pcDNA3-MAGE-1真核表达载体的构建及其在Hepal-6细胞中的稳定表达

目的:构建真核表达载体,并在小鼠肝癌Hepa1-6细胞中稳定表达,观察转染细胞的增殖能力和致瘤能力。方法:用PCR方法扩增SMMC-7721人肝癌细胞株MAGE-1全长序列,连接到真核表达载体pcDNA3中,构建真核表达pcDNA3-MAGE-1,脂质体法转染小鼠Hepa1-6细胞。G418筛选阳性克隆(Hepa1-6- MAGE-1),用RT-PCR和Western blotting检测阳性克隆中mRNA和蛋白质的表达;MTT 法检测Hepa1-6细胞和Hepa1-6- MAGE-1细胞生长和增殖的变化;分别以Hepa1-6细胞和Hepa1-6- MAGE-1细胞接种于C57BL /6j小鼠右侧背部皮下,观察Hepa1-6- MAGE-1细胞的致瘤能力。结果:构建MAGE-1的真核表达载体转染Hepa1-6细胞,PT-PCR与Western boltting检测分别在Hepa1-6- MAGE-1细胞中检测到人MAGE-1基因的mNRA和蛋白质的表达,两组细胞增殖无统计学差异;两组各10只小鼠均皮下成瘤,且肿瘤大小没有明显差异。结论:成功构建了真核表达载体pcDNA3-MAGE-1,获得了稳定表达人MAGE-1基因的小鼠肝癌Hepa1-6细胞株,并具有很好的增殖和致瘤能力。     

胃癌中幽门螺杆菌与凋亡相关蛋白p53、BcL-2、Fas表达相关性研究

目的：探讨幽门螺杆菌（Hp）感染在胃癌发生、发展中与p53基因、BcL-2基因、Fas基因表达的关系。方法：用Warthin-Starry染色法和快速尿素酶试验观察在不同胃病黏膜组织中Hp的感染情况,用免疫组化S-P法检测p53、BcL-2、Fas基因蛋白的表达。结果：胃癌及癌前病变（IM、Dys）组中Hp感染率明显高于慢性胃炎（CG）组,差异有统计学意义（P〈0.05）。p53、Bcl-2的阳性表达率在GC、Dys和IM组中明显高于CG组,差异有统计学意义（P〈0.05）;Fas在GC及Dys组中表达明显低于CG组,差异有统计学意义（P〈0.05）。在GC、Dys及IM中,Hp感染（＋）组中p53、Bcl-2基因蛋白表达阳性率高于Hp感染（-）组,Fas基因蛋白的表达低于Hp感染（-）组,差异有统计学（P〈0.05）。结论：Hp与胃癌的发生关系密切,在胃癌的发生发展过程中,Hp感染与细胞凋亡调控蛋白p53、Bc1-2及Fas之间存在相互协同的关系。     

不同专业《中药鉴定学》课程的开设与教学现状思考

《中药鉴定学》是鉴定和研究中药的品种和质量,制定中药标准,寻找和扩大中药资源的一门应用学科。本课程的主要教学目标对于中药专业学生来说是使学生掌握中药鉴定的基本理论、基本方法和基本技能,掌握来源鉴别、性状鉴别、显微鉴别、理化鉴别等四大基本鉴别方法,为从事中药的真伪鉴别、品种研究和制定质量标准打下良好的基础。随着教育事业的发展,我校应市场的需求,学校增开了不同专业,如营销专业、制剂专业、中     

中药标本馆在中医药教育中的地位和作用

中医药文化是中华文明的重要组成部分,中药标本馆承担了中医药教育和文化传承作用,文章重点介绍湖南中医药大学中药标本馆建设及其在中医药教育中的地位和作用,探讨中药标本馆的建设应如何满足中医药人才的培养,帮助人们更好地学习和传承祖国医药的精髓,服务社会。     

pcIL-18-MAGE-1共表达基因疫苗对肝癌细胞株SMMC-7721、Hepal-6增殖的影响

目的观察pc IL-18-MAGE-1共表达基因疫苗接种小鼠所引起的免疫应答情况以及对肝癌细胞株SMMC-7721、Hepal-6增殖抑制情况,探究pc IL-18-MAGE-1共表达基因疫苗抗肿瘤作用。方法用pc IL-18-MAGE-1基因疫苗免疫小鼠,同时设空白对照组和阴性对照组,免疫后收集脾细胞作为效应细胞,分别作用于靶细胞即肝癌细胞株SMMC-7721、Hepal-6。应用流式细胞仪(FCM)检测小鼠T细胞亚群情况及自然杀伤(NK)细胞活性,MTT法检测肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对靶细胞的杀伤作用。结果与对照组比较,共表达pc IL-18-MAGE-1基因疫苗对靶细胞均有明显的杀伤作用(P<0.01);对SMMC-7721细胞杀伤作用高于Hepal-6细胞(P<0.05)。免疫组CD4+、CD8+、CD4+/CD8+均高于阴性对照组(P<0.05)。结论 pc IL-18-MAGE-1共表达基因疫苗通过同时激活CD4+T细胞及CD8+T细胞、增加NK细胞活性及诱导肿瘤特异性CTL直接杀伤肿瘤细胞,发挥抗肿瘤作用。     

