DNA修复基因ERCC2 rs50871遗传多态性的实时荧光定量PCR检测

目的应用ABI7300实时荧光定量PCR-单核苷酸多态(SNP)等位基因分型技术建立准确、快速、经济、适应大样本检测SNP等位基因分型的改良方法。方法采用缩小反应的体系(由推荐的25μlPCR反应体系降至为10μl),降低探针的浓度和自动软件SNP分型方法,检测我国东北地区321例汉族无亲缘关系健康个体DNA样品的DNA修复基因ERCC2 rs50871遗传多态性。结果经改良方法检测获得了理想的等位基因分型,与DNA测序结果一致。ERCC2rs50871T等位基因频率为0.749,G等位基因频率为0.251,基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡定律(χ2=0.003,df=1,P=0.96)。该位点等位基因频率分布与NCBI dbSNP数据库中中国北京汉族(HCB)群体的分布相似(P=0.06);但与HapMap-CEU(CEPH样品:祖先为北西欧人的犹他州居民)及HapMap-YRI(尼日利亚伊巴丹的约鲁巴人)的分布差异有统计学意义(均P0.001)。结论本实验建立的改良方法经济实用,适合人类群体遗传学及流行病学大样本调查。     

ZSWIM5在人非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的探索ZSWIM5在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及临床意义。方法运用免疫蛋白印迹检测20例NSCLC患者肿瘤标本及瘤旁正常肺组织中ZSWIM5的表达;在139例NSCLC病人的石蜡包埋标本中运用免疫组织化学染色法检测ZSWIM5的表达,对其表达与患者预后进行生存分析,进一步通过在线数据库进行大数据分析及结果比对。结果与邻近的非肿瘤肺组织相比,NSCLC组织中ZSWIM5的表达显著下降(P0.02),非肿瘤组织中ZSWIM5的阳性率(76.67%)显著高于肿瘤组织中ZSWIM5的阳性率(40.29%)。ZSWIM5的阴性表达与高TNM分期、淋巴结转移和不良预后显著相关。结论 ZSWIM5在NSCLC中表达下调,且与肿瘤恶性演进及患者不良预后相关,提示其在NSCLC中发挥抑癌作用。     

巢式聚合酶链反应检测人类DNA修复基因:ERCC2/XPDexon 6突变

背景与目的：探讨血样DNA来源困难及DNA产量低的情况下,获得理想的可供突变分析的PCR产物的方法。材料与方法：应用巢式聚合酶链反应(NPCR)．限制性片断长度多态(RFLP)技术检测了人类微量DNA样品的DNA修复基因：ERCC2／XPD exon 6的单核甘酸多态(SNP)。结果：该位点群体基因分型结果显示：自身平衡检验结果符合Hardy-Weinberg遗传平衡法则。结论：巢式PCR技术在扩增微量DNA、分析突变的实验中较一般单次扩增PCR技术更具有敏感性高,特异性强的优点。     

女性肺癌易感性与DNA修复基因多态性

目的 研究非吸烟女性群体中DNA修复基因XRCCI(X-ray repair complementing defective repair in Chinese hamster cell 1)同义突变多态与肺癌遗传易感性.方法 选择肿瘤医院55例非吸烟女性肺癌患者,74名正常对照者进行PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)分型,分析XRCC1 Pro206Pro和Gln632Gln多态/单体型与肺癌的关联.结果 XRCC1 Pro206Pro(G)变异等位基因携带者与从野生等位基因纯合子个体相比较,肺癌发生风险为3.93倍(OR=3.93,95%CI=1.47～10.52,P＜0.004);单体型在肺癌组与对照组之间的总体分布差异有统计学意义(P=0.005);由2个同义突变等位基因结合的单体型1[Pro206Pro(G)-Gln632Gln(A)]是高风险性单体型(OR=4.04,95%CI=1.36～11.96,P=0.007);2个多态之间存在强烈的连锁不平衡(D'=0.702).结论 非吸烟女性群体中,XRCC1 Rro206Pro(G)等位基因及含其等位基因的单体型可能是肺癌易感性的重要因素.     

