.0%,诊断界值为3.04,rCho/Cr曲线下面积最大,为0.823。不同级别胶质瘤Ki-67分级存在显著差异性,两者呈显著正相关(r=0.741, P<0.05)。Cho/NAA、Cho/Cr及rCho/Cr与Ki-67分级呈轻度正相关(r分别为0.313、0.444和0.336,P均<0.05)。结论 Cho相对水平可作为反映胶质瘤细胞增殖状态、评价肿瘤恶性程度的指标。     

选择性β肾上腺素受体激动剂对人滑膜细胞增殖能力的影响

目的：观察β-肾上腺素受体( AR)激动药对人成纤维样滑膜细胞( FLS)增殖的作用,探讨β-AR信号对人FLS功能的影响。方法组织块培养法培养人FLS;使用肿瘤坏死因子α( TNF-α)作为刺激剂,MTT法分别检测β1-AR选择性激动剂多巴酚丁胺和β2-AR选择性激动剂沙丁胺醇对人FLS增殖作用的影响,并计算增殖抑制率;使用沙丁胺醇+β2-AR选择性拮抗剂ICI 118551观察其对FLS增殖功能的影响;Western blot法检测人FLSβ-AR、G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)和β抑制蛋白2(β-arrestin2)胞膜蛋白的表达水平。结果 TNF-α可以显著促进人FLS的增殖;β2-AR激动剂沙丁胺醇能明显抑制FLS的增殖,其拮抗剂ICI 118551能显著拮抗沙丁胺醇的作用;β1-AR选择性激动剂多巴酚丁胺对FLS的增殖无显著影响;TNF-α和沙丁胺醇均能显著降低β2-AR胞膜表达,上调 GRK2、β-arrestin2的胞膜表达。结论β2-AR信号的激活可以抑制FLS增殖;TNF-α和沙丁胺醇可以使GRK2、β-arrestin2的胞膜表达增加,β2-AR胸膜表达下降。     

新型蒽环类衍生物HYY-014大鼠体内药代动力学和组织分布的研究

目的：研究新型蒽环类衍生物HYY-014在大鼠体内的药代动力学和组织分布特征,为临床研究提供实验依据。方法大鼠单次尾静脉注射1．5 mg/kg的HYY-014后,采用LC-MS/MS法测定各时间点血浆和组织中HYY-014及其代谢物HYY-M3的浓度,药代动力学参数经DAS 3．0统计软件计算获得。结果采用统计矩方法处理药物浓度时间数据, HYY-014药代动力学参数 Cmax、T1/2、Vd、CL、AUC0-t、MRT0-t分别为(1628．6±618．6)μg/L、(24．4±3．6) h、(23．4±5．2) L/kg、(0．66±0．08) L/kg/h、(2219．5±276．9)μg/L ·h、(15．1±2．4) h;HYY-M3药代动力学参数Cmax、AUC0-t分别为(2．2±0．6)μg/L、(103．1±13．7)μg/L·h。静脉注射该药后,很快向机体的各组织广泛分布,且具有明显的靶向性,主要分布在脾、肾、肺、心脏、肝等组织,脑组织中浓度极低。结论静脉注射HYY-014组织分布广泛,具有明显的靶向性,肺、肝组织中的药物浓度均较高,不能通过血脑屏障。     

化疗联合部分肠外营养支持对非小细胞肺癌患者T淋巴细胞的影响

目的阐明不同营养支持方案对化疗期间非小细胞肺癌（non—small cell lung cancer，NSCLC）患者T淋巴细胞功能的影响，为NSCLC患者在化疗中优选营养支持方案提供理论依据。方法将93例NSCLC患者随机分为3组：对照组30例、低剂量部分肠外营养（partial parenteral nutrition，PPN）组32例和高剂量PPN组31例。各组均应用统一的化疗方案。化疗期间在饮食平行的基础上，对照组仅给予常规处理，PPN组予以静脉营养支持：低剂量组给予250ml／d 9-AA复合氨基酸，高剂量组给予500ml／d 9-AA复合氨基酸。分别于化疗前后检测CD3^＋、CD3^＋＋CD4^＋、CD3^＋＋CD8^＋和自然杀伤细胞（NK）等。结果化疗前后3组的NK细胞、CD3^＋、CD3^＋＋CD4^＋的降低（P〈0．05），其中对照组和低剂量组化疗后的NK细胞变化有统计学意义（P〈0．01）；高、低剂量组化疗前后CD3^＋、CD3^＋＋CD4^＋、CD3^＋＋CD4^＋／CD3^＋＋CD8^＋的变化与对照组相比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；高、低剂量组的CD3^＋＋CD8^＋、CD3^＋＋CD4^＋／CD3^＋＋CD8^＋的变化差异无统计学意义（P〉0．05）。结论化疗可加重NSCLC患者的营养不良和免疫抑制，而化疗期间给予一定量的9-AA复合氨基酸肠外营养支持可能对NSCLC患者免疫功能进一步恶化有一定的预防作用，对改善营养状况、提高T-淋巴细胞功能也有一定的作用。     