急性冠脉综合征患者肌钙蛋白I、超敏CRP、脑钠肽水平变化及临床意义

急性冠脉综合征（ACS）,是一种因为冠状动脉血流突然受阻、不稳定斑块糜烂和破裂等引发的急性心肌缺血的现象[1]。该病是一个范围较广的连续疾病谱,处于动态的、不稳定变化中,其发病率和死亡率呈逐年上升的趋势,得到了越来越广泛的关注。ACS是一类包括不同临床特征、危险性和预后性的症候群,肌钙蛋白I（cTnI）是心肌仅有的特异性抗原,为心肌损伤的标志物,具有高度的灵敏性和特异性;     

老年患者呼吸道嗜血杆菌的分离及耐药性分析

目的 了解老年呼吸道嗜血杆菌的分离、鉴定及其β-内酰胺酶的产生率和耐药性.方法 采用自配的专用嗜血杆菌培养基分离细菌,在血琼脂平板和M-H平板上做卫星试验对分离出的细菌进行鉴定,阳性者部分用NHI卡进行确认.用头孢硝噻吩法测试β-内酰胺酶的产酶率,并用琼脂扩散法进行药敏试验.结果 1 138份标本共检出119株嗜血杆菌,检出率10.5%,其中流感嗜血杆菌25株（21.0%）,副流感嗜血杆菌94（79. 0% ）株,嗜血杆菌β-内酰胺酶的产生率为23.5%;左氧氟沙星、氨苄西林、复方新诺明对嗜血杆菌的耐药率较高,为15.0%～54.6% （流感嗜血杆菌）、19.2%～56.5%（副流感嗜血杆菌）;而阿莫西林/克拉维酸、氨曲南和二代三代头孢对嗜血杆菌的耐药率则较低（均＜10 %）.结论分离出的嗜血杆菌主要以副流感嗜血杆菌为主,对阿莫西林 /克拉维酸、氨曲南和二代三代头孢菌素的敏感性高于其他抗生素,可作为首选治疗用药.     

ＷＡＦ１基因检查在胃癌诊断中的意义

目的 探讨ＷＡＦ１基因与胃癌的关系。方法 对４１例胃癌组织和２６例癌旁非病变粘膜分别作冰冻切片并提取组织总ＲＮＡ,应用细胞原 杂交技术及ＲＴ－ＰＣＲ结合ＳＳＣＰ方法,联合检测ＷＡＦ１与p５３基因异常及表达情况。结果 胃癌组织ＷＡＦ１基因缺失率和mＲＮＡ不表达率分别为３４.４％和４０.６％。明显高于癌旁非病变粘膜（Ｐ＜０.０５）;胃癌组织p53基因突变率和mＲＮＡ过表达率也明显高于癌旁非病变粘膜（Ｐ＜０.０５）。WAF1基因缺失和mＲＮＡ不表达与胃癌的分化程度和浸润深度有关。结论 胃癌的发生和发展与p53基因突变以及ＷＡＦ１mＲＮＡ不表达有关,胃癌组织中p５３失活与ＷＡＦ１mＲＮＡ不表达关系密切。检测癌组织中ＷＡＦ１变化可为胃癌的诊断、病理分期、预后评估和基因治疗提供可靠依据。     

胰岛素生长因子结合蛋白-2 siRNA表达载体的构建及鉴定

目的构建针对胰岛素生长因子结合蛋白-2(IGFBP-2)的小干扰RNA(siRNA)表达载体,研究载体介导的RNAi技术对人U251脑胶质瘤细胞株中IGFBP-2表达的抑制作用。方法根据GenBank提供的IGFBP-2基因(NM-000597)核苷酸序列及siRNA的设计原则,设计合成4对带有BamHⅠ、HindⅢ酶切位点的发夹结构寡核苷酸序列,筛选得到576⁵94 nt、908594 nt、908⁹26 nt、938926 nt、938⁹56 nt 3个19 bp片段靶序列,同时随机组合出一条无关序列,应用限制性内切酶酶切和测序技术鉴定重组克隆。用脂质体介导转染人U251胶质瘤细胞株,采用RT-PCR和Western印迹方法检测细胞IGFBP-2 mRNA和蛋白表达。结果酶切筛选得到4个目的片段的阳性克隆,测序证实重组表达载体中插入序列与设计一致。RT-PCR和Western印迹检测显示构建的siRNA表达载体可显著降低U251细胞中IGFBP-2 mRNA和蛋白表达水平。结论成功构建载体介导的IGFBP-2靶向RNA干扰重组体,并能有效抑制U251细胞中IGFBP-2基因的表达。     

乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群和Th1／Th2类细胞因子的表达及临床意义

目的 研究乙肝感染患者外周血T淋巴细胞亚群和Th1/Th2类细胞因子的表迭及临床意义.方法 通过流式细胞检测技术,对乙型肝炎患者和正常人外周血T淋巴细胞亚群(CD3+,CD4+,CD8+)及细胞因子Th1(IFN-γ),Th2(IL-4)进行检测,并进行比较.结果 与正常对照组比较.慢性乙型肝炎组CD4+细胞数下降,CD8+细胞数增加,但结果之间差异无统计学意义(P>0.05); 肝硬化组CD3+,CD3+CD4+细胞减少,CD3+CD8+细胞增加,CD3+CD4+/CD3+CD8+比值下降,结果之间的差异有统计学意义(P<0.05).慢性乙型肝炎组和肝硬化组IFN-γ表达百分率高于正常对照组(P<0.05),而IL-4表达百分率与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 乙型肝炎患者免疫功能紊乱,在疾病的发生发展中Th1类细胞因子可能起了一定作用.