胸腔镜肺癌根治术患者围术期机体免疫与应激状态变化

目的：观察胸腔镜肺癌根治术患者围术期机体免疫与应激状态的变化情况。方法：选取于本院进行手术治疗的66例肺癌患者为研究对象,将其根据手术方式分为对照组（开胸肺癌根治术组）33例和观察组（胸腔镜肺癌根治术组）33例,然后将两组术前2d及术后3、10d时的红细胞免疫指标、细胞免疫指标及应激激素指标进行比较。结果：观察组术后3、10d时的红细胞免疫指标、细胞免疫指标均优于对照组,应激激素指标低于对照组,且观察组术后3d与术前2d及术后10d比较,差异均具有统计学意义（P〈0．05）。结论：胸腔镜肺癌根治术患者围术期机体免疫与应激状态的波动均小于开胸手术的患者,其对患者的不良影响更小。     

ZSWIM5抑制非小细胞肺癌细胞的增殖、集落形成和迁移能力

目的研究ZSWIM5对非小细胞肺癌细胞的增殖、集落形成和迁移能力的作用。方法通过质粒转染和特异性siRNA干扰实现在非小细胞肺癌细胞系A549和H1299中双向调控ZSWIM5的蛋白表达水平,并应用免疫蛋白印迹验证。运用MTT实验检测ZSWIM5表达水平对肺癌细胞增殖能力的影响;运用集落形成实验检测ZSWIM5表达水平对肺癌细胞集落形成能力的影响;运用划痕实验检测ZSWIM5表达水平对肺癌细胞迁移能力的影响。结果 MTT和克隆形成实验表明,转染ZSWIM5可以抑制肺癌细胞的增殖和集落形成,而特异性干扰ZSWIM5促进细胞的增殖和集落形成。划痕实验表明转染ZSWIM5可以抑制肺癌细胞的迁移,而特异性干扰ZSWIM5促进细胞迁移能力。结论 ZSWIM5抑制非小细胞肺癌细胞的恶性表型,可能在肿瘤演进过程中发挥抑癌作用。     

肺癌XPD基因表达与微卫星不稳定关系的探讨

目的:探讨肺癌中XPD基因表达及其与微卫星不稳定(MSI)的关联情况.方法:采用微卫星分析和RT-PCR方法检测了5个微卫星标记在肺癌中的状况及XPD转录水平的表达.结果:27.16%(22/81)的肺癌出现至少1个微卫星的不稳定,但是XPD没有明显的mRNA表达下调.MSI与肺癌分期、分级、淋巴结转移和患者性别等参数之间无相关性,P>0.05.结论:XPD基因微卫星的不稳定是肺癌的频发事件,与XPD基因表达可能不存在必然联系.     

CYP1A1基因I462V多态与非小细胞肺癌的相关性

目的 探讨CYP1A1基因1462V多态性与非小细胞肺癌的相关性.方法 采用病例对照研究,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性对72例非小细胞肺癌患者(病例组)和90例正常对照(对照组)CYP1A1基因I462V多态进行检测,分析基因型频率和等位基因频率在病例组和对照组的分布,比较不同基因型与非小细胞肺癌患病风险的关...     

5-脱氧杂氮胞苷对人肺腺癌细胞系增殖的影响

目的:探讨DNA甲基化异常与肺腺癌间的相关性及5-脱氧杂氮胞苷对肺癌细胞株增殖的影响及其机制。方法:用5-脱氧杂氮胞苷处理肺腺癌细胞株SPC-A-1,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率,Western-blot检测Apaf-1蛋白表达的变化,RT-PCR法比较Apaf-1基因和甲基转移酶mRNA表达量的变化。结果:5-脱氧杂氮胞苷处理36h后Apaf-1蛋白和mRNA表达增加,而DNA甲基转移酶mR-NA表达明显降低;G0/G1期细胞比例增加到(80·2±2·88)%,S期细胞比例降低至(6·4±0·62)%,G2/M期细胞比例增加到(13·4±0·93)%,凋亡率增加到(13·5±0·97)%。结论:肺腺癌的发生与DNA甲基化异常有关,甲基化酶抑制剂5-脱氧杂氮胞苷可能通过抑制甲基转移酶抑制抑癌基因启动子区域的高甲基化,恢复其生长调控功能,从而使肺癌细胞株的恶性生物学行为发生逆转。