沙利度胺抑制TGF-β1诱导的HELF细胞中结缔组织生长因子基因启动子的激活*

 目的： 探讨沙利度胺（thalidomide, THD）对转化生长因子β1（transforming growth factor β1,TGF-β1）诱导的人胚肺成纤维细胞（human embryonic lung fibroblast, HELF）结缔组织生长因子（connective tissue growth factor, CTGF）基因启动子激活的影响。方法: 构建含有人类CTGF基因启动子的报告基因载体pGL3-CTGFP,将其瞬时转染HELF细胞,通过检测萤光素酶的活性,观察TGF-β1和THD对CTGF基因启动子活性的影响。结果: TGF-β1能以剂量依赖方式和时间依赖方式显著增加HELF细胞中报告基因的活性（P<0.05）,最佳剌激浓度是5 μg/L,萤光素酶相对活性为对照组的2.16倍,最佳剌激时间为12 h,萤光素酶相对活性为对照组的2.52倍;THD对报告基因的基础活性无明显影响（P>0.05）,但以剂量依赖方式显著抑制TGF-β1上调报告基因活性的效应(P<0.05)。结论: TGF-β1能以剂量依赖方式和时间依赖方式上调HELF细胞中CTGF基因启动子的活性,而THD能以剂量依赖方式抑制此过程。     

猕猴冠状动脉原代内皮细胞分离和培养及其功能验证

目的 建立非人灵长类动物冠状动脉原代内皮细胞的分离和培养方法,为研究人冠状动脉内皮细胞提供细胞模型。方法 无菌分离猕猴冠状动脉,胶原酶短暂消化后采用组织黏附法分离猕猴冠状动脉原代内皮细胞,利用流式细胞术检测并分选CD31阳性细胞,确定内皮细胞纯度;经前列腺素E₂(PGE₂)刺激后,以CCK-8法和高内涵细胞成像法分别检测猕猴冠状动脉原代内皮细胞活力和增殖能力、以Transwell法和Matrigel胶法分别检测猕猴冠状动脉原代内皮细胞迁移能力和体外成管功能。结果 猕猴冠状动脉原代细胞在10～14 d细胞覆盖培养瓶面积的80%左右,细胞呈不规则多边形和铺路石状。流式检测其纯度为31.7%左右,分选后利用流式细胞术再次检测内皮细胞纯度,达95%以上;PGE₂能显著上调猕猴冠状动脉原代内皮细胞的增殖、迁移和成管能力。结论 该研究成功建立猕猴冠状动脉原代内皮细胞分离培养方法,通过功能研究表明猕猴冠状动脉原代内皮细胞可以作为模拟人冠状动脉内皮细胞的体外细胞模型。     

猕猴下丘脑-垂体-肾上腺轴组织结构学特征观察

目的 观察猕猴下丘脑-垂体-肾上腺轴组织结构形态学特征,为模拟人的下丘脑-垂体-肾上腺轴的生理功能、病理反应提供参考。方法 猕猴安乐死后,完整取出下丘脑、垂体、肾上腺组织,经多聚甲醛(PFA)固定,制作石蜡切片及冰冻切片;HE染色观察基本结构及细胞分布状态;免疫组化法检测分泌的激素及受体;比较冰冻切片和石蜡切片染色的效果,对下丘脑组织的部分细胞组成进行鉴定。结果 下丘脑区域呈中空漏斗状,垂体状似豌豆,左右肾上腺位于两侧肝肾之间;HE染色显示下丘脑区域主要分布神经元和小胶质细胞,垂体分神经垂体、腺垂体,肾上腺由皮质和髓质构成;免疫组化检测到下丘脑分泌促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)并表达糖皮质激素受体(GR),垂体分泌促肾上腺皮质激素(ACTH)并表达促肾上腺皮质激素释放激素受体1(CRHR1)和GR,肾上腺表达促肾上腺皮质激素受体(ACTHR);冰冻切片免疫荧光的结果更好的显示出下丘脑中包含神经元和小胶质细胞。结论 本研究成功制作了猕猴下丘脑、垂体、肾上腺组织切片,并观察了其相关解剖学、形态学特征,为模拟人类下丘脑-垂体-肾上腺轴生理和病理反应提供参考方法。     

小檗碱抑制JAK2/STAT3信号通路缓解高糖诱导的足细胞EMT和凋亡

目的 探讨小檗碱(BBR)对高糖(HG)环境诱导的足细胞上皮间质转化(EMT)和凋亡的调节作用及部分机制。方法 将指数生长期的足细胞分为以下几组：正常组、高糖组、小檗碱(30、60和90μmol/L)给药组。流式细胞术检测足细胞凋亡情况;Transwell和划痕实验检测足细胞迁移能力;Western blot检测细胞凋亡蛋白Bim、足细胞EMT相关蛋白nephrin、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(vimentin)和酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导子和转录激活子3(STAT3)通路相关蛋白的表达水平;激光共聚焦法检测EMT相关蛋白nephrin、α-SMA和vimentin在足细胞中的表达情况。结果 流式细胞术结果表明BBR(30、60和90μmol/L)能够减少高糖环境下的足细胞凋亡;Transwell和划痕实验结果表明BBR(30、60和90μmol/L)能抑制高糖环境下的足细胞异常迁移;Western blot结果表明BBR(30、60和90μmol/L)可以降低高糖环境下足细胞中p-JAK2、p-STAT3、α-SMA、vimentin、Bim蛋白的表达,升高n...